Programa de Pós-Graduação em Biociências

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Análise bioquímica e inflamatória de mulheres com sobrepeso submetidas a sessões de ultrassom focalizado e exercício físico
(2020) Fagundes, Viviane Oliveira; Romão, Pedro Roosevelt Torres; Peres, Alessandra
Nas últimas décadas houve um aumento expressivo da procura por procedimentos não invasivos para a redução de gordura localizada e modelagem corporal. Tecnologias como ultrassom, radiofrequência, laser de baixa potência e criolipólise estão entre os mais utilizados. O ultrassom focalizado de alta intensidade, popularmente conhecido como HIFU, causa a destruição do tecido adiposo subcutâneo alvo através da cavitação e hipertermia, sem afetar os tecidos adjacentes. Apesar da literatura existente, não existem publicações pertinentes da associação do ultrassom focalizado com o exercício físico, prática fundamental para eliminação segura de gorduras. Assim, este trabalho teve como objetivo avaliar os efeitos da aplicação do ultrassom focalizado associado ou não ao exercício físico sobre marcadores bioquímicos e inflamatórios de mulheres com sobrepeso. Neste estudo foram recrutadas 22 mulheres, entre 20 e 50 anos, com IMC entre 25 à 29,9 kg/m2, que foram divididas em dois grupos, HIFU (n=12) e HIFU+EX (n=10). Ambos os grupos foram submetidos a cinco sessões semanais (1 vez/semana) de ultrassom focalizado de alta intensidade. As participantes alocadas no grupo HIFU+EX realizaram 45 minutos de exercício físico moderado em esteira imediatamente após a aplicação do ultrassom focalizado. Os parâmetros antropométricos foram medidos e amostras sanguíneas foram colhidas antes e sete dias após a última sessão. O perfil lipídico e marcadores hepáticos foram quantificados no soro através do equipamento automatizado BS120. A quantificação sérica das citocinas IL-6 e TNF-α foi determinada por meio de kits comerciais de ELISA. Os níveis plasmáticos de óxido nítrico foram determinados através do método de Miranda (2000) seguido o Ensaio de Griess e leitura em espectrofotômetro. A peroxidação lipídica indireta foi avaliada em plasma através do teste determinação de substâncias reativas ao ácido tiobarbitúrico. Após o protocolo, apenas no grupo HIFU+EX houve redução significativa da prega abdominal (p>0,049). O grupo HIFU apresentou aumento significativo nos níveis de colesterol (p<0,049). A concentração de óxido nítrico reduziu significativamente no grupo HIFU (p<0,031) e no grupo HIFU+EX (p<0,029). Os demais parâmetros avaliados não apresentaram alterações expressivas em ambos os grupos. Na análise das relações, o grupo HIFU+EX apresentou correlações positivas entre colesterol e perimetria abdominal (r=0,726; p<0,018), IL-6 e TBARs (r=0,887; p<0,001) e TNF- α e dobra abdominal (r=0,774; p<0,005). Na comparação entre grupos, não houve diferença estatística nas variáveis avaliadas. Os resultados encontrados evidenciam que a associação do ultrassom focalizado de alta intensidade e exercício físico podem contribuir para uma redução de gordura localizada mais segura, sem alterações expressivas no perfil lipídico e inflamatório de mulheres com sobrepeso. Mais estudos são necessários para elucidar e determinar associações de novos protocolos para a redução do tecido adiposo cutâneo, sem causar prejuízos à saúde.
Análise da participação dos neutrófilos na progressão dos glioblastomas
(Wagner Wessfll, 2020) Rubenich, Dominique Santos; Braganhol, Elizandra
Células imunes apresentam plasticidade funcional influenciada por fatores externos capazes de se alterar fenotipicamente, favorecendo a progressão do tumor. Os neutrófilos possuem um espectro de ativação comumente denominado antitumoral/pró-inflamatório (N1) e imunossupressor/pró-tumoral (N2). A presença dessas células no microambiente tumoral é essencial para a formação de um sítio propício para o desenvolvimento das células tumorais. No Glioblastoma, o nicho tumoral formado impacta diretamente na malignidade da doença. Este tipo de tumor cerebral é o mais frequente diagnosticado e possui alta mortalidade, com sobrevida média de 15 meses após a descoberta da doença. Considerando os fatos apresentados, esse estudo visa observar a participação dos neutrófilos na progressão dos glioblastomas. Para isso, foram realizados testes experimentais in vitro com linhagem celular de glioma humano (U87MG) e neutrófilos de voluntários saudáveis, e avaliados a capacidade de ativação das células imunes em diferentes condições de cocultivo, bem como a influencia na viabilidade tumoral. Para os neutrófilos, a migração é um fator importante e bem descrito na literatura a participação da sinalização purinérgica; foi realizada uma revisão de literatura sobre o assunto utilizando sobre os estudos com células humanas. De forma geral, foi observado mudanças morfológicas importantes entre os fenótipos induzidos e em cocultivo, bem como maior ativação imune na presença de células tumorais, confirmando a importância da comunicação intercelular.
Análise da relação de soropositividade pra citomegalovíryus e o perfil de linfócitos t em indivíduos com sobrepeso ou obesidade
(2023) Lima, Diego Del Duca; Rodrigues Júnior, Luiz Carlos; Peres, Alessandra; Programa de Pós-Graduação em Biociências
O citomegalovírus humano (HCMV) ou herpes vírus humano tipo 5 (HHV-5) é um vírus altamente prevalente na espécie humana, sendo endêmico em todo o mundo, estando envolvido em inúmeras doenças leves ou severas. Após a primeira infecção, o HCMV permanece em estado de latência no hospedeiro, a partir do qual pode ser reativado quando ocorre uma baixa na resposta imunológica ou em situações de estresse. Estudos recentes indicam que o processo inflamatório pode estar associado a reativação do HCMV no hospedeiro. A obesidade é um problema mundial relacionado a um quadro inflamatório crônico e subclínico, devido a produção de citocinas e células com perfil inflamatório, predispondo pacientes obesos ao desenvolvimento de uma série de doenças crônicas. Um indivíduo obeso, e no curso de uma reativação de HCMV pode apresentar características diferenciadas no processo inflamatório, caracterizadas por um sinergismo da reposta antiviral e inflamação. Assim, nesse estudo foi realizada uma análise da soropositividade para HCMV em indivíduos com diferentes níveis de sobrepeso, e sua relação com parâmetros bioquímicos, inflamatórios e os marcadores fenotípicos de ativação linfocitária. O projeto foi aprovado pelo comitê de ética da UFCSPA com o número 63282416.6.0000.5345. Os dados foram obtidos a partir de um banco de dados com 113 indivíduos que foram classificados em eutróficos, sobrepeso e obesos de acordo com o IMC. Todos os participantes eram do sexo masculino com média de idade de 34,72 anos. Foram avaliados dados relacionados ao perfil bioquímico como glicose, triglicerídeos, colesterol, HDL e LDL ao perfil fenotípico de células T de acordo com os marcadores+, CD4, CD8, CD4+CD25+CD39+, CD4+CD25-CD39+, CD8+CD27+CD28+, CD8+CD27-CD28-Os resultados indicam que a presença do HCMV contribui para um aumento na frequência das células T de memória altamente diferenciadas, com fenótipo senescente, os indivíduos com sobrepeso e obesidade
