Programa de Pós-Graduação em Biociências

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Análise bioquímica e inflamatória de mulheres com sobrepeso submetidas a sessões de ultrassom focalizado e exercício físico
(2020) Fagundes, Viviane Oliveira; Romão, Pedro Roosevelt Torres; Peres, Alessandra
Nas últimas décadas houve um aumento expressivo da procura por procedimentos não invasivos para a redução de gordura localizada e modelagem corporal. Tecnologias como ultrassom, radiofrequência, laser de baixa potência e criolipólise estão entre os mais utilizados. O ultrassom focalizado de alta intensidade, popularmente conhecido como HIFU, causa a destruição do tecido adiposo subcutâneo alvo através da cavitação e hipertermia, sem afetar os tecidos adjacentes. Apesar da literatura existente, não existem publicações pertinentes da associação do ultrassom focalizado com o exercício físico, prática fundamental para eliminação segura de gorduras. Assim, este trabalho teve como objetivo avaliar os efeitos da aplicação do ultrassom focalizado associado ou não ao exercício físico sobre marcadores bioquímicos e inflamatórios de mulheres com sobrepeso. Neste estudo foram recrutadas 22 mulheres, entre 20 e 50 anos, com IMC entre 25 à 29,9 kg/m2, que foram divididas em dois grupos, HIFU (n=12) e HIFU+EX (n=10). Ambos os grupos foram submetidos a cinco sessões semanais (1 vez/semana) de ultrassom focalizado de alta intensidade. As participantes alocadas no grupo HIFU+EX realizaram 45 minutos de exercício físico moderado em esteira imediatamente após a aplicação do ultrassom focalizado. Os parâmetros antropométricos foram medidos e amostras sanguíneas foram colhidas antes e sete dias após a última sessão. O perfil lipídico e marcadores hepáticos foram quantificados no soro através do equipamento automatizado BS120. A quantificação sérica das citocinas IL-6 e TNF-α foi determinada por meio de kits comerciais de ELISA. Os níveis plasmáticos de óxido nítrico foram determinados através do método de Miranda (2000) seguido o Ensaio de Griess e leitura em espectrofotômetro. A peroxidação lipídica indireta foi avaliada em plasma através do teste determinação de substâncias reativas ao ácido tiobarbitúrico. Após o protocolo, apenas no grupo HIFU+EX houve redução significativa da prega abdominal (p>0,049). O grupo HIFU apresentou aumento significativo nos níveis de colesterol (p<0,049). A concentração de óxido nítrico reduziu significativamente no grupo HIFU (p<0,031) e no grupo HIFU+EX (p<0,029). Os demais parâmetros avaliados não apresentaram alterações expressivas em ambos os grupos. Na análise das relações, o grupo HIFU+EX apresentou correlações positivas entre colesterol e perimetria abdominal (r=0,726; p<0,018), IL-6 e TBARs (r=0,887; p<0,001) e TNF- α e dobra abdominal (r=0,774; p<0,005). Na comparação entre grupos, não houve diferença estatística nas variáveis avaliadas. Os resultados encontrados evidenciam que a associação do ultrassom focalizado de alta intensidade e exercício físico podem contribuir para uma redução de gordura localizada mais segura, sem alterações expressivas no perfil lipídico e inflamatório de mulheres com sobrepeso. Mais estudos são necessários para elucidar e determinar associações de novos protocolos para a redução do tecido adiposo cutâneo, sem causar prejuízos à saúde.
Análise da participação dos neutrófilos na progressão dos glioblastomas
(Wagner Wessfll, 2020) Rubenich, Dominique Santos; Braganhol, Elizandra
Células imunes apresentam plasticidade funcional influenciada por fatores externos capazes de se alterar fenotipicamente, favorecendo a progressão do tumor. Os neutrófilos possuem um espectro de ativação comumente denominado antitumoral/pró-inflamatório (N1) e imunossupressor/pró-tumoral (N2). A presença dessas células no microambiente tumoral é essencial para a formação de um sítio propício para o desenvolvimento das células tumorais. No Glioblastoma, o nicho tumoral formado impacta diretamente na malignidade da doença. Este tipo de tumor cerebral é o mais frequente diagnosticado e possui alta mortalidade, com sobrevida média de 15 meses após a descoberta da doença. Considerando os fatos apresentados, esse estudo visa observar a participação dos neutrófilos na progressão dos glioblastomas. Para isso, foram realizados testes experimentais in vitro com linhagem celular de glioma humano (U87MG) e neutrófilos de voluntários saudáveis, e avaliados a capacidade de ativação das células imunes em diferentes condições de cocultivo, bem como a influencia na viabilidade tumoral. Para os neutrófilos, a migração é um fator importante e bem descrito na literatura a participação da sinalização purinérgica; foi realizada uma revisão de literatura sobre o assunto utilizando sobre os estudos com células humanas. De forma geral, foi observado mudanças morfológicas importantes entre os fenótipos induzidos e em cocultivo, bem como maior ativação imune na presença de células tumorais, confirmando a importância da comunicação intercelular.
Análise da relação de soropositividade pra citomegalovíryus e o perfil de linfócitos t em indivíduos com sobrepeso ou obesidade
(2023) Lima, Diego Del Duca; Rodrigues Júnior, Luiz Carlos; Peres, Alessandra; Programa de Pós-Graduação em Biociências
O citomegalovírus humano (HCMV) ou herpes vírus humano tipo 5 (HHV-5) é um vírus altamente prevalente na espécie humana, sendo endêmico em todo o mundo, estando envolvido em inúmeras doenças leves ou severas. Após a primeira infecção, o HCMV permanece em estado de latência no hospedeiro, a partir do qual pode ser reativado quando ocorre uma baixa na resposta imunológica ou em situações de estresse. Estudos recentes indicam que o processo inflamatório pode estar associado a reativação do HCMV no hospedeiro. A obesidade é um problema mundial relacionado a um quadro inflamatório crônico e subclínico, devido a produção de citocinas e células com perfil inflamatório, predispondo pacientes obesos ao desenvolvimento de uma série de doenças crônicas. Um indivíduo obeso, e no curso de uma reativação de HCMV pode apresentar características diferenciadas no processo inflamatório, caracterizadas por um sinergismo da reposta antiviral e inflamação. Assim, nesse estudo foi realizada uma análise da soropositividade para HCMV em indivíduos com diferentes níveis de sobrepeso, e sua relação com parâmetros bioquímicos, inflamatórios e os marcadores fenotípicos de ativação linfocitária. O projeto foi aprovado pelo comitê de ética da UFCSPA com o número 63282416.6.0000.5345. Os dados foram obtidos a partir de um banco de dados com 113 indivíduos que foram classificados em eutróficos, sobrepeso e obesos de acordo com o IMC. Todos os participantes eram do sexo masculino com média de idade de 34,72 anos. Foram avaliados dados relacionados ao perfil bioquímico como glicose, triglicerídeos, colesterol, HDL e LDL ao perfil fenotípico de células T de acordo com os marcadores+, CD4, CD8, CD4+CD25+CD39+, CD4+CD25-CD39+, CD8+CD27+CD28+, CD8+CD27-CD28-Os resultados indicam que a presença do HCMV contribui para um aumento na frequência das células T de memória altamente diferenciadas, com fenótipo senescente, os indivíduos com sobrepeso e obesidade
Análise da sinalização purinérgica em células epidermais humanas após exposição à radiação ultravioleta
(2021) Nunes, Walquíria Souza; Wink, Márcia Rosângela; Bertoni, Ana Paula Santin
