Programa de Pós-Graduação em Biociências

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Análise funcional e estrutural da proteína Kin3 em Saccharomyces cerevisiae
(2017) Morás, Ana Moira; Moura, Dinara Jaqueline
A proteína Kin3 é a única representante da família das NIMA-related kinases em Saccharomyces cerevisiae. Tendo em vista a existência de poucos estudos sobre a possível função da proteína Kin3 na resposta a danos no DNA e a inexistência de estudos sobre sua estrutura, o objetivo deste trabalho foi elucidar o envolvimento da proteína Kin3 na reposta a danos no DNA in vitro, considerando interações genéticas e compreendendo aspectos estruturais em modelos in silico. Primeiramente foi avaliado o papel da Kin3 na resposta a metil metano sulfonato (MMS), explorando interações previamente descritas com Mre11 e Srs2. Os resultados mostraram que a estratégia de tratamento de 2 h de exposição seguindo de 1 h de recuperação foi eficiente em induzir quebras no DNA. Adicionalmente, um perfil epistático de Kin3 com Mre11 e Rad52 foi encontrado, sugerindo um possível envolvimento com a via de recombinação homóloga. Esta hipótese foi corroborada com um efeito aditivo na taxa de mutação do duplo mutante kin3∆rad52∆. Posteriormente, foi realizada a modelagem da estrutura da proteína Kin3, com e sem ATP e cofator (Mg+2) e as conformações do loop de ativação após simulação por dinâmica molecular foram exploradas. Os principais achados mostraram a disrrupção de uma pequena estrutura de α-hélice na ausência de ATP, indicando que a ligação com o nucleotídeo é importante para estabilizar esta região. Esta modificação não aproximou os resíduos de serina e treonina localizados no loop de ativação do fosfato γ do ATP, o que permitiria a reação de catálise, não modificou a posição do motivo DFG ou o nucleotídeo para a posição na forma ativa. Assim, neste trabalho foi explorada a função da proteína Kin3 na resposta a DSBs, sugerindo um envolvimento mais significativo com a via da recombinação homóloga. Adicionalmente, foi estabelecida pela primeira vez informações sobre a estrutura da Kin3.
Análise de parâmetros bioquímicos de fêmeas submetidas à dieta hipercalórica ou restritiva durante a gestação e a lactação
(2017) Andrade, Andressa Alves de; Giovenardi, Márcia; Almeida, Silvana de
A dieta materna antes e durante a gestação pode influenciar na saúde da mãe e do feto bem como em futuras da prole. Observando-se as preferências alimentares atuais, com alimentos altamente calóricos, nosso estudo teve como objetivo analisar parâmetros bioquímicos no sangue e nos tecidos metabólicos, em fêmeas que durante a gestação e a lactação foram submetidas à dieta hipercalórica ou restritiva. Foram estudadas camundongos fêmeas isogênicas (n=24), da linhagem BALB/c (60 dias de idade, peso entre 18-25 g), provenientes do biotério da UFCSPA. Foram separadas em grupos de acordo com a dieta que receberam: dieta padrão ad libitum (CONT), dieta restritiva (RD, 30% Kcal a menos do que a dieta padrão), dieta hipercalórica (HD: acréscimo de 60% Kcal comparada a padrão). A adaptação à dieta foi de 25 dias e, a seguir, foram acasaladas. O de peso foi aferido periodicamente e o índice de Lee calculado. No 22° DDP fez-se eutanásia dos animais, coletamos o sangue e os tecidos adiposo, hepático e muscular. O perfil lipídico e glicídico foi analisado utilizando-se kits comerciais e, nos tecidos metabólicos, foi analisado: atividade das enzimas catalase (CAT) e superóxido dismutase (SOD), geração de espécies reativas de oxigênio por ensaio de oxidação de diacetato de dihidrodiclorofluoresceína, peroxidação lipídica por TBARS e quantificação do nível de proteína NF-kB.Os dados foram expressos por média ± SEM e analisados pela variância única seguindo o teste de comparação múltipla de Dunnett (p <0,05). A análise sérica mostrou um aumento significativo nos triglicerídeos do grupo HD em comparação com o CONT e o RD. Os outros parâmetros do perfil lipídico e a glicemia permaneceram similares entre os 3 grupos. O tempo (dias) para as fêmeas emprenhar foi mais longo no RD comparado ao grupo CONT, embora não tenha sido observada diferença significativa no número de camundongos por fêmea entre os grupos avaliados, bem como no aumento de peso das ninhadas. Nossos resultados mostraram que as modificações da dieta afetaram mais significativamente os parâmetros de estresse oxidativo no fígado e nos músculos do que o tecido adiposo em animais expostos à dieta hipercalórica. A diminuição da superóxido dismutase está fortemente correlacionada ao nível EROs em todos os tecidos avaliados, com um perfil de correlação muito semelhante nos tecidos hepático e muscular.
Ativação do sistema nervoso simpático e parassimpático dependente da saturação de oxigênio de bebês prematuros
(2017) Brandalise, Carmen Lucia; Rigatto, Katya Vianna; Roncato, Gabriela
O objetivo deste estudo foi verificar qual a associação entre a saturação de O2 e o balanço simpatovagal em bebês prematuros. Participaram deste estudo 7 bebês prematuros com idade gestacional entre 31 e 36 semanas, internados na Unidade de Terapia Intensiva Neonatal do Hospital Fêmina. Para avaliar a saturação de O2 dos prematuros, foi utilizado o monitor de pacientes da marca GE modelo B20. O sistema nervoso simpático e parassimpático (SNSP) foi avaliado através da gravação de um eletrocardiograma durante dez minutos, realizado durante um período no qual os bebês estavam tranquilos e na posição de decúbito dorsal. O sinal foi gravado através do equipamento da marca Micromed, com frequência de amostragem de 600 Hz. O sinal foi armazenado como intervalos RR e analisados pelo programa MATLAB. Um método auto regressivo foi utilizado para avaliar a variabilidade da frequência cardíaca (VFC), baseado na análise espectral de componentes de alta (0,15 – 0,4 Hz) e baixa (0,03 – 0,15 Hz) frequências. Os resultados foram expressos por valores absolutos (LF e HF) e normalizados; e, como último procedimento, a razão LF/HF foi calculada. Os dados foram analisados pelo programa SPSS versão 17.0. As médias e desvios padrões foram calculados através do teste de Shapiro-Wilk. As correlações foram realizadas através do método de Spearman, sendo p-valor<0,05 considerado significante. Houve uma forte correlação da modulação simpática e parassimpática com a VFC. Além disso, observamos uma forte correlação entre HF e LF, indicando que o SNSP estão sendo maturados concomitantemente. Apesar de não haver correlação significante entre a saturação média de O2 com a VFC, nossos resultados mostraram que quanto maior a saturação média de O2, menor é a modulação simpática nos bebês prematuros. Portanto o estudo concluiu que a maturação do bebê é acompanhada pela maturação simpática e parassimpática e, consequentemente, por uma situação fisiológica favorável que permite um melhor controle reflexo do sistema cardiovascular.