Análise de parâmetros bioquímicos de fêmeas submetidas à dieta hipercalórica ou restritiva durante a gestação e a lactação
(2017) Andrade, Andressa Alves de; Giovenardi, Márcia; Almeida, Silvana de
A dieta materna antes e durante a gestação pode influenciar na saúde da mãe e do feto bem como em futuras da prole. Observando-se as preferências alimentares atuais, com alimentos altamente calóricos, nosso estudo teve como objetivo analisar parâmetros bioquímicos no sangue e nos tecidos metabólicos, em fêmeas que durante a gestação e a lactação foram submetidas à dieta hipercalórica ou restritiva. Foram estudadas camundongos fêmeas isogênicas (n=24), da linhagem BALB/c (60 dias de idade, peso entre 18-25 g), provenientes do biotério da UFCSPA. Foram separadas em grupos de acordo com a dieta que receberam: dieta padrão ad libitum (CONT), dieta restritiva (RD, 30% Kcal a menos do que a dieta padrão), dieta hipercalórica (HD: acréscimo de 60% Kcal comparada a padrão). A adaptação à dieta foi de 25 dias e, a seguir, foram acasaladas. O de peso foi aferido periodicamente e o índice de Lee calculado. No 22° DDP fez-se eutanásia dos animais, coletamos o sangue e os tecidos adiposo, hepático e muscular. O perfil lipídico e glicídico foi analisado utilizando-se kits comerciais e, nos tecidos metabólicos, foi analisado: atividade das enzimas catalase (CAT) e superóxido dismutase (SOD), geração de espécies reativas de oxigênio por ensaio de oxidação de diacetato de dihidrodiclorofluoresceína, peroxidação lipídica por TBARS e quantificação do nível de proteína NF-kB.Os dados foram expressos por média ± SEM e analisados pela variância única seguindo o teste de comparação múltipla de Dunnett (p <0,05). A análise sérica mostrou um aumento significativo nos triglicerídeos do grupo HD em comparação com o CONT e o RD. Os outros parâmetros do perfil lipídico e a glicemia permaneceram similares entre os 3 grupos. O tempo (dias) para as fêmeas emprenhar foi mais longo no RD comparado ao grupo CONT, embora não tenha sido observada diferença significativa no número de camundongos por fêmea entre os grupos avaliados, bem como no aumento de peso das ninhadas. Nossos resultados mostraram que as modificações da dieta afetaram mais significativamente os parâmetros de estresse oxidativo no fígado e nos músculos do que o tecido adiposo em animais expostos à dieta hipercalórica. A diminuição da superóxido dismutase está fortemente correlacionada ao nível EROs em todos os tecidos avaliados, com um perfil de correlação muito semelhante nos tecidos hepático e muscular.
Análise do potencial probiótico de Lacticaseibacillus rhamnosus LB1.5 através de parâmetros bioquímicos, inflamatórios, genéticos e comportamentais em camundongos machos adultos alimentados com dieta hiperlipídica
(2024-09-17) Schmidt , Natália Perin; Giovenardi, Márcia; Guedes, Renata Padilha; Programa de Pós-Graduação em Biociências
Atualmente a obesidade é um dos mais graves problemas de saúde pública, sendo um fator de risco significativo para doenças crônicas não transmissíveis (DCNT). Sua prevalência tem aumentado acentuadamente nas últimas décadas, tanto no Brasil quanto no mundo. Em busca de terapias eficazes para o controle da obesidade, estudos sobre intervenções na modulação da microbiota intestinal, através da suplementação de probióticos, têm mostrado resultados promissores. Esta tese teve como objetivo avaliar o efeito do probiótico Lacticaseibacillus rhamnosus LB1.5 em parâmetros bioquímicos, inflamatórios, redox, genéticos e comportamentais em camundongos machos adultos alimentados com dieta hiperlipídica (HFD). Aos 21 dias de idade, logo após o desmame, os animais foram divididos em quatro grupos: controle (CONT), controle com probiótico (CONT + PROB), HFD, e HFD com probiótico (HFD + PROB), sendo alimentados por 13 semanas. O probiótico Lact. rhamnosus LB1.5 (3,1 X 108 UFC/mL, derivado de leite de búfala) foi administrado por gavagem três vezes por semana. Os grupos sem suplementação receberam leite desnatado na mesma quantidade e frequência. Aos 105 dias de idade, os animais foram submetidos ao teste claro-escuro, visando mensurar o comportamento do tipo ansioso, e aos 110 dias, foram eutanasiados para coleta de sangue e tecidos (tecido adiposo, hepático e cerebral). Nas amostras de sangue foram determinadas as concentrações de glicose, triglicerídeos, colesterol total, HDL, LDL e citocinas (IL-1α, IL-1β, IL-6, IL-10). No hipocampo analisamos neuroinflamação, por meio dos marcadores GFAP e IBA1, e a atividade da tirosina hidroxilase no córtex cerebral. Além disso, analisamos a expressão gênica, a nível transcricional, no córtex pré-frontal dos genes BDNF, SIRT1, NRF2. Já, no tecido adiposo e hepático foram realizados estudos histomorfológicos, do estado redox (TBARS e sulfidrilas) e expressão gênica de sirtuína 1 no tecido hepático. Os resultados demonstraram que a suplementação com Lact. rhamnosus LB1.5 reduziu os níveis séricos de IL-6, promoveu uma redução no comportamento semelhante à ansiedade e aumentou os níveis de sulfidrilas no fígado dos animais que receberam HFD+PROB quando comparado ao HFD. Houve uma redução na imunorreatividade para GFAP no córtex cerebral dos animais HFD em comparaçãocom o grupo CONT, mas sem efeito da suplementação com o probiótico. No hipocampo, observou-se uma interação entre dieta e suplementação, bem como um efeito significativo da suplementação probiótica. Nos animais HFD foi observado um maior número de células Th positivas no córtex cerebral em comparação com o CONT. O perfil obesogênico dos animais HFD incluiu aumento significativo de peso, de níveis de TBARS, esteatose hepática e aumento no peso do tecido adiposo e área dos adipócitos em comparação com o CONT. No entanto, apesar dos resultados encontrados, são necessários estudos complementares para explorar o potencial do Lact. rhamnosus LB1.5 como alvo para intervenções terapêuticas na obesidade.