A exposição cutânea à radiação ultravioleta (RUV) é um efeito ambiental inerente à vida humana. Já foi observado, em estudos in vitro, que essa exposição induz a liberação de ATP de células epidermais, principalmente em queratinócitos. O ATP é fundamental para a célula, pois fornece a energia livre de que essas células necessitam para realizar suas atividades. Entretanto, sua presença no espaço extracelular possibilita seu desempenho como molécula de sinalização intercelular. Essa comunicação ocorre através de nucleotídeos e nucleosídeos, dos receptores (divididos em família P1 e P2), bem como das ectonucleotidases que atuam hidrolisando os ligantes, regulando assim a sua disponibilidade. Todos esses componentes formam a sinalização purinérgica, sendo esse sistema envolvido em vários processos patofisiológicos cutâneos. Assim, nosso objetivo foi avaliar se a exposição à radiação ultravioleta é capaz de modular componentes da sinalização purinérgica. Para isso, foi realizada uma revisão sistemática e uma análise in silico para verificação da modulação de purinoreceptores e ectoenzimas após a exposição à RUV. Ademais, foi realizado experimentos de bancada com o intuito de avaliar a atividade enzimática em células Hacat após exposição à UVA e UVB. Os resultados oriundos da revisão sistemática apontam que o ATP é rapidamente liberado de células epidermais, queratinócitos e melanócitos, após a exposição a RUV (1-10 minutos); essa molécula age como um mediador pró-inflamatório induzindo a liberação de IL-1β, IL-6 e COX-2 de queratinócitos e, somado ao caráter inflamatório, o ATP possui um papel na melanogênese e esse processo parece ser dependente do receptor P2X7. As análises in silico não indicam modulação em nenhum elemento da sinalização purinérgica (purinoreceptores ou ectonucleotidases) em melanócitos após a exposição única à RUV nas condições investigadas. Por outro lado, queratinócitos irradiados apresentam um aumento na expressão gênica de P2X4, P2Y11 e P2Y13, e diminuição na expressão de P2Y2. Além disso, as análises in silico indicam aumento nos níveis dos genes ENPP1 e ENTPD4, além de sugerir diminuição nos níveis de ENTPD6. A partir dos resultados experimentais, não foi observado modulação no gene NT5E, que codifica CD73, após única exposição à radiação ultravioleta em queratinócitos. Queratinócitos imortalizados expostos à 3 e 6J/cm2 não apresentam modulação na expressão de NT5E quando comparados ao grupo controle. Esses resultados sugerem o envolvimento da sinalização purinérgica na sinalização parácrina entre o melanócito e o queratinócito após à radiação ultravioleta. Uma melhor compreensão dessa modulação poderá contribuir para um entendimento mais profundo de diversas alterações cutâneas, bem como auxiliar na compreensão de processos fisiológicos, como a pigmentação. Esse conhecimento poderá ser utilizado tanto para uma melhor condução de tratamentos dermatológicos, quanto para elaboração de produtos na indústria farmacêutica voltados para a área estética.
Análise de parâmetros bioquímicos de fêmeas submetidas à dieta hipercalórica ou restritiva durante a gestação e a lactação
(2017) Andrade, Andressa Alves de; Giovenardi, Márcia; Almeida, Silvana de
A dieta materna antes e durante a gestação pode influenciar na saúde da mãe e do feto bem como em futuras da prole. Observando-se as preferências alimentares atuais, com alimentos altamente calóricos, nosso estudo teve como objetivo analisar parâmetros bioquímicos no sangue e nos tecidos metabólicos, em fêmeas que durante a gestação e a lactação foram submetidas à dieta hipercalórica ou restritiva. Foram estudadas camundongos fêmeas isogênicas (n=24), da linhagem BALB/c (60 dias de idade, peso entre 18-25 g), provenientes do biotério da UFCSPA. Foram separadas em grupos de acordo com a dieta que receberam: dieta padrão ad libitum (CONT), dieta restritiva (RD, 30% Kcal a menos do que a dieta padrão), dieta hipercalórica (HD: acréscimo de 60% Kcal comparada a padrão). A adaptação à dieta foi de 25 dias e, a seguir, foram acasaladas. O de peso foi aferido periodicamente e o índice de Lee calculado. No 22° DDP fez-se eutanásia dos animais, coletamos o sangue e os tecidos adiposo, hepático e muscular. O perfil lipídico e glicídico foi analisado utilizando-se kits comerciais e, nos tecidos metabólicos, foi analisado: atividade das enzimas catalase (CAT) e superóxido dismutase (SOD), geração de espécies reativas de oxigênio por ensaio de oxidação de diacetato de dihidrodiclorofluoresceína, peroxidação lipídica por TBARS e quantificação do nível de proteína NF-kB.Os dados foram expressos por média ± SEM e analisados pela variância única seguindo o teste de comparação múltipla de Dunnett (p <0,05). A análise sérica mostrou um aumento significativo nos triglicerídeos do grupo HD em comparação com o CONT e o RD. Os outros parâmetros do perfil lipídico e a glicemia permaneceram similares entre os 3 grupos. O tempo (dias) para as fêmeas emprenhar foi mais longo no RD comparado ao grupo CONT, embora não tenha sido observada diferença significativa no número de camundongos por fêmea entre os grupos avaliados, bem como no aumento de peso das ninhadas. Nossos resultados mostraram que as modificações da dieta afetaram mais significativamente os parâmetros de estresse oxidativo no fígado e nos músculos do que o tecido adiposo em animais expostos à dieta hipercalórica. A diminuição da superóxido dismutase está fortemente correlacionada ao nível EROs em todos os tecidos avaliados, com um perfil de correlação muito semelhante nos tecidos hepático e muscular.
Análise funcional e estrutural da proteína Kin3 em Saccharomyces cerevisiae
(2017) Morás, Ana Moira; Moura, Dinara Jaqueline
A proteína Kin3 é a única representante da família das NIMA-related kinases em Saccharomyces cerevisiae. Tendo em vista a existência de poucos estudos sobre a possível função da proteína Kin3 na resposta a danos no DNA e a inexistência de estudos sobre sua estrutura, o objetivo deste trabalho foi elucidar o envolvimento da proteína Kin3 na reposta a danos no DNA in vitro, considerando interações genéticas e compreendendo aspectos estruturais em modelos in silico. Primeiramente foi avaliado o papel da Kin3 na resposta a metil metano sulfonato (MMS), explorando interações previamente descritas com Mre11 e Srs2. Os resultados mostraram que a estratégia de tratamento de 2 h de exposição seguindo de 1 h de recuperação foi eficiente em induzir quebras no DNA. Adicionalmente, um perfil epistático de Kin3 com Mre11 e Rad52 foi encontrado, sugerindo um possível envolvimento com a via de recombinação homóloga. Esta hipótese foi corroborada com um efeito aditivo na taxa de mutação do duplo mutante kin3∆rad52∆. Posteriormente, foi realizada a modelagem da estrutura da proteína Kin3, com e sem ATP e cofator (Mg+2) e as conformações do loop de ativação após simulação por dinâmica molecular foram exploradas. Os principais achados mostraram a disrrupção de uma pequena estrutura de α-hélice na ausência de ATP, indicando que a ligação com o nucleotídeo é importante para estabilizar esta região. Esta modificação não aproximou os resíduos de serina e treonina localizados no loop de ativação do fosfato γ do ATP, o que permitiria a reação de catálise, não modificou a posição do motivo DFG ou o nucleotídeo para a posição na forma ativa. Assim, neste trabalho foi explorada a função da proteína Kin3 na resposta a DSBs, sugerindo um envolvimento mais significativo com a via da recombinação homóloga. Adicionalmente, foi estabelecida pela primeira vez informações sobre a estrutura da Kin3.