Investigação da variabilidade do gene ACKR1 em doadores de sangue de Porto Alegre/RS
(2017) Höher, Gabriela; Almeida, Silvana de; Fiegenbaum, Marilu
Os sistemas de grupos sanguíneos são caracterizados pela presença de antígenos na membrana eritrocitária. Estes antígenos possuem características polimórficas e funcionais originadas a partir de mudanças ao nível genético que variam desde polimorfismos de um único nucleotídeo (SNPs) a trocas gênicas como inversões, deleções, inserções, splicing alternativo, dentre outros mecanismos. O sistema de grupo sanguíneo Duffy é clinicamente significativo, podendo estar relacionado com reação hemolítica transfusional e doença hemolítica do recém-nascido. Inicialmente, revisamos as bases moleculares do gene ACKR1, que codifica a glicoproteína DARC, responsável pela expressão dos antígenos Duffy. Estudos prévios já identificaram variantes genéticas que determinam a expressão fraca ou nula dos antígenos Fya e Fyb e, no presente trabalho, objetivamos realizar um rastreamento de variantes genéticas que possam estar associadas com discrepâncias entre fenótipo-genótipo em doadores de sangue de Porto Alegre, Rio Grande do Sul. A amostra, composta por 382 doadores voluntários de sangue, foi determinada por hemaglutinação e discriminação alélica dos SNPs c.125G>A, c.265C>T e c.1-67T>C por PCR em tempo real. A partir da análise de correlação entre o fenótipo e o genótipo, nós sequenciamos o gene ACKR1 em 11 doadores (2,88%) que apresentaram resultados discordantes. Os dados obtidos no sequenciamento foram avaliados in silico, através dos programas Poly-Phen2, SIFT e RegulomeDB. Nossa investigação detectou 11 variantes genéticas, das quais 4 (c.-541C>T, c.21+150C>T, c.22-58A>G e c.298G>A SNPs) discutimos o aparente efeito funcional na estrutura e expressão da proteína DARC. Em conclusão, eventos moleculares podem resultar em genótipo e fenótipo eritrocitário sendo aparentemente discrepante. Dessa forma, estudos adicionais, que caracterizem o impacto funcional de variantes genéticas associadas à predição de novos alelos de grupos sanguíneos, são fundamentais na implementação de técnicas moleculares seguras para a genotipagem dos antígenos de pacientes e doadores em bancos de sangue. O aperfeiçoamento das metodologias moleculares pode contribuir na prática transfusional através do manejo de unidade de sangue apropriadas para cada indivíduo.
Compostos com atividade antibiofilme em ovos de artrópodes
(2018) Fraga, Fernando Bueno Ferreira Fonseca de; Seixas, Adriana; Zimmer, Karine Rigon
Uma característica importante de bactérias patogênicas é a sua capacidade de formar biofilmes, os quais apresentam grande recalcitrância à terapia antimicrobiana convencional e às defesas do hospedeiro. O surgimento acelerado e crescente de bactérias resistentes a múltiplos antimicrobianos se tornou um grave problema de saúde pública e vem impulsionando a busca por novos antimicrobianos. Os artrópodes, com sua grande diversidade de espécies, têm se mostrado uma importante fonte de novas moléculas com atividade biológica. Entretanto, a descrição de compostos com atividade antimicrobiana provenientes de ovos de artrópodes é escassa. Partindo da hipótese que os artrópodes apresentam mecanismos de proteção contra patógenos microbianos tanto no estágio adulto, como em estágios imaturos, este estudo investigou a presença de compostos com atividade antimicrobiana e antibiofilme em ovos de artrópodes. Para tanto, foram preparados extratos orgânico e aquoso a partir de ovos de Anagasta kuehniella e seu efeito sobre biofilmes bacterianos foi avaliado pelo método do cristal violeta. Os resultados obtidos demonstraram que o extrato aquoso foi capaz de inibir a formação de biofilme por Staphylococcus epidermidis sem inibir o crescimento. Ensaios utilizando tratamentos térmico e enzimático indicaram que a atividade antibiofilme estava relacionada a compostos proteicos presentes no extrato o qual foi posteriormente submetido a cromatografia de exclusão molecular da qual foi obtida uma fração parcialmente purificada com atividade antibiofilme enriquecida. O extrato e a fração tiveram seu perfil de proteínas analisado por SDS-PAGE e sua atividade antibiofilme avaliada por microscopia eletrônica de varredura (MEV). Após tratamento com o extrato e/ou fração foi possível observar uma inibição da formação de biofilme por S. epidermidis de aproximadamente 65% e também a redução da presença de substância polimérica extracelular, sem alterações morfológicas aparentes nas células bacterianas. Nossos resultados sugerem que proteínas presentes nos ovos de A. kuehniella são capazes de inibir a formação de biofilmes bacterianos e reforça o potencial dos artrópodes como fontes de produtos naturais aplicados à biotecnologia.