Análise funcional e estrutural da proteína Kin3 em Saccharomyces cerevisiae
(2017) Morás, Ana Moira; Moura, Dinara Jaqueline
A proteína Kin3 é a única representante da família das NIMA-related kinases em Saccharomyces cerevisiae. Tendo em vista a existência de poucos estudos sobre a possível função da proteína Kin3 na resposta a danos no DNA e a inexistência de estudos sobre sua estrutura, o objetivo deste trabalho foi elucidar o envolvimento da proteína Kin3 na reposta a danos no DNA in vitro, considerando interações genéticas e compreendendo aspectos estruturais em modelos in silico. Primeiramente foi avaliado o papel da Kin3 na resposta a metil metano sulfonato (MMS), explorando interações previamente descritas com Mre11 e Srs2. Os resultados mostraram que a estratégia de tratamento de 2 h de exposição seguindo de 1 h de recuperação foi eficiente em induzir quebras no DNA. Adicionalmente, um perfil epistático de Kin3 com Mre11 e Rad52 foi encontrado, sugerindo um possível envolvimento com a via de recombinação homóloga. Esta hipótese foi corroborada com um efeito aditivo na taxa de mutação do duplo mutante kin3∆rad52∆. Posteriormente, foi realizada a modelagem da estrutura da proteína Kin3, com e sem ATP e cofator (Mg+2) e as conformações do loop de ativação após simulação por dinâmica molecular foram exploradas. Os principais achados mostraram a disrrupção de uma pequena estrutura de α-hélice na ausência de ATP, indicando que a ligação com o nucleotídeo é importante para estabilizar esta região. Esta modificação não aproximou os resíduos de serina e treonina localizados no loop de ativação do fosfato γ do ATP, o que permitiria a reação de catálise, não modificou a posição do motivo DFG ou o nucleotídeo para a posição na forma ativa. Assim, neste trabalho foi explorada a função da proteína Kin3 na resposta a DSBs, sugerindo um envolvimento mais significativo com a via da recombinação homóloga. Adicionalmente, foi estabelecida pela primeira vez informações sobre a estrutura da Kin3.
Análise molecular de variantes de grupos sanguíneos em populações indígenas
(2018) Rodrigues, Mirelen Moura de Oliveira; Fiegenbaum, Marilu; Almeida, Silvana de
A frequência dos alelos de grupos sanguíneos é diferente de acordo com a origem étnica da população, o que torna importante a determinação da variabilidade desses alelos em tribos indígenas. Devido as características culturais, que, por vezes, podem ser somadas à localização geográfica de difícil acesso, o isolamento, endocruzamentos e efeito do fundador podem propiciar o aumento da frequência de genótipos que são raros nas demais populações. Esta condição tem impacto direto na prática transfusional, visto que estes genótipos raros não são comuns na população de doadores de sangue. A presente dissertação analisou a variabilidade genética em 6 marcadores relacionados a expressão de antígenos de grupos sanguíneos (Diego, Kell, Duffy, Kidd e MNS) que apresentam impacto na prática transfusional em indivíduos de tribos indigenas Kaingang (n = 72) e Guarani (n = 234) amostradas no período entre 1990 — 2000. A variabilidade observada nesses grupos foi relacionada com a observada em tribos Kaingang e Guarani amostradas no período de 1950-1960, com o banco de dados 1000 genomas (população de Americanos, Asiáticos, Europeus e Africanos) e com doadores de sangue brasileiros das regiões Sul, Sudeste, Norte e Nordeste. A análise das variantes genéticas de grupos sanguíneos foi realizada utilizando a técnica de PCR em tempo real, com sondas de hidrólise do sistema TaqManB (Thermo Fisher) para o sistema Diego c.2561C>T (D/*01/*02, rs2285644), Kell c.578 C>T (KEL*01/*02,rs 8176058), Duffy c.125 A>G e c.1-67T>C (FY*01/*02, rs12075; FY*02N.01, rs2814778), Kidd c.838G>A (JK*01/*02, rs1058396) e MNS c.143T>C (GYPB*S/GYPB*s, rs7683365). As frequências alélicas foram comparadas utilizando o teste de Qui- quadrado com correção de Yates. Todas as frequências genotípicas estão de acordo com o esperado para populações em equilíbrio de Hardy-Weinberg. Quando comparados os resultados com amostras de Kaingang e Guarani coletadas no período de 1950-1960 observamos diferenças significativas (p < 0,05) para os alelos do sistema Diego (D/*01) e Duffy (FY*01) sugerindo um processo de miscigenação. Para todos os alelos analisados encontramos diferença significativa (p < 0,05) entre as tribos indígenas avaliadas e os dados de genotipagem de doadores de sangue brasileiros (Rio Grande do Sul, Paraná, Santa Catarina, São Paulo, Minas Gerais, Bahia e região do Norte do Brasil — ntotal= 3215), com exceção da amostra de doadores de sangue descendentes de Japoneses, principalmente para a tribo Guarani. De acordo com os resultados obtidos através da análise de Fsr, com intervalo de confiança de 95%, a diferenciação genética foi maior entre as populações de Kaingang e Africanos (Fs7T= 0,168) e de Guarani e Africanos (FsT= 0,190) do que com as outras populações avaliadas pelo Projeto 1000 Genomas (Ntotal = 2504). Embora não exista grande diferenciação genética, para as variantes analisadas, entre os ameríndios do presente estudo quando comparados com populações de Europeus, Asiáticos e Americanos, as diferenças de frequências alélicas e genotipicas entre as populações indígenas e de doadores de sangue devem ser consideradas. Isso porque estas diferenças podem impactar na prática transfusional, levando a aloimunização de indígenas que necessitem de transfusão sanguínea e, também, na dificuldade de encontrar doadores de sangue compatíveis com um receptor de hemocomponentes indígena. Com base nos dados gerados pelo presente estudo, há evidências que haverá um aumento de probabilidade de se encontrar um doador de sangue compatível para transfusão sanguínea em pacientes Ameríndios entre os doadores de sangue descendentes de asiáticos.
Aplicação da nanotecnologia como ferramenta de drug delivery no estudo de terapias moleculares e farmacológicas para o câncer de pele
(2022) Ghisio, Estefany Carolina; Wink, Márcia Rosângela; Paese, Karina
O câncer de pele é um dos tipos de câncer mais comuns e os tipos mais frequentes são o carcinoma escamoso, o carcinoma basocelular e omelanoma. Esta patologia ocorre através de um crescimento anormal das células da pele e se detectada precocemente pode ser tratada de forma eficaz. Apesar da melhora nos desfechos dos pacientes, aumentando as taxas de sobrevida global, os tratamentos apresentam algumas particularidades, como respostas diferenciadas em diferentes tipos de tumor e aquisição de resistência ao tratamento pelo paciente e alguns efeitos adversos. Dessa forma, a nanotecnologia se apresenta como uma alternativa visando o aprimoramento dos tratamentos antitumorais. Esta abordagem pode aumentar a biodisponibilidade das moléculas terapêuticas em alvos específicos reduzindo os efeitos adversos do tratamento resultando em uma maior eficácia terapêutica. O objetivo deste trabalho foi realizar uma revisão na literatura acerca da utilização da nanotecnologia associada a diferentes terapias e aplicadas no câncer de pele. Além disso, esse trabalho teve como objetivo desenvolver uma nanopartícula polimérica de Eudragit® RS 100 com estabilidade eletrostática. Acerca da revisão de trabalhos que utilizaram a nanotecnologia como ferramente de drug delivery para tratamento de cancer depele, os resultados encontrados apresentaram resultados promissores de inibição da disseminacao tumoral, reducao de taxas de metastases e melhora na taxa de sobrevida global nos experimentos in vivo. Enquanto isso, no objetivo experimental dessa dissertação, obteve-se uma nanocápsula polimérica com resultados com características monomodais e homogêneas indicando um potencial veículo farmacológico promissor quando associado a novos agentes terapêuticos ou a dacarbazina, no entanto necessitando de maistestes para demonstrar seu potencial uso.