Análise molecular de variantes de grupos sanguíneos em populações indígenas
(2018) Rodrigues, Mirelen Moura de Oliveira; Fiegenbaum, Marilu; Almeida, Silvana de
A frequência dos alelos de grupos sanguíneos é diferente de acordo com a origem étnica da população, o que torna importante a determinação da variabilidade desses alelos em tribos indígenas. Devido as características culturais, que, por vezes, podem ser somadas à localização geográfica de difícil acesso, o isolamento, endocruzamentos e efeito do fundador podem propiciar o aumento da frequência de genótipos que são raros nas demais populações. Esta condição tem impacto direto na prática transfusional, visto que estes genótipos raros não são comuns na população de doadores de sangue. A presente dissertação analisou a variabilidade genética em 6 marcadores relacionados a expressão de antígenos de grupos sanguíneos (Diego, Kell, Duffy, Kidd e MNS) que apresentam impacto na prática transfusional em indivíduos de tribos indigenas Kaingang (n = 72) e Guarani (n = 234) amostradas no período entre 1990 — 2000. A variabilidade observada nesses grupos foi relacionada com a observada em tribos Kaingang e Guarani amostradas no período de 1950-1960, com o banco de dados 1000 genomas (população de Americanos, Asiáticos, Europeus e Africanos) e com doadores de sangue brasileiros das regiões Sul, Sudeste, Norte e Nordeste. A análise das variantes genéticas de grupos sanguíneos foi realizada utilizando a técnica de PCR em tempo real, com sondas de hidrólise do sistema TaqManB (Thermo Fisher) para o sistema Diego c.2561C>T (D/*01/*02, rs2285644), Kell c.578 C>T (KEL*01/*02,rs 8176058), Duffy c.125 A>G e c.1-67T>C (FY*01/*02, rs12075; FY*02N.01, rs2814778), Kidd c.838G>A (JK*01/*02, rs1058396) e MNS c.143T>C (GYPB*S/GYPB*s, rs7683365). As frequências alélicas foram comparadas utilizando o teste de Qui- quadrado com correção de Yates. Todas as frequências genotípicas estão de acordo com o esperado para populações em equilíbrio de Hardy-Weinberg. Quando comparados os resultados com amostras de Kaingang e Guarani coletadas no período de 1950-1960 observamos diferenças significativas (p < 0,05) para os alelos do sistema Diego (D/*01) e Duffy (FY*01) sugerindo um processo de miscigenação. Para todos os alelos analisados encontramos diferença significativa (p < 0,05) entre as tribos indígenas avaliadas e os dados de genotipagem de doadores de sangue brasileiros (Rio Grande do Sul, Paraná, Santa Catarina, São Paulo, Minas Gerais, Bahia e região do Norte do Brasil — ntotal= 3215), com exceção da amostra de doadores de sangue descendentes de Japoneses, principalmente para a tribo Guarani. De acordo com os resultados obtidos através da análise de Fsr, com intervalo de confiança de 95%, a diferenciação genética foi maior entre as populações de Kaingang e Africanos (Fs7T= 0,168) e de Guarani e Africanos (FsT= 0,190) do que com as outras populações avaliadas pelo Projeto 1000 Genomas (Ntotal = 2504). Embora não exista grande diferenciação genética, para as variantes analisadas, entre os ameríndios do presente estudo quando comparados com populações de Europeus, Asiáticos e Americanos, as diferenças de frequências alélicas e genotipicas entre as populações indígenas e de doadores de sangue devem ser consideradas. Isso porque estas diferenças podem impactar na prática transfusional, levando a aloimunização de indígenas que necessitem de transfusão sanguínea e, também, na dificuldade de encontrar doadores de sangue compatíveis com um receptor de hemocomponentes indígena. Com base nos dados gerados pelo presente estudo, há evidências que haverá um aumento de probabilidade de se encontrar um doador de sangue compatível para transfusão sanguínea em pacientes Ameríndios entre os doadores de sangue descendentes de asiáticos.
Aplicação da nanotecnologia como ferramenta de drug delivery no estudo de terapias moleculares e farmacológicas para o câncer de pele
(2022) Ghisio, Estefany Carolina; Wink, Márcia Rosângela; Paese, Karina
O câncer de pele é um dos tipos de câncer mais comuns e os tipos mais frequentes são o carcinoma escamoso, o carcinoma basocelular e omelanoma. Esta patologia ocorre através de um crescimento anormal das células da pele e se detectada precocemente pode ser tratada de forma eficaz. Apesar da melhora nos desfechos dos pacientes, aumentando as taxas de sobrevida global, os tratamentos apresentam algumas particularidades, como respostas diferenciadas em diferentes tipos de tumor e aquisição de resistência ao tratamento pelo paciente e alguns efeitos adversos. Dessa forma, a nanotecnologia se apresenta como uma alternativa visando o aprimoramento dos tratamentos antitumorais. Esta abordagem pode aumentar a biodisponibilidade das moléculas terapêuticas em alvos específicos reduzindo os efeitos adversos do tratamento resultando em uma maior eficácia terapêutica. O objetivo deste trabalho foi realizar uma revisão na literatura acerca da utilização da nanotecnologia associada a diferentes terapias e aplicadas no câncer de pele. Além disso, esse trabalho teve como objetivo desenvolver uma nanopartícula polimérica de Eudragit® RS 100 com estabilidade eletrostática. Acerca da revisão de trabalhos que utilizaram a nanotecnologia como ferramente de drug delivery para tratamento de cancer depele, os resultados encontrados apresentaram resultados promissores de inibição da disseminacao tumoral, reducao de taxas de metastases e melhora na taxa de sobrevida global nos experimentos in vivo. Enquanto isso, no objetivo experimental dessa dissertação, obteve-se uma nanocápsula polimérica com resultados com características monomodais e homogêneas indicando um potencial veículo farmacológico promissor quando associado a novos agentes terapêuticos ou a dacarbazina, no entanto necessitando de maistestes para demonstrar seu potencial uso.