Análise molecular de variantes de grupos sanguíneos em populações indígenas
(2018) Rodrigues, Mirelen Moura de Oliveira; Fiegenbaum, Marilu; Almeida, Silvana de
A frequência dos alelos de grupos sanguíneos é diferente de acordo com a origem étnica da população, o que torna importante a determinação da variabilidade desses alelos em tribos indígenas. Devido as características culturais, que, por vezes, podem ser somadas à localização geográfica de difícil acesso, o isolamento, endocruzamentos e efeito do fundador podem propiciar o aumento da frequência de genótipos que são raros nas demais populações. Esta condição tem impacto direto na prática transfusional, visto que estes genótipos raros não são comuns na população de doadores de sangue. A presente dissertação analisou a variabilidade genética em 6 marcadores relacionados a expressão de antígenos de grupos sanguíneos (Diego, Kell, Duffy, Kidd e MNS) que apresentam impacto na prática transfusional em indivíduos de tribos indigenas Kaingang (n = 72) e Guarani (n = 234) amostradas no período entre 1990 — 2000. A variabilidade observada nesses grupos foi relacionada com a observada em tribos Kaingang e Guarani amostradas no período de 1950-1960, com o banco de dados 1000 genomas (população de Americanos, Asiáticos, Europeus e Africanos) e com doadores de sangue brasileiros das regiões Sul, Sudeste, Norte e Nordeste. A análise das variantes genéticas de grupos sanguíneos foi realizada utilizando a técnica de PCR em tempo real, com sondas de hidrólise do sistema TaqManB (Thermo Fisher) para o sistema Diego c.2561C>T (D/*01/*02, rs2285644), Kell c.578 C>T (KEL*01/*02,rs 8176058), Duffy c.125 A>G e c.1-67T>C (FY*01/*02, rs12075; FY*02N.01, rs2814778), Kidd c.838G>A (JK*01/*02, rs1058396) e MNS c.143T>C (GYPB*S/GYPB*s, rs7683365). As frequências alélicas foram comparadas utilizando o teste de Qui- quadrado com correção de Yates. Todas as frequências genotípicas estão de acordo com o esperado para populações em equilíbrio de Hardy-Weinberg. Quando comparados os resultados com amostras de Kaingang e Guarani coletadas no período de 1950-1960 observamos diferenças significativas (p < 0,05) para os alelos do sistema Diego (D/*01) e Duffy (FY*01) sugerindo um processo de miscigenação. Para todos os alelos analisados encontramos diferença significativa (p < 0,05) entre as tribos indígenas avaliadas e os dados de genotipagem de doadores de sangue brasileiros (Rio Grande do Sul, Paraná, Santa Catarina, São Paulo, Minas Gerais, Bahia e região do Norte do Brasil — ntotal= 3215), com exceção da amostra de doadores de sangue descendentes de Japoneses, principalmente para a tribo Guarani. De acordo com os resultados obtidos através da análise de Fsr, com intervalo de confiança de 95%, a diferenciação genética foi maior entre as populações de Kaingang e Africanos (Fs7T= 0,168) e de Guarani e Africanos (FsT= 0,190) do que com as outras populações avaliadas pelo Projeto 1000 Genomas (Ntotal = 2504). Embora não exista grande diferenciação genética, para as variantes analisadas, entre os ameríndios do presente estudo quando comparados com populações de Europeus, Asiáticos e Americanos, as diferenças de frequências alélicas e genotipicas entre as populações indígenas e de doadores de sangue devem ser consideradas. Isso porque estas diferenças podem impactar na prática transfusional, levando a aloimunização de indígenas que necessitem de transfusão sanguínea e, também, na dificuldade de encontrar doadores de sangue compatíveis com um receptor de hemocomponentes indígena. Com base nos dados gerados pelo presente estudo, há evidências que haverá um aumento de probabilidade de se encontrar um doador de sangue compatível para transfusão sanguínea em pacientes Ameríndios entre os doadores de sangue descendentes de asiáticos.
Avaliação do balanço simpatovagal em sujeitos do sexo masculino com diferentes composições dietéticas: vegana, vegetariana e onívora
(2018) Souza, Jéssica de; Rigatto, Katya Vianna
Introdução e objetivos: As doenças cardiovasculares estão entre as principais causas de morte no mundo. Alguns padrões alimentares podem modular o equilíbrio simpatovagal e conferir um efeito cardioprotetor. Este estudo teve como objetivo comparar a modulação do sistema nervoso simpático e parassimpático entre indivíduos veganos, vegetarianos e onívoros. Métodos e resultados: 20 indivíduos onívoros, 20 vegetarianos e 16 veganos, todos do sexo masculino, responderam questionários sobre seus hábitos alimentares e atividade física. Eles foram submetidos a um eletrocardiograma e tiveram a pressão arterial, dados antropométricos, peso, altura e dobras cutâneas examinados. Os eletrocardiogramas foram registrados por 10 minutos por um sistema de Wincardio e utilizados para realizar a análise espectral por meio de um modelo autoregressivo. Dois componentes espectrais foram considerados: baixa frequência (LF) de 0,040,15 Hz ou alta frequência (HF) de 0,15-0,5 Hz. Os componentes espectrais (ms2) foram expressos em unidades absolutas (a) e normalizados (nu). O principal achado deste estudo foi que o tipo de dieta por si só não influenciou os valores do controle reflexo da pressão arterial, LFnu e HFnu não diferiu entre os grupos (p = 0,858), similarmente à avaliação simbólica 0V (p = 0,501). A pressão arterial sistólica e diastólica também não foram diferentes entre os grupos (p = 0,47 e 0,31, respectivamente). Conclusão: Os resultados demonstram que, para os adultos do sexo masculino, as dietas onívora, vegetariana e vegana não influenciaram de forma diferenciada a modulação autonômica do coração.
Efeitos da suplementação com ômega-3 sobre parâmetros metabólicos e marcadores de dano oxidativo e inflamação no intestino de ratos com obesidade induzida por dieta hiperlipídica
(2018) Hahn, Gabriela Fernandes; Porawski, Marilene
A obesidade é uma doença metabólica complexa que não possui um tratamento efetivo. Neste sentido, diversos estudos já evidenciaram os efeitos benéficos do ômega-3 para a saúde. Contudo, pouco é sabido sobre os efeitos do ômega-3 no intestino. Assim, o objetivo deste trabalho foi avaliar os efeitos da suplementação com ômega-3 nas alterações metabólicas e intestinais observadas na obesidade. Materiais e métodos: A obesidade foi induzida por 5 meses em 40 ratos Wistar por high fat diet (HFD) com 45% das calorias em lipídios. A partir do 4º mês os animais foram divididos em 4 grupos (n=10 cada): I- Standard diet (SD); II- SD + ômega-3; III- HFD e IV- HFD + ômega-3. Os animais nos grupos SD e HFD receberam 1 mL de solução salina diariamente e os animais nos grupos SD + ômega-3 e HFD + ômega-3 foram suplementados com ômega-3 (1g/Kg) diariamente via gavagem. Foi mensurado a evolução de peso e o consumo de ração, além de parâmetros bioquímicos no sangue e análises de estresse oxidativo e inflamação no intestino. Os dados foram avaliados com ANOVA de duas via e pós teste de Bonferroni, um valor de p < 0,05 foi considerado significante. Aprovação CEUA/UFCSPA nº 232/13. Resultados: Os animais do grupo HFD+O ganharam menos peso quando comparados aos animais do grupo HFD sem suplementação, além de acumularem menos gordura abdominal e epididimal. No grupo HFD+O também houve diminuição do índice de adiposidade, índice de Lee e índice HOMA-IR, além de redução no colesterol total, triglicerídeos, LDL, VLDL e insulina plasmática. No intestino, o grupo HFD+O apresentou redução nas espécies reativas de oxigênio, lipoperoxidação, atividade das enzimas antioxidantes superóxido dismutase e catalase bem como menor ativação do NFκB e produção de TNFα. Conclusões: Esses resultados indicam que a suplementação com ômega-3 possui um papel benéfico na atenuação das alterações metabólicas da obesidade assim como na redução do estresse oxidativo e inflamação intestinal. Portanto, a suplementação com ômega-3 poderia ser utilizada como um adjuvante no tratamento da obesidade.