Aprendizado de máquina e “software” open-source na elaboração de reconstruções tridimensionais para o estudo de neurônios humanos e seus espinhos dendríticos
(2022) Renner, Josué; Rasia Filho, Alberto Antonio
A descrição da estrutura tridimensional (3D) do corpo neuronal, da ramificação dendrítica e dos espinhos dendríticos dos neurônios é essencial para a compreensão de como ocorre o processamento de informações no sistema nervoso ao longo da filogenia, mormente à complexidade que existe no ser humano. Frequentemente, esses componentes da estrutura neuronal apresentam conformações espaciais múltiplas, tornando necessária a elaboração de reconstruções 3D digitais para estudos morfológicos mais detalhados e precisos. A elaboração dessas reconstruções é, no entanto, desafiadora devido às questões relacionadas com a disponibilidade de “software” e com a complexidade do tecido nervoso e dificuldades técnicas inerentes ao processamento histológico de amostras postmortem humanas. A presente dissertação de mestrado teve como objetivo aplicar e desenvolver procedimentos de reconstrução 3D a fim de estudar a forma de neurônios humanos e seus espinhos dendríticos impregnados pela técnica de Golgi sob microscopia óptica de campo claro. A partir de imagens de microscopia de luz capturadas sequencialmente ao longo do eixo espacial ‘z’, o “software” open-source Neuromantic foi utilizado para a elaboração de reconstruções 3D e obtenção de dados morfométricos dos corpos celulares e ramificações dendríticas dos neurônios de von Economo presentes no córtex cingulado anterior e de neurônios com corpo celular fusiforme no pré-cúneo humanos. Para o estudo da presença, distribuição, número e diferentes formas dos espinhos dendríticos desses neurônios, reconstruções 3D foram feitas com algoritmo computacional na plataforma comercial MATLAB® com imagens microscópicas de maior aumento. De modo a evitar o uso adicional de “software” comercial, por causa de altos custos impeditivos e menor acesso a todos os pesquisadores, o presente trabalho também objetivou desenvolver um método adicional, simples, acessível e confiável para a reconstrução 3D de espinhos dendríticos com “software” gratuito. Para isso, utilizou-se o “software” open-source ilastik, que emprega algoritmos de aprendizado supervisionado de máquina para a segmentação de imagens. Esse novo método foi aplicado para a composição de reconstruções 3D dos espinhos dendríticos de neurônios do núcleo cortical do complexo amigdaloide humano, mas pode ser utilizado a priori em diversas outras áreas nervosas igualmente. As ferramentas computacionais que permitiram a elaboração das reconstruções 3D geraram dados morfológicos imprescindíveis sobre a forma do soma, orientação espacial dos ramos dendríticos nos três eixos espaciais e da presença, distribuição, número e forma diversa dos espinhos dendríticos dos neurônios estudados. Neurônios corticais e subcorticais humanos (e de outros animais) podem ser reconstruídos para estudos ontogenéticos, filogenéticos e hodológicos em cada área de interesse e/ou tipo neuronal relevante bem como para a investigação de alterações morfológicas de estruturas neuronais em doenças neurológicas e psiquiátricas. Por utilizar “software” que estão gratuitamente disponíveis para download e uso, o presente trabalho disponibiliza como realizar tais estudos e viabiliza o desenvolvimento de pesquisas nas quais as reconstruções 3D neuronais tornam-se acessíveis, mesmo com poucos recursos disponíveis, com qualidade, relevância internacional e atualidade dos dados obtidos, contribuindo para o conhecimento humano na área da Morfologia e das Neurociências.
Ativação do sistema nervoso simpático e parassimpático dependente da saturação de oxigênio de bebês prematuros
(2017) Brandalise, Carmen Lucia; Rigatto, Katya Vianna; Roncato, Gabriela
O objetivo deste estudo foi verificar qual a associação entre a saturação de O2 e o balanço simpatovagal em bebês prematuros. Participaram deste estudo 7 bebês prematuros com idade gestacional entre 31 e 36 semanas, internados na Unidade de Terapia Intensiva Neonatal do Hospital Fêmina. Para avaliar a saturação de O2 dos prematuros, foi utilizado o monitor de pacientes da marca GE modelo B20. O sistema nervoso simpático e parassimpático (SNSP) foi avaliado através da gravação de um eletrocardiograma durante dez minutos, realizado durante um período no qual os bebês estavam tranquilos e na posição de decúbito dorsal. O sinal foi gravado através do equipamento da marca Micromed, com frequência de amostragem de 600 Hz. O sinal foi armazenado como intervalos RR e analisados pelo programa MATLAB. Um método auto regressivo foi utilizado para avaliar a variabilidade da frequência cardíaca (VFC), baseado na análise espectral de componentes de alta (0,15 – 0,4 Hz) e baixa (0,03 – 0,15 Hz) frequências. Os resultados foram expressos por valores absolutos (LF e HF) e normalizados; e, como último procedimento, a razão LF/HF foi calculada. Os dados foram analisados pelo programa SPSS versão 17.0. As médias e desvios padrões foram calculados através do teste de Shapiro-Wilk. As correlações foram realizadas através do método de Spearman, sendo p-valor<0,05 considerado significante. Houve uma forte correlação da modulação simpática e parassimpática com a VFC. Além disso, observamos uma forte correlação entre HF e LF, indicando que o SNSP estão sendo maturados concomitantemente. Apesar de não haver correlação significante entre a saturação média de O2 com a VFC, nossos resultados mostraram que quanto maior a saturação média de O2, menor é a modulação simpática nos bebês prematuros. Portanto o estudo concluiu que a maturação do bebê é acompanhada pela maturação simpática e parassimpática e, consequentemente, por uma situação fisiológica favorável que permite um melhor controle reflexo do sistema cardiovascular.