Aprendizado de máquina e “software” open-source na elaboração de reconstruções tridimensionais para o estudo de neurônios humanos e seus espinhos dendríticos
(2022) Renner, Josué; Rasia Filho, Alberto Antonio
A descrição da estrutura tridimensional (3D) do corpo neuronal, da ramificação dendrítica e dos espinhos dendríticos dos neurônios é essencial para a compreensão de como ocorre o processamento de informações no sistema nervoso ao longo da filogenia, mormente à complexidade que existe no ser humano. Frequentemente, esses componentes da estrutura neuronal apresentam conformações espaciais múltiplas, tornando necessária a elaboração de reconstruções 3D digitais para estudos morfológicos mais detalhados e precisos. A elaboração dessas reconstruções é, no entanto, desafiadora devido às questões relacionadas com a disponibilidade de “software” e com a complexidade do tecido nervoso e dificuldades técnicas inerentes ao processamento histológico de amostras postmortem humanas. A presente dissertação de mestrado teve como objetivo aplicar e desenvolver procedimentos de reconstrução 3D a fim de estudar a forma de neurônios humanos e seus espinhos dendríticos impregnados pela técnica de Golgi sob microscopia óptica de campo claro. A partir de imagens de microscopia de luz capturadas sequencialmente ao longo do eixo espacial ‘z’, o “software” open-source Neuromantic foi utilizado para a elaboração de reconstruções 3D e obtenção de dados morfométricos dos corpos celulares e ramificações dendríticas dos neurônios de von Economo presentes no córtex cingulado anterior e de neurônios com corpo celular fusiforme no pré-cúneo humanos. Para o estudo da presença, distribuição, número e diferentes formas dos espinhos dendríticos desses neurônios, reconstruções 3D foram feitas com algoritmo computacional na plataforma comercial MATLAB® com imagens microscópicas de maior aumento. De modo a evitar o uso adicional de “software” comercial, por causa de altos custos impeditivos e menor acesso a todos os pesquisadores, o presente trabalho também objetivou desenvolver um método adicional, simples, acessível e confiável para a reconstrução 3D de espinhos dendríticos com “software” gratuito. Para isso, utilizou-se o “software” open-source ilastik, que emprega algoritmos de aprendizado supervisionado de máquina para a segmentação de imagens. Esse novo método foi aplicado para a composição de reconstruções 3D dos espinhos dendríticos de neurônios do núcleo cortical do complexo amigdaloide humano, mas pode ser utilizado a priori em diversas outras áreas nervosas igualmente. As ferramentas computacionais que permitiram a elaboração das reconstruções 3D geraram dados morfológicos imprescindíveis sobre a forma do soma, orientação espacial dos ramos dendríticos nos três eixos espaciais e da presença, distribuição, número e forma diversa dos espinhos dendríticos dos neurônios estudados. Neurônios corticais e subcorticais humanos (e de outros animais) podem ser reconstruídos para estudos ontogenéticos, filogenéticos e hodológicos em cada área de interesse e/ou tipo neuronal relevante bem como para a investigação de alterações morfológicas de estruturas neuronais em doenças neurológicas e psiquiátricas. Por utilizar “software” que estão gratuitamente disponíveis para download e uso, o presente trabalho disponibiliza como realizar tais estudos e viabiliza o desenvolvimento de pesquisas nas quais as reconstruções 3D neuronais tornam-se acessíveis, mesmo com poucos recursos disponíveis, com qualidade, relevância internacional e atualidade dos dados obtidos, contribuindo para o conhecimento humano na área da Morfologia e das Neurociências.
Aspectos moleculares e clínicos do sistema Rh em doadores de sangue e na Doença Hemolítica do Feto e do Recém-nascido
(2024) Rodrigues, Mirelen Moura de Oliveira; Fiegenbaum, Marilu; Almeida, Silvana de; Programa de Pós-Graduação em Biociências
Introdução: O sistema Rh é um dos mais importantes sistemas de grupos sanguíneos, pois é considerado altamente imunogênico e polimórfico. Dois genes codificam os antígenos do sistema Rh, RHD e RHCE, sendo os mais importantes os antígenos D, C, c, E, e. O desenvolvimento de anticorpos contra antígenos do sistema Rh está associado a reações transfusionais hemolíticas imediatas e tardias e a Doença Hemolítica do Feto e do Recém-nascido (DHFN). No âmbito da imunohematologia, as técnicas de sequenciamento de DNA podem ser muito úteis para elucidar casos de discrepâncias entre genotipagem e fenotipagem e para identificação de novas variantes de grupos sanguíneos. Objetivos: Compreender as discrepâncias entre os resultados de genotipagem e fenotipagem para os antígenos C/c, E/e em amostras de doadores de sangue do Hospital de Clínicas de Porto Alegre utilizando o sequenciamento das regiões codificantes e adjacentes dos genes RHD e RHCE com discrepância, avaliando a presença de possíveis variantes que expliquem a discrepância. Devido à grande importância dos antígenos do sistema Rh no desenvolvimento da DHFN, a tese também tem como objetivo realizar uma busca sistemática na literatura sobre o tema DHFN e a frequência de anticorpos antieritrocitários em gestantes descrevendo mais prevalentes. Método: O presente estudo avaliou 395 amostras fenotipadas e genotipadas para os antígenos C/c e E/E de doadores de sangue do Hospital de Clínicas, dentre estas foram avaliadas quais amostras apresentaram discrepâncias entre genótipo e fenótipo para os alelos RHCE*e/*E (rs609320) e RHCE*c/*C (rs676785). A fenotipagem foi realizada utilizando a metodologia de tubo com antissoros monoclonais e a genotipagem através da técnica de PCR em tempo real utilizando sistema TaqMan®. As amostras discrepantes para os dois alelos foram sequenciadas utilizando 20 pares de primers para abranger as regiões codificantes e adjacentes dos éxons dos genes RHD e RHCE. As reações de sequenciamento foram realizadas pelo método Sanger. Também foi realizada uma busca sistemática na literatura sobre o desenvolvimento de DHFN e a presença aloimunização em gestantes. O estudo foi conduzido sob aprovação do CEP da UFCSPA (nº 2.753.780). Resultados: Dentre as 395 amostras avaliadas para as metodologias de genotipagem e fenotipagem, 15 apresentaram discrepância entre genótipo e fenótipo para os dois alelos investigados concomitantemente, em duas amostras a análise do sequenciamento confirmou o resultado obtido na genotipagem para o alelo RHCE*E/*e. Foram identificadas variantes, que possivelmente possam explicar as discrepâncias nestas amostras. Dentre as variantes encontradas, duas ainda não estão descritas. Utilizando ferramentas de análise in silico foi possível observar que as variantes podem apresentar potencial de causar alterações na expressão da proteína RhCE e, consequentemente, na expressão dos alelos. A variante encontrada no éxon 6 do gene RHCE foi classificada como “provável dano” utilizando o software PolyPhen-2 com score de 0,999 (sensibilidade = 0,99) e classificada como “tolerada” pelo software SIFT. A segunda nova variante descrita, localizada no final do íntron 7 do gene RHCE, utilizando o software RegulomeDB foi obtido um score de 1,0 o que significa que a nova variante pode alterar a ligação e à expressão gênica. A partir da busca sistemática sobre DHFN e aloimunização, revisamos 75 artigos publicados, ao total 13.966 gestantes apresentavam aloimunização. Os anticorpos mais prevalentes neste estudo de revisão do sistema foram, anti-D (35,01%), anti-K (14,69%), anti-E (11,21%), anti-c (5,48%), anti-C (4,93%) e anti-M (2,35%). Conclusão: Embora o genótipo seja preditor do fenótipo, há algumas situações em que expressão gênica é alterada, como por exemplo, no sistema Rh a presença de antígenos fracos e parciais. Nosso estudo contribui com a identificação de novas variantes que possivelmente podem ter influência na expressão da proteína RhCE. Em relação a DHFN, embora o anti-D ainda seja o anticorpo mais frequente associado a DHFN, podemos observar que outros anticorpos contra antígenos dos sistemas Rh, Kell e MNS apresentam grande prevalência, principalmente, o anti-K e anti-E. Sendo assim, há a necessidade de atentar para a DHFN com o entendimento de que outros anticorpos contra antígenos de grupos sanguíneos estão associados ao desencadeamento da doença implicando em anemia com implicação leve a grave e inclusive no óbito do feto ou recém-nascido e de que é necessário identificar e acompanhar a gestantes com risco de incompatibilidade materno fetal.