Papel da amígdala medial póstero-dorsal no controle central da atividade cardiovascular de ratos: modulação neuroquímica e resposta à restrição hídrica
(2018) Oliveira Filho, Fernando Aparecido de; Rasia Filho, Alberto Antonio; Rodrigues, José Antunes
O subnúcleo póstero-dorsal da amígdala medial (MePD) é parte relevante da circuitaria que integra comportamentos emocionais e sociais e controle central cardiovascular. Aqui, estudamos a atividade hemodinâmica basal e as respostas cardiovasculares reflexas após microinjeções de salina (0,3L, n=7), vasopressina (VP, 1pg ou 100pg/0,3 L, n= 5-7), substância P (SP, 10ng ou 100ng /0,3 L, n= 4-6); colecistoquinina (ou colecistocinina, CCK, 10nM ou 100 nM/0,3 L, n= 4/grupo), e L-Arginina (L-Arg, 2,87 nM ou 100 nM/0,3 L, n= 4-5) no MePD de ratos machos, adultos e não anestesiados. As respostas barorreflexas e quimiorreflexas foram testadas. Análise espectral e simbólica dos dados foram realizadas para avaliar a atividade central nos componentes simpáticos e parassimpáticos na variabilidade da frequência cardíaca (FC) e da pressão arterial (PA). A seguir, testamos o quanto o glutamato (2 μg/0,3 μl), quando microinjetado na MePD, é capaz de modular a resposta central à privação de água, com alterações no volume sanguíneo e osmolaridade e, consequentemente, na PA e FC. Os resultados mostraram que a VP aumentou consistentemente os parâmetros da análise espectral, o que indica uma maior resposta simpática, SP induziu um efeito dose-dependente e aumentou tanto a sensibilidade do barorreflexo e a FC provocada pelo quimioreflexo e parâmetros de análise espectral e simbólica com significados fisiológicos mistos, L-Arg aumentou a FC provocada pelo quimioreflexo e reduziu a atividade parassimpática central. Em relação ao equilíbrio hidromineral, ratos microinjetados com glutamato apresentaram maior consumo de água, mas não maior consumo de água e NaCl quando comparados aos ratos não submetidos à restrição hídrica. Esses dados contribuem para o avanço dos conhecimentos sobre a modulação neuroquímica e o balanço simpático/parassimpático que modula o sistema cardiovascular após estimulação periférica. O MePD também participa do controle central do apetite de sal, reduzindo-o, mas mantendo a sede e o volume de água ingerido após a desidratação. Esses achados indicam que o MePD atua para controlar a homeostase dos ajustes cardiovasculares reflexos, volume sanguíneo e PA sem induzir alto consumo de sal em ratos.
Variabilidade genética dos grupos sanguíneos na população brasileira
(2018) Waskow, Gabriela; Almeida, Silvana de; Fiegenbaum, Marilu
Efeito da dieta materna sobre o estresse oxidativo e a expressão gênica dos receptores de prolactina e de estrógeno alfa no tecido adiposo e no hipotálamo da prole de camundongos
(2019) Gauthier, Mariana Fraga; Giovenardi, Márcia; Almeida, Silvana de
INTRODUÇÃO: O estado nutricional da genitora durante a gestação e a lactação tem suma importância não só no desenvolvimento fetal como também no perfil metabólico desse animal na vida adulta. A exposição ambiental da mãe pode contribuir para a promoção da reprogramação fetal, repercutindo de alguma forma na prole quando adulta. A proposta de avaliar os efeitos da nutrição materna (hipercalórica ou restrição calórica), bem como a dieta que a prole recebe após o desmame na expressão gênica dos receptores de prolactina (Prlr) e de estrógeno alfa (Esr1) no tecido adiposo e no hipotálamo de genitoras e camundongos machos é pioneira. OBJETIVOS: Avaliar o perfil metabólico em camundongos fêmeas, parâmetros de estresse oxidativo no tecido adiposo e a expressão gênica dos receptores de prolactina (Prlr) e de estrógeno alfa (Esr1) no tecido adiposo e no hipotálamo das genitoras e de seus filhotes machos que receberam dieta controle (CONT), restrição calórica (RD) ou hipercalórica (HD). METODOLOGIA: As mães foram alimentadas com sua respectiva dieta durante o acasalamento, gestação e lactação, e os filhotes após o desmame. Os grupos experimentais foram abreviados de acordo com as dietas materna em CONT, RD ou HD e dietas maternas/prole: CONT/CONT, CONT/RD, CONT/HD, RD/CONT, RD/RD, RD/HD, HD/CONT, HD/RD, HD/HD. O perfil lipídico, glicose, insulina e concentração sérica de leptina foram analisados por ELISA, seguindo as instruções do kit, somente nas genitoras. A formação de espécies reativas de oxigênio (ROS), as atividades das enzimas catalase (CAT) e superóxido dismutase (SOD) foram analisadas no tecido adiposo das fêmeas e na prole machos. A análise da expressão gênica relativa dos receptores Prlr e Esr1 no tecido adiposo e hipotálamo, foi feita através da reação em cadeia da polimerase quantitativa em tempo real (qPCR) e calculados pela fórmula 2-ΔΔCt. RESULTADOS: Encontramos um aumento significativo nos níveis de triglicerídeos, na concentração de leptina e diminuição na atividade da SOD das mães alimentadas com dieta HD. Mães RD apresentaram um aumento no tempo para engravidar. Também foi observado menor expressão do Prlr nos grupos de genitoras HD e RD no hipotálamo. Quando analisamos a prole, filhotes de mãe RD apresentaram menor ganho de peso no período da lactação, também observamos efeito da dieta materna (dieta HD) no aumento de DCF nos grupos HD/CONT e HD/HD. Aumento da atividade da SOD nos grupos HD/CONT, HD/RD e HD/HD. Aumento da atividade da CAT no tecido adiposo do grupo HD/RD. A expressão gênica dos receptores Prlr e Esr1 no tecido adiposo da prole apresentou uma diminuição significativa no grupo RD/RD. No hipotálamo a expressão do Prlr na prole esteve diminuída significativamente no grupo RD/RD e RD/HD, a expressão do Esr1 também esteve diminuída significativamente no grupo RD/HD. CONCLUSÃO: Observamos efeito da dieta materna na expressão dos receptores Prlr e Esr1, relacionados ao metabolismo energético, bem como no desbalanço do estresse oxidativo a nível hipotalâmico e periférico, impactando na saúde da prole na vida adulta.