Atividade antimicrobiana e antivirulência de compostos provenientes de fonte natural
(2021) Rossatto, Fernanda Cristina Possamai ; Zimmer, Karine Rigon ; d’Azevedo, Pedro Alves
O resíduo do processamento da uva representa uma fonte importante de compostos renováveis, cuja atividade biológica permanece pouco estudada. Estes resíduos são produzidos em grandes quantidades, podendo causar danos ambientais. Neste sentido, a busca por compostos bioativos com propriedades antimicrobianas e antivirulência nesta matéria-prima é uma alternativa interessante. Uma série de metabolitos secundários – como os compostos fenólicos – são produzidos pela uva, exercendo funções protetivas contra agentes patogênicos. Eles são estratégias promissoras em virtude de sua diversidade estrutural e amplo espectro de propriedades biológicas. Em paralelo, há uma necessidade urgente por novas opções terapêuticas para o controle de infecções causadas por bactérias e fungos, principalmente infecções associadas a biofilmes, as quais são de difícil controle e tratamento. Por estas razões, o presente trabalho teve como objetivo principal a busca por estratégias antimicrobianas e antivirulência – com foco na pesquisa antibiofilme – no controle de infecções bacterianas e fúngicas. Numa primeira etapa, foi investigado o potencial de extratos e frações provenientes do resíduo da uva no controle de biofilmes bacterianos. Para este objetivo, três variedades de resíduos da uva foram coletadas: a uva branca Chardonnay (Vitis vinifera) e as uvas tintas Cabernet Franc (Vitis vinifera) e Bordô (Vitis labrusca). Extração assistida por ultrassom foi conduzida de forma exaustiva com diclorometano, metanol e água. Quatro modelos bacterianos foram utilizados: Staphylococcus aureus, Staphylococcus epidermidis, Klebsiella pneumoniae e Pseudomonas aeruginosa. A atividade antimicrobiana foi mensurada pela obtenção da concentração inibitória mínima (CIM) e por meio da leitura da OD620nm. Possível efeito sinérgico foi verificado através de combinações entre os extratos e antimicrobianos convencionais. A atividade antibiofilme dos extratos a 5 mg/mL foi avaliada através da metodologia do cristal violeta. Os extratos apresentaram valor de CIM entre 1,25 mg/mL e 5 mg/mL contra os microrganismos testados e observou-se efeito sinérgico entre o extrato aquoso da uva Cabernet Franc e o antimicrobiano oxacilina, e extrato aquoso da uva Chardonnay e vancomicina contra os modelos Gram-positivos. O resíduo da uva Chardonnay extraído com diclorometano apresentou os melhores resultados para todas bactérias testadas, inibindo a formação do biofilme sem inibir o crescimento bacteriano. Este extrato foi submetido à cromatografia em coluna de fase normal. Duas frações apresentaram atividade antibiofilme, prevenindo a adesão de S. aureus e S. epidermidis à superfície de poliestireno em 80% a 0,62 mg/mL e inibindo o biofilme de K. pneumoniae em 25% a 0,31 mg/mL. As frações e extratos foram analisados por cromatografia líquida acoplada à espectrometria de massas (UHPLC-ESI- MS/MS) e indicaram a presença de ácidos graxos, polifenois, alcaloides e aminoácidos. Além disso, a toxicidade dos extratos foi avaliada em modelo invertebrado de Caenorhabditis elegans, demonstrando que os mesmos não afetaram a sobrevivência, tamanho e progenia do nematoide. Numa segunda etapa, os polifenóis ácido elágico (AE) e ácido cafeico fenetil éster (CAPE) foram avaliados quanto às suas atividades antifúngicas contra Candida spp. Para este propósito, os compostos puros foram adquiridos comercialmente e tiveram a atividade antifúngica contra C. albicans SC5314 e um painel de 10 isolados de Candida auris multirresistentes avaliada por microdiluição em caldo e por ensaio do time-kill. AE e CAPE apresentaram valores de CIM ≤ 0,5 μg/mL e entre 1 a 64 μg/mL, respectivamente. AE apresentou efeito fungistático e CAPE fungicida para ambas as espécies de Candida. O mecanismo de ação dos compostos foi investigado pelo ensaio de proteção do sorbitol e pelo ensaio de ligação ao ergosterol, indicando provável ação sobre a parede celular fúngica. CAPE foi capaz de inibir a produção de fosfolipases, biofilmes e filamentação, além de inibir a adesão de C. albicans ou C. auris a células epiteliais do pulmão. AE e CAPE não foram tóxicos a hemácias em todas concentrações testadas (até 64 μg/mL), nem ao modelo in vivo de Galleria mellonella (até 128 mg/kg). Quando G. mellonella foi pré-tratada com AE ou CAPE (32 mg/kg) antes da infecção por C. albicans ou C. auris, a taxa de sobrevivência da larva foi significativamente prolongada, com uma taxa de sobrevivência de 44% para ambos os compostos. Além disso, AE, a 4 μg/mL, prolongou em 40% a sobrevivência do nematoide C. elegans infectado com C. albicans. Em conjunto, estes resultados demonstram o potencial antibacteriano e antifúngico de metabólitos secundários de fonte natural, dentre eles, extratos e frações provenientes do resíduo da uva, e compostos da classe dos polifenóis. Em conclusão, compostos de origem natural representam uma fonte promissora de moléculas antimicrobianas e antivirulência. O desenvolvimento de novos agentes antimicrobianos a partir destas fontes enseja amenizar a problemática da resistência antimicrobiana e da escassez de opções terapêuticas para o controle de infecções.
Avaliação antibacteriana e antibiofilme associada a metabolômica para identificação de substâncias bioativas: um estudo sobre espécies de Combretum (Combretaceae)
(2021) Barros, Thayná Fernandes; Trentin, Danielle da Silva; Silva, Denise Brentan da
Espécies de Combretaceae têm sido utilizadas na medicina popular para tratar doenças inflamatórias e infecciosas, e diversos metabólitos secundários já foram descritos para algumas espécies do gênero Combretum. Infecções causadas por Staphylococcus aureus e Pseudomonas aeruginosa são reconhecidas como desafios clínicos dado o grau de virulência dos mesmos e resistência a múltiplos antibacterianos. Neste sentido, a terapia antivirulência, que visa atenuar a virulência sem inibir o crescimento bacteriano, representa uma abordagem alternativa para controlar infecções bacterianas com menor pressão para o surgimento de populações resistentes. Dessa forma, a aplicação de técnicas metabolômicas e análises de dados têm se mostrado ferramentas atrativas para acelerar a descoberta de fármacos. Sendo assim, este estudo teve como objetivos avaliar a atividade antibacteriana e antibiofilme das espécies C. laxum, C. leprosum e C. lanceolatum frente a duas bactérias-padrão, e identificar, através do perfil metabólico e comprovação experimental, os fitocompostos bioativos. Folhas e cascas das três espécies foram coletadas na região do Pantanal, no estado do Mato Grosso do Sul, em 2016. O material vegetal foi submetido à extração acelerada por solvente e a composição química de cada extrato foi determinada por CLAE-DAD-EM. Os extratos foram avaliados frente à S. aureus ATCC 25904 e P. aeruginosa ATCC 27853 quanto à atividade antibacteriana, através da técnica de microdiluição em caldo, e atividade de inibição de biofilme, pela técnica de cristal violeta. Os extratos hidrometanólicos das três espécies apresentaram maior inibição da formação de biofilme de S. aureus sem inibir o crescimento, no entanto não foram ativos para P. aeruginosa. As análises de correlação de Pearson r sugeriram 35 metabólitos como possíveis substâncias responsáveis pela ação antibiofilme de S. aureus. Destas, 18 substâncias foram adquiridas comercialmente e avaliadas in vitro. Os flavonoides luteolina, miricetina e quercetina inibiram a formação de biofilme de S. aureus, porém o precursor de taninos hidrolisáveis, ácido elágico, foi a substância mais ativa inibindo 73% da formação de biofilme (5 μM) sem afetar o crescimento bacteriano. Não foram observadas interações sinérgicas entre as quatro substâncias ativas. Considerando que flavonoides glicosilados e açúcares simples apresentaram correlação positiva com a atividade antibiofilme de S. aureus, o efeito de açúcares sobre o crescimento e a virulência bacteriana foi aprofundado. Açúcares simples, identificados nas espécies Combretum, não foram ativos contra S. aureus e também não aumentaram a ação antibiofilme das quatro substâncias acima citadas. Em estudo de revisão da literatura observamos que, flavonoides glicosilados têm menor ação antibacteriana e antivirulência do que as respectivas agliconas frente a distintas bactérias. Esta dissertação evidenciou a aplicaçãoda metabolômica para o direcionamento de substância biotivas, conferindo agilidade e menor custo no processo de identificação de protótipos. As substâncias polares das espécies de Combretum demonstraram-se mais ativas na prevenção da formação de biofilme de S. aureus, dentre as quais destacamos o ácido elágico e a turicina para prosseguir em estudos futuros. Substâncias antibiofilme podem potencialmente ser utilizadas como coadjuvantes no tratamento de infecções e no desenvolvimento de superfícies menos propensas à adesão bacteriana, fundamental na redução de infecções associadas à dispositivos médicos.