Ativação do sistema nervoso simpático e parassimpático dependente da saturação de oxigênio de bebês prematuros
(2017) Brandalise, Carmen Lucia; Rigatto, Katya Vianna; Roncato, Gabriela
O objetivo deste estudo foi verificar qual a associação entre a saturação de O2 e o balanço simpatovagal em bebês prematuros. Participaram deste estudo 7 bebês prematuros com idade gestacional entre 31 e 36 semanas, internados na Unidade de Terapia Intensiva Neonatal do Hospital Fêmina. Para avaliar a saturação de O2 dos prematuros, foi utilizado o monitor de pacientes da marca GE modelo B20. O sistema nervoso simpático e parassimpático (SNSP) foi avaliado através da gravação de um eletrocardiograma durante dez minutos, realizado durante um período no qual os bebês estavam tranquilos e na posição de decúbito dorsal. O sinal foi gravado através do equipamento da marca Micromed, com frequência de amostragem de 600 Hz. O sinal foi armazenado como intervalos RR e analisados pelo programa MATLAB. Um método auto regressivo foi utilizado para avaliar a variabilidade da frequência cardíaca (VFC), baseado na análise espectral de componentes de alta (0,15 – 0,4 Hz) e baixa (0,03 – 0,15 Hz) frequências. Os resultados foram expressos por valores absolutos (LF e HF) e normalizados; e, como último procedimento, a razão LF/HF foi calculada. Os dados foram analisados pelo programa SPSS versão 17.0. As médias e desvios padrões foram calculados através do teste de Shapiro-Wilk. As correlações foram realizadas através do método de Spearman, sendo p-valor<0,05 considerado significante. Houve uma forte correlação da modulação simpática e parassimpática com a VFC. Além disso, observamos uma forte correlação entre HF e LF, indicando que o SNSP estão sendo maturados concomitantemente. Apesar de não haver correlação significante entre a saturação média de O2 com a VFC, nossos resultados mostraram que quanto maior a saturação média de O2, menor é a modulação simpática nos bebês prematuros. Portanto o estudo concluiu que a maturação do bebê é acompanhada pela maturação simpática e parassimpática e, consequentemente, por uma situação fisiológica favorável que permite um melhor controle reflexo do sistema cardiovascular.
Atividade antimicrobiana e antivirulência de compostos provenientes de fonte natural
(2021) Rossatto, Fernanda Cristina Possamai ; Zimmer, Karine Rigon ; d’Azevedo, Pedro Alves
O resíduo do processamento da uva representa uma fonte importante de compostos renováveis, cuja atividade biológica permanece pouco estudada. Estes resíduos são produzidos em grandes quantidades, podendo causar danos ambientais. Neste sentido, a busca por compostos bioativos com propriedades antimicrobianas e antivirulência nesta matéria-prima é uma alternativa interessante. Uma série de metabolitos secundários – como os compostos fenólicos – são produzidos pela uva, exercendo funções protetivas contra agentes patogênicos. Eles são estratégias promissoras em virtude de sua diversidade estrutural e amplo espectro de propriedades biológicas. Em paralelo, há uma necessidade urgente por novas opções terapêuticas para o controle de infecções causadas por bactérias e fungos, principalmente infecções associadas a biofilmes, as quais são de difícil controle e tratamento. Por estas razões, o presente trabalho teve como objetivo principal a busca por estratégias antimicrobianas e antivirulência – com foco na pesquisa antibiofilme – no controle de infecções bacterianas e fúngicas. Numa primeira etapa, foi investigado o potencial de extratos e frações provenientes do resíduo da uva no controle de biofilmes bacterianos. Para este objetivo, três variedades de resíduos da uva foram coletadas: a uva branca Chardonnay (Vitis vinifera) e as uvas tintas Cabernet Franc (Vitis vinifera) e Bordô (Vitis labrusca). Extração assistida por ultrassom foi conduzida de forma exaustiva com diclorometano, metanol e água. Quatro modelos bacterianos foram utilizados: Staphylococcus aureus, Staphylococcus epidermidis, Klebsiella pneumoniae e Pseudomonas aeruginosa. A atividade antimicrobiana foi mensurada pela obtenção da concentração inibitória mínima (CIM) e por meio da leitura da OD620nm. Possível efeito sinérgico foi verificado através de combinações entre os extratos e antimicrobianos convencionais. A atividade antibiofilme dos extratos a 5 mg/mL foi avaliada através da metodologia do cristal violeta. Os extratos apresentaram valor de CIM entre 1,25 mg/mL e 5 mg/mL contra os microrganismos testados e observou-se efeito sinérgico entre o extrato aquoso da uva Cabernet Franc e o antimicrobiano oxacilina, e extrato aquoso da uva Chardonnay e vancomicina contra os modelos Gram-positivos. O resíduo da uva Chardonnay extraído com diclorometano apresentou os melhores resultados para todas bactérias testadas, inibindo a formação do biofilme sem inibir o crescimento bacteriano. Este extrato foi submetido à cromatografia em coluna de fase normal. Duas frações apresentaram atividade antibiofilme, prevenindo a adesão de S. aureus e S. epidermidis à superfície de poliestireno em 80% a 0,62 mg/mL e inibindo o biofilme de K. pneumoniae em 25% a 0,31 mg/mL. As frações e extratos foram analisados por cromatografia líquida acoplada à espectrometria de massas (UHPLC-ESI- MS/MS) e indicaram a presença de ácidos graxos, polifenois, alcaloides e aminoácidos. Além disso, a toxicidade dos extratos foi avaliada em modelo invertebrado de Caenorhabditis elegans, demonstrando que os mesmos não afetaram a sobrevivência, tamanho e progenia do nematoide. Numa segunda etapa, os polifenóis ácido elágico (AE) e ácido cafeico fenetil éster (CAPE) foram avaliados quanto às suas atividades antifúngicas contra Candida spp. Para este propósito, os compostos puros foram adquiridos comercialmente e tiveram a atividade antifúngica contra C. albicans SC5314 e um painel de 10 isolados de Candida auris multirresistentes avaliada por microdiluição em caldo e por ensaio do time-kill. AE e CAPE apresentaram valores de CIM ≤ 0,5 μg/mL e entre 1 a 64 μg/mL, respectivamente. AE apresentou efeito fungistático e CAPE fungicida para ambas as espécies de Candida. O mecanismo de ação dos compostos foi investigado pelo ensaio de proteção do sorbitol e pelo ensaio de ligação ao ergosterol, indicando provável ação sobre a parede celular fúngica. CAPE foi capaz de inibir a produção de fosfolipases, biofilmes e filamentação, além de inibir a adesão de C. albicans ou C. auris a células epiteliais do pulmão. AE e CAPE não foram tóxicos a hemácias em todas concentrações testadas (até 64 μg/mL), nem ao modelo in vivo de Galleria mellonella (até 128 mg/kg). Quando G. mellonella foi pré-tratada com AE ou CAPE (32 mg/kg) antes da infecção por C. albicans ou C. auris, a taxa de sobrevivência da larva foi significativamente prolongada, com uma taxa de sobrevivência de 44% para ambos os compostos. Além disso, AE, a 4 μg/mL, prolongou em 40% a sobrevivência do nematoide C. elegans infectado com C. albicans. Em conjunto, estes resultados demonstram o potencial antibacteriano e antifúngico de metabólitos secundários de fonte natural, dentre eles, extratos e frações provenientes do resíduo da uva, e compostos da classe dos polifenóis. Em conclusão, compostos de origem natural representam uma fonte promissora de moléculas antimicrobianas e antivirulência. O desenvolvimento de novos agentes antimicrobianos a partir destas fontes enseja amenizar a problemática da resistência antimicrobiana e da escassez de opções terapêuticas para o controle de infecções.