Desenvolvimento e avaliação do potencial terapêutico de sistemas de entrega de drogas antitumorais para o tratamento de gliomas
(2019) Reinhardt, Luiza Steffens; Moura, Dinara Jaqueline
Os tumores cerebrais, principalmente os glioblastomas (GBs), representam um desafio para a ciência médica atual, tendo em vista a ineficácia e as limitações das terapias convencionais, bem como o diagnóstico tardio. A fisiologia do cérebro apresenta características distintas e, para superá-las, várias estratégias utilizando sistemas de distribuição estão sendo desenvolvidas, incluindo nanoprodutos poliméricos como nanopartículas e nanofibras. Questões relacionadas à quimioterapia atual, como toxicidade sistêmica, resistência a drogas e biodistribuição não específica, podem ser resolvidas utilizando o adequado sistema de entrega de drogas. Além disso, esses sistemas normalmente são estáveis em fluidos biológicos, tornando-os uma abordagem promissora para fornecer liberação controlada de drogas, reduzindo assim a toxicidade após a administração sistêmica. Nanoprodutos precisamente desenvolvidos e biofuncionalizados são promissores para o uso no transporte direcionado e eficiente, acarretando melhores resultados clínicos. Alterações moleculares são extremamente importantes para entender os GBs e, potencialmente, poderiam ser usadas para uma terapia direcionada. Recentemente foi descrito que a proteína Nek1 está superexpressa em diferentes linhagens de gliomas e o nível de expressão está diretamente relacionado com o grau de severidade do tumor, a taxa de proliferação e a resistência à temozolomida. Neste trabalho, objetivou-se produzir nanoprodutos poliméricos, nanopartículas (NP) e nanofibras (NF), utilizando o álcool polivinílico e drogas quimioterápicas, dacarbazina e temozolomida, e inibidor da proteína Nek1 para o tratamento de glioblastomas. Os nanoprodutos foram caracterizados em relação a suas morfologias, a suas propriedades mecânicas (viscoelasticidade), químicas (interações químicas) e físicas (transições de estado físico), a suas taxas de liberação das drogas, a suas eficácias e ao seu impacto na terapia do câncer cerebral in vitro utilizando a linhagem U87MG. As NP e as NF apresentaram maior eficiência no tratamento antitumoral em comparação com as drogas quando testadas isoladamente. Foi possível concluir que os nanoprodutos produzidos podem trazer melhorias na eficiência dos medicamentos quimioterápicos tradicionais e apresentam um grande potencial de translação clínica.
Influência de polimorfismos nos genes envolvidos na farmacocinética da terapia antirretroviral em relação aos efeitos adversos em indivíduos vivendo com HIV
(2019) Barroco, Caroline de Araujo; Mattevi, Vanessa Suñé
A terapia antirretroviral (TARV) para indivíduos infectados pelo vírus da imunodeficiência humana (HIV) é constituída pela combinação de fármacos de diferentes classes. Dentre os efeitos adversos a longo prazo desta terapia destacam-se a lipodistrofia e a dislipidemia. Sabendo-se que as variações genéticas estão envolvidas na modulação das respostas farmacológicas, este estudo transversal visou avaliar a associação de polimorfismos nos genes codificadores de proteínas metabolizadoras dos fármacos com os efeitos adversos da TARV. Foram colhidos dados referentes aos efeitos adversos e amostras de DNA de 857 pacientes portadores de HIV que utilizavam TARV há pelo menos um ano. Foram genotipados os polimorfismos CYP2B6 516G>T (rs3745274), CYP3A4*1B (rs2740574), CYP3A4*22 (35599367) e CYP3A5*3 (776746) por reação em cadeia da polimerase em tempo real. A prevalência da lipodistrofia apresentou diferença significativa entre os grupos étnicos avaliados (brancos 64,1% e não-brancos 44,9% P = 0,001). Os padrões de lipodistrofia do tipo lipohipertrofia (brancos 27,5% e não-brancos 19,4% P = 0,001) e lipoatrofia (brancos 33,0% e não-brancos 48,4% P = 0,055) apresentaram diferença significativa entre as etnias. Os indivíduos brancos também apresentaram maior prevalência de hipertrigliceridemia (P = 0,001) e hipercolesterolemia (P = 0,015). A lipodistrofia foi mais prevalente em indivíduos brancos e apresentou associação ao alelo *3 do polimorfismo CYP3A5*3 e ao uso de atazanavir. São necessários mais estudos nesta área para que variantes genéticas possam ser utilizadas na prática clínica para determinação prévia dos regimes antirretrovirais.