Avaliação da atividade anti-herpética do exsudato de Salvia uliginosa e do diterpeno icetexona
(2023) Monteiro, Maria antônia Cabrla; Rodrigues Júnior, Luiz Carlos; Romão, Pedro Roosevelt Torres; Programa de Pós-Graduação em Biociências
Herpes Simples Virus-2 (HSV-2) é um vírus dermatotrópico. Estudos recentes indicam que a porcentagem de indivíduos infectados pelo HSV-2 no Brasil é em média 11,3% e estima-se que cerca de 90% da população mundial possui sorologia positiva por um ou ambos os vírus. O HSV-2 também é uma infecção sexualmente transmissível que ocasiona sérios problemas em indivíduos com sistema imunológico debilitado ou sob tratamento imunossupressor, ou ainda quando é transmitido durante o parto. Os antivirais já existentes para o tratamento não atuam na latência do vírus e já existem cepas resistentes ao aciclovir, principal fármaco utilizado. Tratamentos com derivados de plantas têm apresentado eficácia contra o herpes, em modelos in vitro e in vivo. Algumas espécies de Salvia já foram estudadas frente a vírus e outros microrganismos. Análises publicadas pelo nosso grupo demonstraram que Salvia uliginosa apresenta uma atividade significativa frente a Leishmania amazonensis, um parasita intracelular responsável por causar leishmaniose. Assim, o objetivo desse trabalho foi verificar o possível efeito anti-herpético de Salvia uliginosa frente ao HSV2 in vitro. Salvia uliginosa foi coletada e identificada por um botânico. O exsudato da planta e o composto majoritário, o diterpeno icetexona (ICT), foram obtidos no Laboratório de Farmacognosia da Faculdade de Farmácia da Universidade Federal do Rio Grande do Sul. A ICT foi isolada no mesmo laboratório, por cromatografia em coluna de gel de sílica. A técnica de MTT foi utilizada na linhagem celular VERO para a análise da citotoxicidade dos extratos e composto isolado, determinando os valores de IC50 e CC50. O efeito virucida das amostras no HSV-2 foi avaliado por ensaio de placa. Os resultados indicaram que o exsudato de S. uliginosa possui atividade antiherpética in vitro, com CC50 de 193,5μg/mL, embora a ICT não. São necessários experimentos adicionais in vitro para elucidar o mecanismo de ação, e in vivo para testar a hipótese anti-herpética da Salvia uliginosa no hospedeiro infectado.
Avaliação da eficácia de uma nanoemulsão de temozolomida e da influência de co e pré-tratamentos com ferroceno em linhagens celulares de glioblastoma humano
(2023-11-08) Henn, Jeferson Gustavo; Moura, Dinara Jaqueline
O glioblastoma é um glioma de grau IV, ocorrendo predominantemente em adultos e com características altamente agressivas. O tratamento convencional para este tipo tumoral compreende ressecção cirúrgica, seguida de radioterapia combinada com quimioterapia utilizando temozolomida. Estas abordagens terapêuticas desempenham um papel essencial na gestão clínica da doença, embora ainda resultem em um prognóstico desfavorável, com uma média de sobrevida global de apenas 14 a 19 meses. Isto ocorre principalmente devido à natureza inoperável da maioria dos tumores e à resistência crescente à quimioterapia quando estes são diagnosticados em estágios avançados, o que justifica a necessidade pela busca de novas moléculas e estratégias terapêuticas para o seu tratamento. O recente progresso na área da nanotecnologia, com o desenvolvimento de sistemas de entrega de fármacos como as nanoemulsões, e a ação sensibilizante tumoral e geradora de espécies reativas de oxigênio do ferroceno, têm trazido novas possibilidades à complementação da quimioterapia em diversos tipos de câncer, aumentando a eficácia dos tratamentos. Neste contexto, esta tese apresenta dois capítulos abordando (i) as diferentes nanoestruturas já desenvolvidas para a entrega de moléculas no tratamento do câncer, como estas conseguem atingir o ambiente tumoral e aumentar a toxicidade nos tecidos-alvo, e as barreiras que estes sistemas enfrentam para alcançar resultados positivos, bem como (ii) o desenvolvimento, a caracterização e a avaliação da citotoxicidade de uma nanoemulsão contendo temozolomida e sua combinação com ferroceno em linhagens celulares de glioblastoma humano. A caracterização físico-química da nanoemulsão revelou a presença da temozolomida na interface do sistema, permitindo sua rápida liberação. Em combinação com o ferroceno, reduziram a viabilidade celular em tratamentos agudos e em regime de dois ciclos, aumentando a sensibilidade à temozolomida da linhagem celular T98G por meio da alteração do potencial da membrana mitocondrial, com uma indução de espécies reativas de oxigênio, com consequente morte celular. Estes resultados demonstraram a eficácia do uso de uma nanoemulsão contendo temozolomida e sua combinação com ferroceno como uma efetiva abordagem ao tratamento do glioblastoma. Além disso, o rápido desenvolvimento da nanomedicina e o constante melhoramento das técnicas relacionadas apontam para um futuro promissor no tratamento de diversos tipos de câncer com um possível aumento da qualidade de vida destes pacientes
Avaliação da variabilidade genética de receptores toll-like e sua relação com a sindemia HIV-1/tuberculose na população gaúcha
(2021) Mousquer, Gabriel Tassi; Fiegenbaum, Marilu
As pandemias da tuberculose (TB) e da síndrome da imunodeficiência adquirida (aids) se impõem como alguns dos maiores desafios para a saúde pública no século XXI. Em indivíduos coinfectados, o Mycobacterium tuberculosis e o vírus da imunodeficiência humana tipo 1 (HIV-1) atuam de maneira sinergética. Não por acaso, a TB é a principal causa de morte de indivíduos com aids. Somadas, ambas doenças contabilizaram cerca de 1,99 milhão de vítimas em 2019; no mesmo ano, a pandemia da COVID-19, doença causada pelo coronavírus da síndrome respiratória aguda grave 2 (SARS-CoV-2), emergiu, despontando como a principal causa de morte dentre as doenças infectocontagiosas e ameaçando os programas de controle da TB e da aids em todo o mundo. A convergência entre as três pandemias pode resultar em consequências catastróficas, principalmente em países subdesenvolvidos e em desenvolvimento, como o Brasil. Logo, compreender como o SARS-CoV-2, o M. tuberculosis e o HIV-1 interagem entre si é fundamental para o desenvolvimento de estratégias de prevenção e tratamento contra essas doenças infecciosas. Os receptores tipo Toll (TLRs) compõem a linha de frente na defesa inata do organismo contra diferentes microrganismos. Polimorfismos nos genes TLR2 rs111200466, TLR4 rs4986790 e TLR8 rs3764880 já foram associados com a suscetibilidade à TB e ao HIV-1, separadamente; contudo, a imunogenética da coinfecção HIV-1/TB permanece como um tema ainda inexplorado. O presente estudo conduziu uma análise da imunogenética dos polimorfismos supramencionados, buscando associações entre as variantes genéticas dos TLRs com a suscetibilidade, ou resistência, ao HIV-1, à TB e à coinfecção HIV-1/TB na população do Rio Grande do Sul (RS). Os resultados apontam para a associação entre variantes do rs111200466 com maiores contagens de linfócitos T CD3+ e CD4+ em indivíduos HIV-1 soropositivos, tal como com a suscetibilidade à coinfecção HIV-1/TB; já o rs4986790 foi associado com a suscetibilidade à TB e também à coinfecção HIV-1/TB. Por fim, também foi conduzida uma revisão sistemática da literatura vigente sobre a coinfecção TB/COVID-19, identificando o M. tuberculosis como um fator de risco para o desenvolvimento da COVID-19.