Avaliação antibacteriana e antibiofilme associada a metabolômica para identificação de substâncias bioativas: um estudo sobre espécies de Combretum (Combretaceae)
(2021) Barros, Thayná Fernandes; Trentin, Danielle da Silva; Silva, Denise Brentan da
Espécies de Combretaceae têm sido utilizadas na medicina popular para tratar doenças inflamatórias e infecciosas, e diversos metabólitos secundários já foram descritos para algumas espécies do gênero Combretum. Infecções causadas por Staphylococcus aureus e Pseudomonas aeruginosa são reconhecidas como desafios clínicos dado o grau de virulência dos mesmos e resistência a múltiplos antibacterianos. Neste sentido, a terapia antivirulência, que visa atenuar a virulência sem inibir o crescimento bacteriano, representa uma abordagem alternativa para controlar infecções bacterianas com menor pressão para o surgimento de populações resistentes. Dessa forma, a aplicação de técnicas metabolômicas e análises de dados têm se mostrado ferramentas atrativas para acelerar a descoberta de fármacos. Sendo assim, este estudo teve como objetivos avaliar a atividade antibacteriana e antibiofilme das espécies C. laxum, C. leprosum e C. lanceolatum frente a duas bactérias-padrão, e identificar, através do perfil metabólico e comprovação experimental, os fitocompostos bioativos. Folhas e cascas das três espécies foram coletadas na região do Pantanal, no estado do Mato Grosso do Sul, em 2016. O material vegetal foi submetido à extração acelerada por solvente e a composição química de cada extrato foi determinada por CLAE-DAD-EM. Os extratos foram avaliados frente à S. aureus ATCC 25904 e P. aeruginosa ATCC 27853 quanto à atividade antibacteriana, através da técnica de microdiluição em caldo, e atividade de inibição de biofilme, pela técnica de cristal violeta. Os extratos hidrometanólicos das três espécies apresentaram maior inibição da formação de biofilme de S. aureus sem inibir o crescimento, no entanto não foram ativos para P. aeruginosa. As análises de correlação de Pearson r sugeriram 35 metabólitos como possíveis substâncias responsáveis pela ação antibiofilme de S. aureus. Destas, 18 substâncias foram adquiridas comercialmente e avaliadas in vitro. Os flavonoides luteolina, miricetina e quercetina inibiram a formação de biofilme de S. aureus, porém o precursor de taninos hidrolisáveis, ácido elágico, foi a substância mais ativa inibindo 73% da formação de biofilme (5 μM) sem afetar o crescimento bacteriano. Não foram observadas interações sinérgicas entre as quatro substâncias ativas. Considerando que flavonoides glicosilados e açúcares simples apresentaram correlação positiva com a atividade antibiofilme de S. aureus, o efeito de açúcares sobre o crescimento e a virulência bacteriana foi aprofundado. Açúcares simples, identificados nas espécies Combretum, não foram ativos contra S. aureus e também não aumentaram a ação antibiofilme das quatro substâncias acima citadas. Em estudo de revisão da literatura observamos que, flavonoides glicosilados têm menor ação antibacteriana e antivirulência do que as respectivas agliconas frente a distintas bactérias. Esta dissertação evidenciou a aplicaçãoda metabolômica para o direcionamento de substância biotivas, conferindo agilidade e menor custo no processo de identificação de protótipos. As substâncias polares das espécies de Combretum demonstraram-se mais ativas na prevenção da formação de biofilme de S. aureus, dentre as quais destacamos o ácido elágico e a turicina para prosseguir em estudos futuros. Substâncias antibiofilme podem potencialmente ser utilizadas como coadjuvantes no tratamento de infecções e no desenvolvimento de superfícies menos propensas à adesão bacteriana, fundamental na redução de infecções associadas à dispositivos médicos.
Avaliação da atividade anti-herpética do exsudato de Salvia uliginosa e do diterpeno icetexona
(2023) Monteiro, Maria antônia Cabrla; Rodrigues Júnior, Luiz Carlos; Romão, Pedro Roosevelt Torres; Programa de Pós-Graduação em Biociências
Herpes Simples Virus-2 (HSV-2) é um vírus dermatotrópico. Estudos recentes indicam que a porcentagem de indivíduos infectados pelo HSV-2 no Brasil é em média 11,3% e estima-se que cerca de 90% da população mundial possui sorologia positiva por um ou ambos os vírus. O HSV-2 também é uma infecção sexualmente transmissível que ocasiona sérios problemas em indivíduos com sistema imunológico debilitado ou sob tratamento imunossupressor, ou ainda quando é transmitido durante o parto. Os antivirais já existentes para o tratamento não atuam na latência do vírus e já existem cepas resistentes ao aciclovir, principal fármaco utilizado. Tratamentos com derivados de plantas têm apresentado eficácia contra o herpes, em modelos in vitro e in vivo. Algumas espécies de Salvia já foram estudadas frente a vírus e outros microrganismos. Análises publicadas pelo nosso grupo demonstraram que Salvia uliginosa apresenta uma atividade significativa frente a Leishmania amazonensis, um parasita intracelular responsável por causar leishmaniose. Assim, o objetivo desse trabalho foi verificar o possível efeito anti-herpético de Salvia uliginosa frente ao HSV2 in vitro. Salvia uliginosa foi coletada e identificada por um botânico. O exsudato da planta e o composto majoritário, o diterpeno icetexona (ICT), foram obtidos no Laboratório de Farmacognosia da Faculdade de Farmácia da Universidade Federal do Rio Grande do Sul. A ICT foi isolada no mesmo laboratório, por cromatografia em coluna de gel de sílica. A técnica de MTT foi utilizada na linhagem celular VERO para a análise da citotoxicidade dos extratos e composto isolado, determinando os valores de IC50 e CC50. O efeito virucida das amostras no HSV-2 foi avaliado por ensaio de placa. Os resultados indicaram que o exsudato de S. uliginosa possui atividade antiherpética in vitro, com CC50 de 193,5μg/mL, embora a ICT não. São necessários experimentos adicionais in vitro para elucidar o mecanismo de ação, e in vivo para testar a hipótese anti-herpética da Salvia uliginosa no hospedeiro infectado.