Investigação de variantes em genes envolvidos no metabolismo do tecido adiposo com o desenvolvimento de lipodistrofia e avaliação da técnica DBS no monitoramento terapêutico de fármacos em pessoas vivendo com HIV em terapia antirretroviral
(2019) Tagliari, Carmela Farias da Silva; Mattevi, Vanessa Suñé; Linden, Rafael
O vírus da imunodeficiência humana (HIV) infecta, principalmente, linfócitos T helper (T auxiliar) que expressam a proteína de superfície CD4 (LT-CD4+) causando o enfraquecimento do sistema imunológico e favorecendo o aparecimento de doenças oportunistas. Na ocorrência dessa situação, a síndrome da imunodeficiência adquirida (AIDS) se desenvolve. A prevalência de pessoas vivendo com HIV (PVHIV) continua a crescer mundialmente. Contudo, novas infecções pelo vírus crescem de forma particular em determinadas regiões do mundo. A terapia antirretroviral (TARV) combinada mudou a perspectiva da infecção pelo HIV de uma doença mortal para uma enfermidade crônica. Apesar destes benefícios, alguns pacientes não atingem a supressão viral. Sabe-se que os fármacos antirretrovirais (ARVs) são capazes de atuar em nível molecular, alterando a atividade de fatores de transcrição em genes do metabolismo glicídico e lipídico, induzindo dislipidemia, resistência à insulina (RI), diabetes mellitus (DM) e síndrome metabólica (SM), além dos efeitos na fisiologia dos adipócitos. Estes últimos favorecem o desenvolvimento da síndrome da lipodistrofia (LD). Diversos polimorfismos de um único nucleotídeo (SNPs) em genes do metabolismo glicídico e lipídico já foram implicados na susceptibilidade à LD e SM, sendo de especial interesse o fator de necrose tumoral (TNF), o receptor ativado por proliferadores de peroxissoma gama (PPARG), o fator de transcrição de ligação ao elemento regulatório de esterol 1 (SREBF1), o gene associado a obesidade e massa gorda (FTO) e a sirtuína 1 (SIRT1). Em conjunto ao monitoramento da carga viral, as PVHIV em TARV também requerem o acompanhamento dos níveis circulantes dos fármacos a fim de assegurar o sucesso terapêutico e evitar níveis sub-terapêuticos, o que aumenta a chance de falha virológica. Uma alternativa minimamente invasiva para dosagem plasmática dos fármacos é a técnica de mancha de sangue seco em papel (DBS). Esta técnica possui inúmeras vantagens em relação ao procedimento padrão, dado que apresenta facilidade na coleta, transporte, armazenamento e, principalmente, a acessibilidade em regiões remotas. Desta forma, o objetivo desta pesquisa foi avaliar a contribuição de SNPs nos genes supracitados como fatores de susceptibilidade ao desenvolvimento de LD em PVHIV. Ainda, determinar a os níveis plasmáticos dos fármacos antirretrovirais efavirenz (EFV) e atazanavir (ATV) através do método DBS e avaliar a exequibilidade desta ferramenta para o monitoramento terapêutico de fármacos (MTF) em uma amostra de indivíduos infectados pelo HIV sob TARV vivendo na região Sul do Brasil. Em nossa amostra (N = 832), identificamos que a prevalência de LD foi maior em indivíduos de raça branca do que em não brancos. A variante de risco A no SNP rs9939609 (T > A) do gene FTO e o alelo polimórfico G para o SNP rs2297508 (C > G) no gene SREBF1 contribuíram para o desenvolvimento de LD (P = 0,006 e P = 0,052, respectivamente), mas não para SM (dados não mostrados). Não encontramos associação significativa entre os polimorfismos rs2273773 T>C, rs12413112 G>A, rs7895833 A>G e rs12049646 T>C no gene da SIRT1 e o risco de desenvolvimento de LD (P = 0,949, P = 0,841, P = 0,797 and P = 0,700, respectivamente) e SM (dados não mostrados). As quantificações dos fármacos EFV e ATV foram altamente correlacionadas entre o método DBS e o plasma. Assim, a técnica DBS pode ser uma alternativa ao método padrão. Contudo, a burocracia e o sistema logístico brasileiro precisa ser superado para que a técnica DBS seja uma realidade no cuidado clínico das PVHIV.
Inibição de biofilmes bacterianos por resíduos obtidos do processamento de soja (Glycine max)
(2019) Ramos, Francine dos Santos; Zimmer, Karine Rigon
O reaproveitamento de resíduos agroindustriais tem sido alvo de diversas pesquisas, uma vez que apresentam uma rica composição química, seu descarte gera custos às indústrias e prejuízos ao meio ambiente. Entre esses resíduos destacam-se os da soja, um grão com comprovadas atividades benéficas à saúde humana. A busca por compostos ativos contra biofilmes, definidos como comunidades microbianas aderidas a superfícies, tem sido extremamente importante, uma vez que são considerados desafios nos ambientes clínicos e industriais. Assim, o objetivo deste trabalho foi avaliar a potencial atividade antibiofilme e antimicrobiana de extratos obtidos de resíduos do processamento da soja contra as bactérias Staphylococcus aureus, Staphylococcus epidermidis e Pseudomonas aeruginosa. Os resíduos obtidos foram submetidos a um processo de extração por ultrassom, utilizando-se água como solvente. As atividades antibacteriana e antibiofilme de dois extratos brutos foram avaliadas por absorbância (620 nm), contagem de UFC e método de cristal violeta. O extrato obtido de fragmentos de grão e cascas (E1) apresentou maior atividade antibiofilme, sendo escolhido para caracterização química por cromatografia em camada delgada e métodos colorimétricos, tratamentos térmico e enzimático, fracionamento em coluna cromatográfica (CC – cromatografia de exclusão molecular) e processos de ultracentrifugação. E1 (4 mg/mL) inibiu em 75% a formação de biofilme por S. epidermidis sem inibição de crescimento. A caracterização química mostrou a presença de aminoácidos, saponinas, terpenos e esteroides. A atividade antibiofilme de E1 foi perdida quando este foi submetido a tratamento térmico enquanto o tratamento enzimático levou a perda de 30% na atividade do extrato, sugerindo que as moléculas antibiofilme podem ser de origem proteica. Duas frações obtidas da CC foram capazes de inibir em aproximadamente 35% a formação de biofilme de S. epidermidis. A partir do processo de ultracentrifugação, a atividade antibiofilme foi observada apenas quando duas frações (fração> 50 kDa e fração <10 kDa) foram combinadas, sugerindo que a atividade biológica é dependente do sinergismo das moléculas ativas. Nossos resultados demonstraram que o efeito antibiofilme é alcançado com apenas 6 h de tratamento com E1 e sugere que a atividade biológica é via efeito físico, uma vez que sua propriedade antibiofilme é observada apenas quando em contato direto com as células bacterianas. Além disso, o tratamento agudo com o E1 não causou nenhum efeito tóxico em Caenorhabditis elegans, no entanto, a exposição crônica causou redução na sobrevivência d vermes, aumento do tamanho corporal e aumento da expressão de GST-4. Este trabalho mostra que os resíduos agroindustriais da soja podem ser uma fonte potencial de moléculas com atividade contra biofilmes bacterianos e com baixa toxicidade in vivo, sendo esta manejada pela concentração utilizada.
Influência da via de reparo de malpareamento na citotoxicidade do 5-fluorouracil mediada por um inibidor de PARP em células de câncer colorretal
(2019) Castro e Gloria, Helena de; Saffi, Jenifer; Meirelles, Natalia Motta Leguisamo
O progresso no tratamento do câncer colorretal (CCR) inclui a identificação da deficiência da via de reparo de malpareamento (MMR) para a predição do benefício do tratamento adjuvante com 5-fluorouracil (5-FU), oxaliplatina, e, mais recentemente, imunoterapia. Apesar de os regimes utilizando 5-FU ainda serem o pilar da abordagem terapêutica contra o CCR, são considerados inespecíficos e subótimos, o que chama atenção para necessidade do desenvolvimento de novas estratégias. Um corpo crescente de evidências tem sugerido um novo racional para o uso de inibidores de poli-(ADP-ribose) polimerase (PARPi), como o Olaparib, em tipos de tumores além dos tumores com deficiências intrínsecas na via de reparo de recombinação homóloga (HR), particularmente em combinação com agentes indutores de dano ao DNA. Aqui apresentamos novas evidências na citotoxicidade de 5-FU mediada por Olaparib em células de CCR e como ocorre de maneira dependente de MMR. Além disso, reportamos efeitos genótoxicos e antineoplásicos induzidos pela monoterapia de Olaparib em células de CCR proficientes em MMR. Observamos que células com deficiência em MMR, devido à perda de hMLH1 e hMSH3, são mais sensíveis a combinação de 5-FU e Olaparib do que células de CCR proficientes em MMR. Identificamos efeitos sinérgicos entre 5-FU e Olaparib em células com deficiência de MMR que prejudica características de agressividade tumoral como capacidade de migração e adesão e formação de colônias. Além disso, nossos resultados sugerem que estes efeitos são mediados pela indução de quebras simples no DNA e apoptose com parada de ciclo celular em G2/M. Portanto, nossos resultados sugerem um papel para a inclusão de Olaparib no tratamento do CCR: (1) em combinação com 5-FU para células de CCR com deficiência de MMR e (2) em monoterapia para células de CCR com proficiência em MMR.