Avaliação de metodologia analítica para determinação de Compostos Orgânicos Semivoláteis (SVOCs) em água utilizando microextração líquido- líquido dispersiva e cromatografia gasosa
(2024-04-03) Silva, Lauren Ramos da; Merib, Josias de Oliveira; Programa de Pós-Graduação em Biociências
A contaminação ambiental por poluentes orgânicos se tornou um problema ambiental e econômico em escala mundial. Não é de hoje que inúmeras áreas são propensas a contaminações de diversos tipos que incluem os mais variados agentes poluentes. Desta forma, leis e regulamentações têm sido criadas com o intuito de reduzir este problema que está disseminado no mundo todo. Em 1972, ocorreu a Convenção de Estocolmo, nela foram apresentados os Poluentes Orgânicos Persistentes (POPs) compostos à base de carbono com tempo de meia-vida alto, que não sofrem degradação no meio ambiente e por isso podem se distribuir e acumular no meio ambiente, sofrendo biomagnificação e apresentando alta toxicidade aos seres humanos e ao meio ambiente. Dentre os POPs estão os Compostos Orgânicos Semivoláteis (SVOCs) que apresentam volatilidades intermediárias, ou seja, são abundantes tanto na fase condensada quanto na fase de vapor em pressão e temperatura ambientes. Os SVOCs são um grande grupo de compostos orgânicos que se subdividem em diversos outros grupos como os Pesticidas Organoclorados, Hidrocarbonetos Policíclicos Aromáticos (PAHs), Bifenilas Policloradas (PCBs), Ftalatos, e muitos outros. Neste trabalho foi proposto o desenvolvimento, otimização e validação de uma metodologia analítica para a determinação de SVOCs em água por microextração líquido-líquido dispersiva e cromatografia gasosa. A metodologia é uma alternativa mais sustentável em comparação com as metodologias oficiais para a análise de água da torneira, água do mar, água tratada, água subterrânea e água de lagoa. O fluxo de trabalho experimental foi parcialmente otimizado usando um planejamento Doehlert, e 500 µL de diclorometano (solvente de extração) foram utilizados para analisar 15 mL de água. Além disso, 500 µL de metanol (solvente dispersor), 15 s de vórtice e 2 min de centrifugação também foram utilizados para a metodologia de preparo da amostra. Nessas condições foram alcançados parâmetros analíticos satisfatórios com coeficientes de determinação (r2) superiores a 0,9635, limites de detecção (LOD) de 3,0 a 6,0 µg L-1, limites de quantificação (LOQ) de 10,0 a 20,0 µg L-1, precisão intradiária de 1,66 a 29,50% e precisão interdiária de 9,32 a 23,54%.
Avaliação do balanço simpatovagal em sujeitos do sexo masculino com diferentes composições dietéticas: vegana, vegetariana e onívora
(2018) Souza, Jéssica de; Rigatto, Katya Vianna
Introdução e objetivos: As doenças cardiovasculares estão entre as principais causas de morte no mundo. Alguns padrões alimentares podem modular o equilíbrio simpatovagal e conferir um efeito cardioprotetor. Este estudo teve como objetivo comparar a modulação do sistema nervoso simpático e parassimpático entre indivíduos veganos, vegetarianos e onívoros. Métodos e resultados: 20 indivíduos onívoros, 20 vegetarianos e 16 veganos, todos do sexo masculino, responderam questionários sobre seus hábitos alimentares e atividade física. Eles foram submetidos a um eletrocardiograma e tiveram a pressão arterial, dados antropométricos, peso, altura e dobras cutâneas examinados. Os eletrocardiogramas foram registrados por 10 minutos por um sistema de Wincardio e utilizados para realizar a análise espectral por meio de um modelo autoregressivo. Dois componentes espectrais foram considerados: baixa frequência (LF) de 0,040,15 Hz ou alta frequência (HF) de 0,15-0,5 Hz. Os componentes espectrais (ms2) foram expressos em unidades absolutas (a) e normalizados (nu). O principal achado deste estudo foi que o tipo de dieta por si só não influenciou os valores do controle reflexo da pressão arterial, LFnu e HFnu não diferiu entre os grupos (p = 0,858), similarmente à avaliação simbólica 0V (p = 0,501). A pressão arterial sistólica e diastólica também não foram diferentes entre os grupos (p = 0,47 e 0,31, respectivamente). Conclusão: Os resultados demonstram que, para os adultos do sexo masculino, as dietas onívora, vegetariana e vegana não influenciaram de forma diferenciada a modulação autonômica do coração.
Avaliação do potencial antivirulência de compostos da classe das dihidropirimidinonas: análises in silico, in vitro e no modelo in vivo de Caenorhabditis elegans
(2024-09-30) Ramos, Victória Souza; Zimmer, Karine Rigon; Biajolo , Marla Narciso Godoi; Ligabue-Braun, Rodrigo; Programa de Pós-Graduação em Biociências
Biofilmes desempenham um papel substancial na patogênese bacteriana, sendo reconhecidos por sua resistência a antimicrobianos e à resposta imunológica do hospedeiro, o que representa um grande desafio no tratamento de infecções. As dihidropirimidinonas (DHPMs) demonstraram propriedades farmacológicas de amplo espectro, incluindo atividade antibacteriana. Este estudo investigou o potencial antivirulência dos compostos da classe das DHPMs por meio de análises in silico, in vitro e in vivo. As estruturas químicas de 33 DHPMs foram submetidas à plataforma SciFinder, resultando em 171 artigos, englobando 24 microrganismos e descrevendo 14 atividades biológicas. As atividades mais citadas foram antimicrobiana (40,3%), antitumoral (21%), antagonista de cálcio (6,4%) e anti-inflamatória (5,3%). As 33 moléculas foram submetidas a análises in silico usando as plataformas SwissADME, ProTox II, SwissTargetPrediction e TargetNet. Onze possíveis alvos foram identificados, sendo os mais frequentes cinases (51,5%), proteases (36,4%) e receptores acoplados a proteínas G (30,3%). Todas as 33 moléculas foram classificadas como tendo alta absorção intestinal, e a maioria (69,2%) foi classificada como moderadamente solúvel. Vinte compostos (61,5%) foram descritos como incapazes de atravessar a barreira hematoencefálica, e 10 (30,6%) parecem não interagir com enzimas da família do citocromo P450. O potencial de 11 DHPMs em inibir e erradicar biofilmes de Staphylococcus aureus e Pseudomonas aeruginosa foi avaliado por meio do ensaio com cristal violeta, usando concentrações variando de 1 μg/mL a 1024 μg/mL. Os compostos DB32, DB39 e PJ09 mostraram significativa inibição e erradicação dos biofilmes para ambas bactérias testadas. O composto DB32 inibiu 94% da formação de biofilme de S. aureus a 1 μg/mL e 30% do biofilme de P. aeruginosa a 64 μg/mL, além de erradicar aproximadamente 30% do biofilme de P. aeruginosa a 512 μg/mL. O composto DB39 erradicou mais de 40% do biofilme de S. aureus em todas as concentrações testadas, com 63% de erradicação a 2 μg/mL. O omposto PJ09 inibiu até 30% da formação de biofilme de P. aeruginosa a 8 μg/mL sem afetar o crescimento bacteriano e erradicou aproximadamente 30% do biofilme de P. aeruginosa a 256 μg/mL. Os três compostos com melhor atividade contra biofilmes, DB32, DB39 e PJ09, tiveram suas interações com potenciais alvos analisadas por meio de docking molecular. Usando a plataforma SwissDock, as 3 moléculas foram acopladas às proteínas YmcA e LicT, previamente identificadas em busca guiada por farmacóforo. Na proteína YmcA, os dois compostos do grupo DB se ligam no mesmo sítio, enquanto o composto PJ09 se liga em um sítio diferente. Na proteína LicT, os três compostos se ligam em sítios distintos. O estudo também explorou o impacto desses compostos na produção de piocianina, atividade proteolítica, , e sensibilidade ao estresse oxidativo, em P. aeruginosa. Os compostos DB32 e DB39 inibiram a produção de piocianina em 65% e 32%, respectivamente, enquanto o PJ09 a estimulou. Nenhum dos compostos testados teve efeito significativo sobre a atividade proteolítica ou estresse oxidativo. Para avaliar a toxicidade dos 3 compostos, foi realizado um ensaio de toxicidade aguda usando o modelo de C. elegans, indicando que DB32, DB39 e PJ09 não foram tóxicos. Os resultados destacam o potencial das DHPMs como novos agentes antibiofilme, justificando investigações adicionais sobre sua eficácia contra outros microrganismos e otimização para uso terapêutico.