Avaliação da eficácia de uma nanoemulsão de temozolomida e da influência de co e pré-tratamentos com ferroceno em linhagens celulares de glioblastoma humano
(2023-11-08) Henn, Jeferson Gustavo; Moura, Dinara Jaqueline
O glioblastoma é um glioma de grau IV, ocorrendo predominantemente em adultos e com características altamente agressivas. O tratamento convencional para este tipo tumoral compreende ressecção cirúrgica, seguida de radioterapia combinada com quimioterapia utilizando temozolomida. Estas abordagens terapêuticas desempenham um papel essencial na gestão clínica da doença, embora ainda resultem em um prognóstico desfavorável, com uma média de sobrevida global de apenas 14 a 19 meses. Isto ocorre principalmente devido à natureza inoperável da maioria dos tumores e à resistência crescente à quimioterapia quando estes são diagnosticados em estágios avançados, o que justifica a necessidade pela busca de novas moléculas e estratégias terapêuticas para o seu tratamento. O recente progresso na área da nanotecnologia, com o desenvolvimento de sistemas de entrega de fármacos como as nanoemulsões, e a ação sensibilizante tumoral e geradora de espécies reativas de oxigênio do ferroceno, têm trazido novas possibilidades à complementação da quimioterapia em diversos tipos de câncer, aumentando a eficácia dos tratamentos. Neste contexto, esta tese apresenta dois capítulos abordando (i) as diferentes nanoestruturas já desenvolvidas para a entrega de moléculas no tratamento do câncer, como estas conseguem atingir o ambiente tumoral e aumentar a toxicidade nos tecidos-alvo, e as barreiras que estes sistemas enfrentam para alcançar resultados positivos, bem como (ii) o desenvolvimento, a caracterização e a avaliação da citotoxicidade de uma nanoemulsão contendo temozolomida e sua combinação com ferroceno em linhagens celulares de glioblastoma humano. A caracterização físico-química da nanoemulsão revelou a presença da temozolomida na interface do sistema, permitindo sua rápida liberação. Em combinação com o ferroceno, reduziram a viabilidade celular em tratamentos agudos e em regime de dois ciclos, aumentando a sensibilidade à temozolomida da linhagem celular T98G por meio da alteração do potencial da membrana mitocondrial, com uma indução de espécies reativas de oxigênio, com consequente morte celular. Estes resultados demonstraram a eficácia do uso de uma nanoemulsão contendo temozolomida e sua combinação com ferroceno como uma efetiva abordagem ao tratamento do glioblastoma. Além disso, o rápido desenvolvimento da nanomedicina e o constante melhoramento das técnicas relacionadas apontam para um futuro promissor no tratamento de diversos tipos de câncer com um possível aumento da qualidade de vida destes pacientes
Avaliação da variabilidade genética de receptores toll-like e sua relação com a sindemia HIV-1/tuberculose na população gaúcha
(2021) Mousquer, Gabriel Tassi; Fiegenbaum, Marilu
As pandemias da tuberculose (TB) e da síndrome da imunodeficiência adquirida (aids) se impõem como alguns dos maiores desafios para a saúde pública no século XXI. Em indivíduos coinfectados, o Mycobacterium tuberculosis e o vírus da imunodeficiência humana tipo 1 (HIV-1) atuam de maneira sinergética. Não por acaso, a TB é a principal causa de morte de indivíduos com aids. Somadas, ambas doenças contabilizaram cerca de 1,99 milhão de vítimas em 2019; no mesmo ano, a pandemia da COVID-19, doença causada pelo coronavírus da síndrome respiratória aguda grave 2 (SARS-CoV-2), emergiu, despontando como a principal causa de morte dentre as doenças infectocontagiosas e ameaçando os programas de controle da TB e da aids em todo o mundo. A convergência entre as três pandemias pode resultar em consequências catastróficas, principalmente em países subdesenvolvidos e em desenvolvimento, como o Brasil. Logo, compreender como o SARS-CoV-2, o M. tuberculosis e o HIV-1 interagem entre si é fundamental para o desenvolvimento de estratégias de prevenção e tratamento contra essas doenças infecciosas. Os receptores tipo Toll (TLRs) compõem a linha de frente na defesa inata do organismo contra diferentes microrganismos. Polimorfismos nos genes TLR2 rs111200466, TLR4 rs4986790 e TLR8 rs3764880 já foram associados com a suscetibilidade à TB e ao HIV-1, separadamente; contudo, a imunogenética da coinfecção HIV-1/TB permanece como um tema ainda inexplorado. O presente estudo conduziu uma análise da imunogenética dos polimorfismos supramencionados, buscando associações entre as variantes genéticas dos TLRs com a suscetibilidade, ou resistência, ao HIV-1, à TB e à coinfecção HIV-1/TB na população do Rio Grande do Sul (RS). Os resultados apontam para a associação entre variantes do rs111200466 com maiores contagens de linfócitos T CD3+ e CD4+ em indivíduos HIV-1 soropositivos, tal como com a suscetibilidade à coinfecção HIV-1/TB; já o rs4986790 foi associado com a suscetibilidade à TB e também à coinfecção HIV-1/TB. Por fim, também foi conduzida uma revisão sistemática da literatura vigente sobre a coinfecção TB/COVID-19, identificando o M. tuberculosis como um fator de risco para o desenvolvimento da COVID-19.
Avaliação da variabilidade genética de selenoproteínas na suscetibilidade ao carcinoma hepatocelular
(2021) Alves, Andressa de Freitas; Almeida, Silvana de; Fiegenbaum, Marilu; Giovenardi, Márcia
Introdução: O carcinoma hepatocelular é uma neoplasia primária do fígado, classificada como a terceira causa de morte por câncer no mundo. Qualquer condição que leve a uma doença hepática crônica, configura-se como um agente oncogênico em potencial. O estresse oxidativo é uma das condições estudadas devido à ligação entre o acúmulo de espécies reativas de oxigênio e danos ao DNA. As selenoproteínas, por sua vez, desempenham papel antioxidante no corpo, combatendo esse efeito. Alterações na estrutura e/ou expressão dessas proteínas podem estar ligadas à suscetibilidade do organismo aos efeitos do estresse oxidativo, incluindo a carcinogênese. Objetivo: Avaliar a influência da variabilidade genética e da expressão das selenoproteínas na suscetibilidade ao carcinoma hepatocelular. Metodologia: Foram realizados dois estudos. No primeiro estudo foi avaliada a expressão gênica de enzimas antioxidantes (GPX1, GPX4, SEP15, SelP, SOD1, SOD2, GSR, CAT e NRF2) em tecidos tumorais e não tumorais de pacientes com CHC, além de pacientes saudáveis. As análises foram realizadas experimentalmente por RT-qPCR em pacientes com carcinoma hepatocelular e por bioinformática em pacientes dos bancos de dados TCGA e GTEx. No segundo estudo foi realizada a genotipagem por qPCR dos SNPs GPX1 rs1050450, GPX1 rs3448, GPX4 rs713041, SEP15 rs5845, SEP15 rs5859, SELENOP rs7579 e SELENOP rs3877899 em pacientes caso e controle, assim como foi realizada em pacientes do TCGA por ferramentas de bioinformática. As taxas de perda de heterozigosidade estimada foram calculadas pelo pacote de R HWE-LOH. Ambos os estudos foram aprovados pelo CEP da UFCSPA (no 2.400.119 e no 2.315.844). Resultados: As análises de bioinformática detectaram diferença significativa entre os grupos caso x controle e tumor x peritumor na expressão de grande parte dos genes estudados. Em comparação ao tecido peritumoral, a expressão de GPX4 estava aumentada (p=0,02) e a de SOD2 diminuída (p=0,04) no tecido tumoral nos dados experimentais. A baixa expressão de GPX1 (p=0,006), GPX4 (p=0,01), SELENOP (p=0,006), SOD1 (p=0,007), CAT (p<0,001), e NFE2L2 (p<0,001), e alta expressão de GSR (p<0,001), foram associados com menor sobrevida em 12 meses nos pacientes do TCGA. Além disso, foram encontradas diferenças significativas nas frequências genotípicas de todos os SNPs estudados, exceto para o rs3448, entre casos e controles (p<0.05), na amostra experimental. Tanto a amostra experimental quanto os dados do TCGA apresentaram tendência a perda do genótipo heterozigoto em amostras tumorais, sendo que as análises de perda heterozigosidade estimada revelaram taxas variadas (8-41%) nas mesmas amostras. A perda de heterozigosidade para o SNP rs713041 do gene GPX4 foi associada com características clínico-patológicas como a etiologia (consumo de álcool, p=0,04) e o grau histológico (tumores pouco diferenciados, p=0,02). Conclusões: Tanto alterações na expressão gênica quanto nos genes de selenoproteínas parecem ter papel importante no desenvolvimento e progressão do carcinoma hepatocelular.