Efeito neuroprotetor do ACTH em modelo de hemorragia peri-intraventricular em ratos neonatos
(2019) Martins, Camila Aparecida; Rasia Filho, Alberto Antonio; Mestriner, Régis Gemerasca
Complicações relacionadas à prematuridade causam, aproximadamente, um milhão de mortes por ano no mundo e são responsáveis por cerca de 40% das deficiências neurológicas em crianças. A hemorragia peri-intraventricular (HPIV) é uma das principais complicações relacionadas ao nascimento prematuro, sendo considerada um evento multifatorial, definida pela ruptura dos frágeis e imaturos vasos sanguíneos da matriz germinativa, com entrada subsequente de sangue no sistema ventricular, causada, principalmente, por mudanças na pressão e fluxo sanguíneo cerebral. Atualmente não existem tratamentos neuroprotetores para HPIV. As melanocortinas, incluindo o hormônio adrenocorticotrófico (ACTH) tem propriedades anti-inflamatórias e já demonstraram efeito neuroprotetor em diversas lesões do SNC e doenças neurodegenerativas, fazendo do ACTH um potente candidato para fornecer neuroproteção após HPIV. Desse modo, o presente estudo teve como objetivo avaliar o efeito neuroprotetor do ACTH em modelo de HPIV induzido pela microinjeção de colagenase intracerebroventricular em ratos neonatos. Com um dia de vida, os animais receberam microinjeções na região periventricular, que continham colagenase tipo VII ou PBS. Doze horas após a microinjeção, todos os animais com HPIV ou Sham (total de 8 grupos com 6 animais/cada) receberam uma dose de 0,048 mg/kg de ACTH1-24 e/ou 0,06 nmol de SHU9119 (antagonista dos receptores de melanocortinas MCR3/MCR4). Com 7 dias de vida os animais foram eutanasiados e, para investigar o efeito neuroprotetor do ACTH, foram utilizados como principais desfechos a extensão de lesão, densidade neuronal/glial e gliose reativa, utilizando como parâmetros para gliose reativa a expressão dos biomarcadores imunohistoquímicos GFAP, S100β e NG2. Os resultados mostraram que a os animais lesados que receberam a dose de ACTH1-24, apresentaram neuroproteção evidenciada pela redução da extensão de lesão, expressão de GFAP, S100β e NG2 e perda neuronal no tecido periventricular. Além disso, a infusão do SHU9119 não reverteu a neuroproteção do ACTH. Esses achados indicam que o ACTH demonstrou efeito neuroprotetor no modelo estudado e pode ser um tratamento promissor para os em recém-nascidos prematuros com HPIV.
Efeitos da suplementação de aminoácidos de cadeia ramificada ou zinco nos parâmetros neuroinflamatórios e de memória de ratos obesos
(2019) Feijó, Grace dos Santos; Guedes, Renata Padilha; Braganhol, Elizandra
A obesidade é uma doença caracterizada pela produção excessiva de mediadores pró-inflamatórios, o que afeta o encéfalo e gera neuroinflamação. Entre uma série de suplementos comerciais que possuem propriedades imunomoduladoras conhecidas, podemos destacar o zinco (Zn) e os aminoácidos de cadeia ramificada (BCAA). Dessa forma, o objetivo do presente estudo é avaliar se 4 semanas de suplementação com Zn ou BCAA podem alterar os parâmetros neurofuncionais e neuroinflamatórios em ratos obesos. Para tanto, 36 ratos Wistar machos foram dividos nos seguintes grupos: dieta padrão (SD, do inglês standard diet); SD + BCAA; SD + Zn; dieta hiperlipídica e hipercalórica (HFD, do inglês highfat diet); HFD + BCAA; HFD + Zn (n = 6/grupo). A dieta foi administrada por 20 semanas e a suplementação com BCAA (750mg/kg/dia) ou Zn (1,2 mg/kg) foi realizada por gavagem a partir da 16ª semana. O projeto foi aprovado pela CEUA/UFCSPA (536/17). A memória declarativa de longa duração foi avaliada por meio do teste de reconhecimento de objetos (IR). Os parâmetros neuroinflamatórios foram analisados pela expressão gênica das citocinas IL-6 e TNF-a e também por imuno-histoquímica para GFAP, a partir da qual foram mensurados o número de astrócitos e sua morfologia (método de Sholl). Os resultados (média ± EPM) foram analisados por ANOVA de duas vias seguida por teste de Bonferroni, (valores de p<0,05 considerados como significantes). Os resultados indicam que houve interação entre dieta e suplementação (Zn e BCAA) no índice de reconhecimento de objetos, porém, apenas a suplementação de Zn foi capaz de reverter o comprometimento de memória causado pela obesidade. Não foram encontradas diferenças na expressão do gene da IL-6 no córtex cerebral e no hipocampo. A expressão gênica do TNF-a no hipocampo aumentou em ratos obesos e nenhum dos tratamentos modificou esse parâmetro. Houve também uma redução do número de células GFAP+ no córtex cerebral após a HFD, sem efeito significativo de nenhuma das suplementações. No hipocampo, o giro denteado e a área CA1 mostraram uma diminuição nas células GFAP+ em ratos alimentados com HFD após suplementação com Zn ou BCAA. A análise de Sholl mostrou que a HFD diminuiu o número de ramificações primárias, o comprimento total das ramificações mais longas e o número total de interseções de processos astrocitários no córtex cerebral. Além disso, no giro denteado houve interação no número de interseções onde o Zn impediu o aumento do número de interseções após a HFD. Em CA1, houve interação no comprimento total das ramificações e o BCAA preveniu a diminuição do comprimento das ramificações após a HFD. Sendo assim, podemos concluir que a obesidade afeta a memória de reconhecimento de longa duração e a suplementação de Zn é capaz de reverter esse efeito. Por outro lado, nenhuma das suplementações foi capaz de afetar a expressão de IL-6 e TNF-a no córtex cerebral e hipocampo dos animais. Além disso, a reatividade dos astrócitos causada pela HFD é área-dependente, sendo o córtex cerebral o mais suscetível.
