PPGPAT - Teses

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Navegando PPGPAT - Teses por Assunto "[en] Antibodies"

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    Avaliação de dois novos anticorpos monoclonais para detecção da superexpressão da proteína HER2 em carcinomas de mama
    (2014) Aleixo, Pedro Bandeira; Hartmann, Antonio Atalíbio
    Introdução: Anticorpos são usados rotineiramente em ensaios laboratoriais para a detecção de antígenos. A análise imuno-histoquímica (IHQ) tem como princípio a demonstração in situ da reação antígenoanticorpo no tecido biológico. A amplificação do gene ERBB2 (ou HER2), e a resultante superexpressão de sua proteína HER2 em células neoplásicas, tornou-se fator prognóstico e preditivo utilizado no tratamento de pacientes com câncer de mama. Além disso, apresenta um papel determinante na classificação molecular intrínseca do carcinoma de mama. Objetivo: Avaliar o desempenho de dois novos anticorpos monoclonais (mAcs) anti-HER2 (33F e 410G) na detecção da superexpressão de HER2, através de IHQ, pela comparação com os resultados de outros dois anticorpos (SP3 e A0485) e da amplificação do gene HER2 por meio de hibridização in situ cromogênica (CISH). Métodos: Foi realizado IHQ com os anticorpos 33F, 410G, SP3 e A0485, e duas técnicas de CISH em uma série de 123 casos de carcinoma infiltrativo de mama. Determinou-se a sensibilidade, especificidade e índices de concordância (K) dos resultados da IHQ entre si e com a amplificação de HER2. Resultados: Foi identificado uma boa concordância entre os resultados de 33F (K=0,81 e K=0,75) e 410G (K=0,81 e K=0,75) com SP3 e A0485, respectivamente. As especificidades encontradas de 33F foram 98,6% e 98,6%, e de 410G 100% e 100%, e as sensibilidades encontradas de 33F foram 80% e 74,1%, e de 410G 78% e 72,2%, quando comparadas com SP3 e A0485, respectivamente. Encontrou-se uma concordância significante entre os casos 33F (K=1) e 410G (K=0,96) HER2+, e amplificação positiva por CISH. A reprodutibilidade dos resultados de IHQ se manteve em diferentes lotes de produção dos mAcs quando comparados com a amplificação gênica (K=0,96 e K=0,96). Conclusão: Em vista do que foi observado, os dois mAcs testados mostraram-se adequados para detectar a superexpressão de HER2 por IHQ em carcinomas de mama e podem ser usados em pesquisa na investigação indireta da amplificação de HER2 em tecido neoplásico humano incluído em parafina.
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    Padronização dos protocolos de marcadores imuno-histoquímicos para uso em plataforma de automação
    (2015) Pilar, Emily Ferreira Salles; Zettler, Cláudio Galleano
    Introdução: A demanda pelo exame imuno-histoquímico na rotina diagnóstica nos laboratórios de Anatomia Patológica cresce exponencialmente. A introdução de biofármacos dirigidos a moléculas-alvo exige resultados precisos, neste contexto, há uma tendência nos laboratórios de introduzir a automação em imuno-histoquímica. O presente estudo foi desenvolvido no Laboratório de Anatomia Patológica do Complexo Hospitalar Santa Casa de Porto Alegre no ano de 2012. Objetivo: realizar a padronização de 120 anticorpos primários concentrados provenientes de diversos fabricantes na Plataforma de automação Benchmark XT (Ventana Medical Systems/Roche Tissue Diagnostics, Tucson AZ, EUA). Critério de inclusão: foram selecionados para a padronização os 120 anticorpos concentrados utilizados com maior frequência no laboratório. Para os testes foram selecionadas 41 amostras de tecido contendo o antígeno de interesse, provenientes de peças cirúrgicas, fixadas em formalina 10% tamponada e positivas em reação Imuno histoquímica manual. Resultados: Foram padronizados 120 marcadores. O protocolo mais frequente foi uso de recuperação antigênica com Cell Conditioning 1 por 60 minutos e incubação no anticorpo primário por 32 minutos a 42ºC. A diluição mais frequente foi 1:100. Conclusão: A automação atende às exigências de padronização concomitante ao aumento da demanda. Esperamos que o manual desenvolvido seja referência para trabalhos futuros e aos laboratórios com interesse em automatizar sua rotina imuno-histoquímica.