PPGBIO - Dissertações

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Navegando PPGBIO - Dissertações por Autor "Braganhol, Elizandra"

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    Análise da participação dos neutrófilos na progressão dos glioblastomas
    (Wagner Wessfll, 2020) Rubenich, Dominique Santos; Braganhol, Elizandra
    Células imunes apresentam plasticidade funcional influenciada por fatores externos capazes de se alterar fenotipicamente, favorecendo a progressão do tumor. Os neutrófilos possuem um espectro de ativação comumente denominado antitumoral/pró-inflamatório (N1) e imunossupressor/pró-tumoral (N2). A presença dessas células no microambiente tumoral é essencial para a formação de um sítio propício para o desenvolvimento das células tumorais. No Glioblastoma, o nicho tumoral formado impacta diretamente na malignidade da doença. Este tipo de tumor cerebral é o mais frequente diagnosticado e possui alta mortalidade, com sobrevida média de 15 meses após a descoberta da doença. Considerando os fatos apresentados, esse estudo visa observar a participação dos neutrófilos na progressão dos glioblastomas. Para isso, foram realizados testes experimentais in vitro com linhagem celular de glioma humano (U87MG) e neutrófilos de voluntários saudáveis, e avaliados a capacidade de ativação das células imunes em diferentes condições de cocultivo, bem como a influencia na viabilidade tumoral. Para os neutrófilos, a migração é um fator importante e bem descrito na literatura a participação da sinalização purinérgica; foi realizada uma revisão de literatura sobre o assunto utilizando sobre os estudos com células humanas. De forma geral, foi observado mudanças morfológicas importantes entre os fenótipos induzidos e em cocultivo, bem como maior ativação imune na presença de células tumorais, confirmando a importância da comunicação intercelular.
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    Efeitos da suplementação de aminoácidos de cadeia ramificada ou zinco nos parâmetros neuroinflamatórios e de memória de ratos obesos
    (2019) Feijó, Grace dos Santos; Guedes, Renata Padilha; Braganhol, Elizandra
    A obesidade é uma doença caracterizada pela produção excessiva de mediadores pró-inflamatórios, o que afeta o encéfalo e gera neuroinflamação. Entre uma série de suplementos comerciais que possuem propriedades imunomoduladoras conhecidas, podemos destacar o zinco (Zn) e os aminoácidos de cadeia ramificada (BCAA). Dessa forma, o objetivo do presente estudo é avaliar se 4 semanas de suplementação com Zn ou BCAA podem alterar os parâmetros neurofuncionais e neuroinflamatórios em ratos obesos. Para tanto, 36 ratos Wistar machos foram dividos nos seguintes grupos: dieta padrão (SD, do inglês standard diet); SD + BCAA; SD + Zn; dieta hiperlipídica e hipercalórica (HFD, do inglês highfat diet); HFD + BCAA; HFD + Zn (n = 6/grupo). A dieta foi administrada por 20 semanas e a suplementação com BCAA (750mg/kg/dia) ou Zn (1,2 mg/kg) foi realizada por gavagem a partir da 16ª semana. O projeto foi aprovado pela CEUA/UFCSPA (536/17). A memória declarativa de longa duração foi avaliada por meio do teste de reconhecimento de objetos (IR). Os parâmetros neuroinflamatórios foram analisados pela expressão gênica das citocinas IL-6 e TNF-a e também por imuno-histoquímica para GFAP, a partir da qual foram mensurados o número de astrócitos e sua morfologia (método de Sholl). Os resultados (média ± EPM) foram analisados por ANOVA de duas vias seguida por teste de Bonferroni, (valores de p<0,05 considerados como significantes). Os resultados indicam que houve interação entre dieta e suplementação (Zn e BCAA) no índice de reconhecimento de objetos, porém, apenas a suplementação de Zn foi capaz de reverter o comprometimento de memória causado pela obesidade. Não foram encontradas diferenças na expressão do gene da IL-6 no córtex cerebral e no hipocampo. A expressão gênica do TNF-a no hipocampo aumentou em ratos obesos e nenhum dos tratamentos modificou esse parâmetro. Houve também uma redução do número de células GFAP+ no córtex cerebral após a HFD, sem efeito significativo de nenhuma das suplementações. No hipocampo, o giro denteado e a área CA1 mostraram uma diminuição nas células GFAP+ em ratos alimentados com HFD após suplementação com Zn ou BCAA. A análise de Sholl mostrou que a HFD diminuiu o número de ramificações primárias, o comprimento total das ramificações mais longas e o número total de interseções de processos astrocitários no córtex cerebral. Além disso, no giro denteado houve interação no número de interseções onde o Zn impediu o aumento do número de interseções após a HFD. Em CA1, houve interação no comprimento total das ramificações e o BCAA preveniu a diminuição do comprimento das ramificações após a HFD. Sendo assim, podemos concluir que a obesidade afeta a memória de reconhecimento de longa duração e a suplementação de Zn é capaz de reverter esse efeito. Por outro lado, nenhuma das suplementações foi capaz de afetar a expressão de IL-6 e TNF-a no córtex cerebral e hipocampo dos animais. Além disso, a reatividade dos astrócitos causada pela HFD é área-dependente, sendo o córtex cerebral o mais suscetível.
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    Investigation of adenosinergic pathway in peripheral blood of glioblastoma patients
    (2022) Gelsleichter, Nicolly Espindola; Braganhol, Elizandra
    O glioblastoma é um tumor fatal com uma sobrevida média de 15 meses. Suas características desafiam as terapias atuais que incluem cirurgia, quimioterapia, radioterapia e, em alguns casos, imunoterapia. Isso se deve, em parte, a imunossupressão local e sistêmica apresentada por esses pacientes. No tumor, células tumorais juntamente com células imunes, citocinas e outros fatores modulam o ambiente para o crescimento tumoral e indução de escape imune. Nesse contexto, a adenosina é uma molécula que se destaca como moduladora desse sistema induzindo um fenótipo pró-tumoral no microambiente tumoral; podendo ser gerada principalmente através de (1) ATP extracelular por meio da ação de NTPDases e ectonucleotidases, CD39 e CD73, respectivamente ou (2) através da ação da CD38 a partir de NAD+ sendo que o ponto de convergência entre essas vias a CD73 que converte o AMP a adenosina. Todavia, em relação a imunossupressão sistêmica, pouco se sabe. Este estudo buscou investigar o papel da via adenosinérgica no sangue periférico de pacientes com glioblastoma, devido a importância dessa via na imunossupressão local. Considerando-se que a CD73 é uma enzima chave da via adenosinérgica, realizou-se uma revisão de literatura apontando as principais relações da CD73 no glioblastoma, bem como lacunas a serem elucidadas. Em pacientes, realizaram-se análises dos níveis de nucleotídeos/nucleosídeos e atividade enzimática em soro e avaliou-se os níveis de expressão de enzimas e receptores associados a via adenosinérgica em PBMCs isolados de pacientes. Em relação a controles saudáveis, pacientes com glioblastoma não apresentam diferenças nos níveis séricos de nucleotídeos e nucleosídeos bem como na atividade enzimática. Em relação a expressão de genes, pacientes com glioblastoma apresentam diminuição dos níveis de NT5E, gene que codifica a CD73. Em seguida, avaliou-se o efeito do tratamento que não mostrou diferenças no perfil de pacientes. Até onde sabemos, esse foi o primeiro estudo caracterizando o perfil adenosinérgico no soro e em PBMCs isolados de pacientes com glioblastoma.