Sistema dopaminérgico e dieta: uma investigação de variantes genéticas em humanos e expressão gênica em roedores
(2019) Feistauer, Vanessa; Almeida, Silvana de; Giovenardi, Márcia
A ingesta de alimentos ricos em gordura e açúcar, tanto em humanos quanto em animais, aumenta drasticamente a síntese e secreção de dopamina em áreas do sistema de recompensa. Em humanos, essa sensação de recompensa após a ingestão alimentar, é particular e mais intensa em alguns indivíduos, em comparação a outros. Variantes genéticas, portanto, principalmente em genes do sistema dopaminérgico, podem influenciar na resposta de diferentes pessoas expostas aos mesmos fatores ambientais. Para investigarmos a relação do sistema dopaminérgico com a ingesta alimentar e como a dieta pode alterar esse sistema, dois tipos de estudo foram utilizados. Inicialmente, em uma coorte de crianças acompanhadas desde o nascimento, investigamos a associação de variantes no gene ANKK1/DRD2 com padrões de ingestão alimentar e parâmetros de adiposidade. O alelo *A1 da variante TaqIA (rs1800497) foi relacionada com o aumento da ingestão alimentar de lipídeos em crianças de 7-8 anos, mas o polimorfismo -141C Ins/Del (rs1799732) não foi associado a nenhuma das variáveis analisadas. Em modelo animal, as dietas restritiva e hipercalórica modificaram a expressão gênica na área tegmentar ventral (ATV) e no hipotálamo (HPT) de genitoras e de sua prole. Na ATV, ambas as dietas foram relacionadas a uma elevação nos níveis de mRNA dos genes Th, Drd1, Drd2 e Drd3, no entanto, o gene Slc6a3/Dat1 teve sua expressão aumentada apenas nas fêmeas que receberam a dieta hipercalórica. Na prole dessas fêmeas, observamos, pelo contrário, uma redução generalizada na expressão gênica Th, Ddc, Drd2, Drd3 e Slc6a3/Dat1, devido a interação entre a dieta materna e a dieta da prole. Já no HPT, demonstramos que a alteração na expressão gênica ocasionada pela dieta foi mais expressiva nas genitoras. As dietas restritiva e hipercalórica elevaram os níveis de mRNA dos genes Drd1, Drd3, Maoa e Th, mas apenas as fêmeas que receberam dieta hipercalórica tiveram expressão aumentada de Comt e Ddc. Em contrapartida, as dietas reduziram a expressão do gene Drd4. A expressão gênica da prole foi menos alterada pela dieta nessa área, uma vez que a interação entre a dieta materna e a dieta materna foi relacionada com a redução dos níveis de mRNA apoenas do gene Maob. A dieta da prole aumentou a expressão do gene Drd3, e reduziu a expressão de Comt. Através dos dados apresentados, observa-se a importância do sistema dopaminérgico e sua relação com a alimentação, tanto em humanos quanto em camundongos. Variantes em genes relacionados ao sistema dopaminérgico podem modificar a transmissão dopaminérgica, provocando maior ou menor sensação de recompensa após a ingestão alimentar, e ocasionando desfechos como sobrepeso e obesidade. Além disso, alterações na expressão de genes do sistema dopaminérgico podem ser ocasionadas tanto pela alimentação materna durante a gestação e a lactação, quanto pela alimentação na vida adulta.
Enterococcus spp. associados a animais marinhos selvagens: genômica comparativa, filogenômica e identificação de moléculas bioativas
(Wagner Wessfll, 2020) Prichula, Janira; Seixas, Adriana; d’Azevedo, Pedro Alves; Frazzon, Ana Paula Guedes
Os estudos genômicos têm contribuído muito para o entendimento da virulência, da biologia e da evolução das bactérias do gênero Enterococcus. Todavia, o foco tem sido amplamente direcionado às análises comparativas de genomas de linhagens clínicas relevantes, havendo poucos trabalhos sobre enterococos de ecologias selvagens. Nesse sentido, o presente estudo teve como objetivo realizar uma caracterização em nível genômico de Enterococcus spp. recuperados da microbiota de aves, répteis e mamíferos marinhos selvagens encontrados na costa sul do Brasil. Bibliotecas de DNA genômico de 27 Enterococcus spp. isolados de 17 animais marinhos foram preparadas, e o sequenciamento do genoma foi realizado usando-se a Plataforma Illumina MiSeq e HiSeq. Primeiramente, foi realizado um estudo com as linhagens de Enterococcus spp. provenientes de pinguins-de-Magalhães (Spheniscus magellanicus) e outro estudo relacionando as linhagens provenientes de diferentes aves (Spheniscus magellanicus e Sterna trudeaui), répteis (Chelonia mydas e Eretmochelys imbricata) e mamíferos marinhos (Arctocephalus australis, Grampus griseus e Balaenoptera acutorostrata). Os estudos avaliaram a diversidade genética e a presença de elementos associados ao sucesso de colonização e plasticidade genômica. Foram investigados genes de resistência, virulência, CRISPRs, plasmídeos e genes que codificam moléculas bioativas. Os resultados, obtidos por meio de análises filogenômicas e de genômica comparativa, demonstraram que os enterococos de animais marinhos selvagens apresentam poucos determinantes relacionados à virulência, não estando intimamente relacionados com linhagens clínicas. Algumas espécies de enterococos podem, inclusive, servir como bioindicadores do ecossistema marinho e de impactos antrópicos. Além disso, enterococos associados às espécies marinhas se mostraram uma fonte importante de novos compostos para aplicação biotecnológica. Foi encontrado um número expressivo de agrupamentos de genes relacionados a moléculas antimicrobianas, sendo os mais abundantes os que codificam bacteriocinas, seguidos pelos envolvidos em rotas de síntese de terpenos e de peptídeos não ribossomais (NRPS). Trinta diferentes bacteriocinas pertencentes a diferentes classes foram descritas, incluindo oito novas moléculas com potencial bioativo a ser investigado. A caracterização em nível genômico possibilitou, também, a identificação de dois isolados, um pertencente à espécie E. avium e outro da espécie E. mundtii, com potencial probiótico. Dessa forma, o grande número de informações geradas por este trabalho pode ser explorado em vários aspectos, incluindo desde propósitos ambientais, ecológicos e evolutivos até biotecnológicos, como a identificação de potenciais linhagens probióticas e a elucidação de novos compostos bioativos.

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