Avaliação do potencial tecnológico de hidrogéis de quitosana reticulados com genipina na entrega oral de fármacos
(Wagner Wessfll, 2022) Kaufmann, Gabriela; Aguirre, Tanira Alessandra Silveira; Goettert, Márcia Inês
A quitosana, polímero biodegradável extraído a partir da quitina, vem se destacando na indústria farmacêutica como carreador de fármacos. A genipina, composto natural extraído a partir do Jenipapo, atua como agente reticulante natural. Sendo assim, o presente trabalho objetivou desenvolver e caracterizar hidrogéis de quitosana reticulados com genipina e avaliar in vitro o perfil de liberação do diclofenaco de sódio. Além disso, objetivou-se avaliar a citotoxicidade in vitro dos componentes utilizados na obtenção dos hidrogéis, bem como de frações liberadas contendo o fármaco em diferentes meios de dissolução. A formulação obtida foi caracterizada em termos de morfologia macroscópica e microscopia, perfil termoquímico e perfil de intumescimento. O perfil de liberação do fármaco foi analisado através de ensaio de dissolução in vitro em pH 1,2 e 6,8, e também em fluidos intestinais simulados em pH 3,0 e 7,0. A citotoxicidade foi avaliada através do teste de MTT em células MRC5 e Caco-2, com tratamentos de 6 e 24 h. A formulação final apresentou as seguintes concentrações: quitosana 1,250% (m/v), genipina 0,185% (m/v) e diclofenaco sódico 0,250% (m/v). A partir dos ensaios caracterizamos o hidrogel como um dispositivo altamente poroso, com perfil de intumescimento e perfil de liberação dependentes de pH e com características intrínsecas de promoção de proteção entérica. A liberação em pH ácido foi mínima (10% ± 0,43) em comparação à liberação em 5 h em pH próximo ao neutro (70% ± 13,5). Testes de citotoxicidade dos componentes e da formulação revelaram propriedades não tóxicas em ambas linhagens celulares, apresentando viabilidades entre 75% (± 5,94) e 106% (± 3,71) nas duas concentrações mais baixas testadas. A formulação desenvolvida neste estudo é biocompatível e possui potencial para liberação controlada de diclofenaco de sódio administrado pela via oral.
Avaliação molecular de nódulos de Tireoide
(2024-08-30) Molina, Freddy David Moposita; Mattevi, Vanessa Suñé; Golbert, Lenara; Programa de Pós-Graduação em Biociências
Apesar de sua alta prevalência e natureza benigna na maioria dos casos, a investigação dos nódulos da tireoide ainda apresenta potenciais armadilhas diagnósticas, especialmente em casos com citologia indeterminada. Este estudo visa verificar a prevalência de mutações nos genes BRAF, RAS e rearranjos RET/PTC em pacientes submetidos à punção aspirativa por agulha fina por ultrassonografia (PAAF-US) para nódulos tireoidianos. A extração de DNA e RNA total foi realizada com Trizol, seguida da avaliação da proporção de células epiteliais tireoidianas através da expressão do gene de citoqueratina 7. As mutações pontuais foram detectadas por análise de DNA utilizando sequenciamento de Sanger. Para os rearranjos, se desenharam primers para flanquear o ponto de fusão, e os produtos de PCR das fusões gênicas se visualizaram através de eletroforese em gel de agarose. Os resultados positivos foram confirmados por sequenciamento de Sanger dos produtos de PCR. Um total de 231 nódulos tireoidianos em 220 pacientes foram avaliados, sendo 86.8% do sexo feminino e com uma idade média de 55.6±13.9 anos. A distribuição citológica foi a seguinte: 4.8% (n = 11) não diagnósticos (Bethesda I); 61.0% (n=141) benignos (Bethesda II); 13.9% (n=32) atipias de significado indeterminado (AUS) (Bethesda III); 12.1% (n=28) neoplasia folicular (FN) (Bethesda IV); 4.3% (n=10) suspeitos de malignidade (Bethesda V); e 3.9% (n=9) malignos (Bethesda VI). Para a análise molecular, foram incluídas amostras que continham quantidade suficiente de ácidos nucleicos e uma proporção de células epiteliais superior a 10%. Portanto, foram obtidos DNA e RNA de qualidade de 200 amostras. As mutações BRAF, RAS e rearranjos RET/PTC foram identificadas em 14% das 200 amostras. A frequência das mutações BRAF-like foi de 5.5%, detectadas em 9 dos 17 nódulos malignos (52.9%) e em um nódulo benigno (0.7%). Quatorze mutações do tipo RAS-like foram identificadas em nódulos benignos (57.1% HRAS, 21.5% NRAS e 21.5% KRAS) e apenas uma estava presente em um nódulo maligno (5.9%). Quando consideramos os nódulos com citologia indeterminada (Bethesda III e IV, n = 53), 9 mutações foram detectadas, 6 associadas à histologia benigna (todas RAS-like), 1 com histologia maligna (BRAF-like) e 2 ainda não operados, portanto, sem diagnóstico histopatológico. Esta pesquisa conclui que a presença da mutação BRAF V600E pode ser útil para apoiar o diagnóstico de câncer de tireoide, devido ao seu alto valor preditivo positivo, uma vez que 89% dos nódulos com mutação BRAF V600E eram malignos. Além disso, critérios clínicos devem ser estabelecidos para determinar quais nódulos com mutações do tipo RAS-like requerem acompanhamento mais próximo, particularmente aqueles com citologia indeterminada.

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