Avaliação de metodologia analítica para determinação de Compostos Orgânicos Semivoláteis (SVOCs) em água utilizando microextração líquido- líquido dispersiva e cromatografia gasosa
(2024-04-03) Silva, Lauren Ramos da; Merib, Josias de Oliveira; Programa de Pós-Graduação em Biociências
A contaminação ambiental por poluentes orgânicos se tornou um problema ambiental e econômico em escala mundial. Não é de hoje que inúmeras áreas são propensas a contaminações de diversos tipos que incluem os mais variados agentes poluentes. Desta forma, leis e regulamentações têm sido criadas com o intuito de reduzir este problema que está disseminado no mundo todo. Em 1972, ocorreu a Convenção de Estocolmo, nela foram apresentados os Poluentes Orgânicos Persistentes (POPs) compostos à base de carbono com tempo de meia-vida alto, que não sofrem degradação no meio ambiente e por isso podem se distribuir e acumular no meio ambiente, sofrendo biomagnificação e apresentando alta toxicidade aos seres humanos e ao meio ambiente. Dentre os POPs estão os Compostos Orgânicos Semivoláteis (SVOCs) que apresentam volatilidades intermediárias, ou seja, são abundantes tanto na fase condensada quanto na fase de vapor em pressão e temperatura ambientes. Os SVOCs são um grande grupo de compostos orgânicos que se subdividem em diversos outros grupos como os Pesticidas Organoclorados, Hidrocarbonetos Policíclicos Aromáticos (PAHs), Bifenilas Policloradas (PCBs), Ftalatos, e muitos outros. Neste trabalho foi proposto o desenvolvimento, otimização e validação de uma metodologia analítica para a determinação de SVOCs em água por microextração líquido-líquido dispersiva e cromatografia gasosa. A metodologia é uma alternativa mais sustentável em comparação com as metodologias oficiais para a análise de água da torneira, água do mar, água tratada, água subterrânea e água de lagoa. O fluxo de trabalho experimental foi parcialmente otimizado usando um planejamento Doehlert, e 500 µL de diclorometano (solvente de extração) foram utilizados para analisar 15 mL de água. Além disso, 500 µL de metanol (solvente dispersor), 15 s de vórtice e 2 min de centrifugação também foram utilizados para a metodologia de preparo da amostra. Nessas condições foram alcançados parâmetros analíticos satisfatórios com coeficientes de determinação (r2) superiores a 0,9635, limites de detecção (LOD) de 3,0 a 6,0 µg L-1, limites de quantificação (LOQ) de 10,0 a 20,0 µg L-1, precisão intradiária de 1,66 a 29,50% e precisão interdiária de 9,32 a 23,54%.
Avaliação do balanço simpatovagal em sujeitos do sexo masculino com diferentes composições dietéticas: vegana, vegetariana e onívora
(2018) Souza, Jéssica de; Rigatto, Katya Vianna
Introdução e objetivos: As doenças cardiovasculares estão entre as principais causas de morte no mundo. Alguns padrões alimentares podem modular o equilíbrio simpatovagal e conferir um efeito cardioprotetor. Este estudo teve como objetivo comparar a modulação do sistema nervoso simpático e parassimpático entre indivíduos veganos, vegetarianos e onívoros. Métodos e resultados: 20 indivíduos onívoros, 20 vegetarianos e 16 veganos, todos do sexo masculino, responderam questionários sobre seus hábitos alimentares e atividade física. Eles foram submetidos a um eletrocardiograma e tiveram a pressão arterial, dados antropométricos, peso, altura e dobras cutâneas examinados. Os eletrocardiogramas foram registrados por 10 minutos por um sistema de Wincardio e utilizados para realizar a análise espectral por meio de um modelo autoregressivo. Dois componentes espectrais foram considerados: baixa frequência (LF) de 0,040,15 Hz ou alta frequência (HF) de 0,15-0,5 Hz. Os componentes espectrais (ms2) foram expressos em unidades absolutas (a) e normalizados (nu). O principal achado deste estudo foi que o tipo de dieta por si só não influenciou os valores do controle reflexo da pressão arterial, LFnu e HFnu não diferiu entre os grupos (p = 0,858), similarmente à avaliação simbólica 0V (p = 0,501). A pressão arterial sistólica e diastólica também não foram diferentes entre os grupos (p = 0,47 e 0,31, respectivamente). Conclusão: Os resultados demonstram que, para os adultos do sexo masculino, as dietas onívora, vegetariana e vegana não influenciaram de forma diferenciada a modulação autonômica do coração.
Avaliação do potencial tecnológico de hidrogéis de quitosana reticulados com genipina na entrega oral de fármacos
(Wagner Wessfll, 2022) Kaufmann, Gabriela; Aguirre, Tanira Alessandra Silveira; Goettert, Márcia Inês
A quitosana, polímero biodegradável extraído a partir da quitina, vem se destacando na indústria farmacêutica como carreador de fármacos. A genipina, composto natural extraído a partir do Jenipapo, atua como agente reticulante natural. Sendo assim, o presente trabalho objetivou desenvolver e caracterizar hidrogéis de quitosana reticulados com genipina e avaliar in vitro o perfil de liberação do diclofenaco de sódio. Além disso, objetivou-se avaliar a citotoxicidade in vitro dos componentes utilizados na obtenção dos hidrogéis, bem como de frações liberadas contendo o fármaco em diferentes meios de dissolução. A formulação obtida foi caracterizada em termos de morfologia macroscópica e microscopia, perfil termoquímico e perfil de intumescimento. O perfil de liberação do fármaco foi analisado através de ensaio de dissolução in vitro em pH 1,2 e 6,8, e também em fluidos intestinais simulados em pH 3,0 e 7,0. A citotoxicidade foi avaliada através do teste de MTT em células MRC5 e Caco-2, com tratamentos de 6 e 24 h. A formulação final apresentou as seguintes concentrações: quitosana 1,250% (m/v), genipina 0,185% (m/v) e diclofenaco sódico 0,250% (m/v). A partir dos ensaios caracterizamos o hidrogel como um dispositivo altamente poroso, com perfil de intumescimento e perfil de liberação dependentes de pH e com características intrínsecas de promoção de proteção entérica. A liberação em pH ácido foi mínima (10% ± 0,43) em comparação à liberação em 5 h em pH próximo ao neutro (70% ± 13,5). Testes de citotoxicidade dos componentes e da formulação revelaram propriedades não tóxicas em ambas linhagens celulares, apresentando viabilidades entre 75% (± 5,94) e 106% (± 3,71) nas duas concentrações mais baixas testadas. A formulação desenvolvida neste estudo é biocompatível e possui potencial para liberação controlada de diclofenaco de sódio administrado pela via oral.

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