PPGBIO - Dissertações

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Navegando PPGBIO - Dissertações por Autor "Almeida, Silvana de"

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    Análise de parâmetros bioquímicos de fêmeas submetidas à dieta hipercalórica ou restritiva durante a gestação e a lactação
    (2017) Andrade, Andressa Alves de; Giovenardi, Márcia; Almeida, Silvana de
    A dieta materna antes e durante a gestação pode influenciar na saúde da mãe e do feto bem como em futuras da prole. Observando-se as preferências alimentares atuais, com alimentos altamente calóricos, nosso estudo teve como objetivo analisar parâmetros bioquímicos no sangue e nos tecidos metabólicos, em fêmeas que durante a gestação e a lactação foram submetidas à dieta hipercalórica ou restritiva. Foram estudadas camundongos fêmeas isogênicas (n=24), da linhagem BALB/c (60 dias de idade, peso entre 18-25 g), provenientes do biotério da UFCSPA. Foram separadas em grupos de acordo com a dieta que receberam: dieta padrão ad libitum (CONT), dieta restritiva (RD, 30% Kcal a menos do que a dieta padrão), dieta hipercalórica (HD: acréscimo de 60% Kcal comparada a padrão). A adaptação à dieta foi de 25 dias e, a seguir, foram acasaladas. O de peso foi aferido periodicamente e o índice de Lee calculado. No 22° DDP fez-se eutanásia dos animais, coletamos o sangue e os tecidos adiposo, hepático e muscular. O perfil lipídico e glicídico foi analisado utilizando-se kits comerciais e, nos tecidos metabólicos, foi analisado: atividade das enzimas catalase (CAT) e superóxido dismutase (SOD), geração de espécies reativas de oxigênio por ensaio de oxidação de diacetato de dihidrodiclorofluoresceína, peroxidação lipídica por TBARS e quantificação do nível de proteína NF-kB.Os dados foram expressos por média ± SEM e analisados pela variância única seguindo o teste de comparação múltipla de Dunnett (p <0,05). A análise sérica mostrou um aumento significativo nos triglicerídeos do grupo HD em comparação com o CONT e o RD. Os outros parâmetros do perfil lipídico e a glicemia permaneceram similares entre os 3 grupos. O tempo (dias) para as fêmeas emprenhar foi mais longo no RD comparado ao grupo CONT, embora não tenha sido observada diferença significativa no número de camundongos por fêmea entre os grupos avaliados, bem como no aumento de peso das ninhadas. Nossos resultados mostraram que as modificações da dieta afetaram mais significativamente os parâmetros de estresse oxidativo no fígado e nos músculos do que o tecido adiposo em animais expostos à dieta hipercalórica. A diminuição da superóxido dismutase está fortemente correlacionada ao nível EROs em todos os tecidos avaliados, com um perfil de correlação muito semelhante nos tecidos hepático e muscular.
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    Análise molecular de variantes de grupos sanguíneos em populações indígenas
    (2018) Rodrigues, Mirelen Moura de Oliveira; Fiegenbaum, Marilu; Almeida, Silvana de
    A frequência dos alelos de grupos sanguíneos é diferente de acordo com a origem étnica da população, o que torna importante a determinação da variabilidade desses alelos em tribos indígenas. Devido as características culturais, que, por vezes, podem ser somadas à localização geográfica de difícil acesso, o isolamento, endocruzamentos e efeito do fundador podem propiciar o aumento da frequência de genótipos que são raros nas demais populações. Esta condição tem impacto direto na prática transfusional, visto que estes genótipos raros não são comuns na população de doadores de sangue. A presente dissertação analisou a variabilidade genética em 6 marcadores relacionados a expressão de antígenos de grupos sanguíneos (Diego, Kell, Duffy, Kidd e MNS) que apresentam impacto na prática transfusional em indivíduos de tribos indigenas Kaingang (n = 72) e Guarani (n = 234) amostradas no período entre 1990 — 2000. A variabilidade observada nesses grupos foi relacionada com a observada em tribos Kaingang e Guarani amostradas no período de 1950-1960, com o banco de dados 1000 genomas (população de Americanos, Asiáticos, Europeus e Africanos) e com doadores de sangue brasileiros das regiões Sul, Sudeste, Norte e Nordeste. A análise das variantes genéticas de grupos sanguíneos foi realizada utilizando a técnica de PCR em tempo real, com sondas de hidrólise do sistema TaqManB (Thermo Fisher) para o sistema Diego c.2561C>T (D/*01/*02, rs2285644), Kell c.578 C>T (KEL*01/*02,rs 8176058), Duffy c.125 A>G e c.1-67T>C (FY*01/*02, rs12075; FY*02N.01, rs2814778), Kidd c.838G>A (JK*01/*02, rs1058396) e MNS c.143T>C (GYPB*S/GYPB*s, rs7683365). As frequências alélicas foram comparadas utilizando o teste de Qui- quadrado com correção de Yates. Todas as frequências genotípicas estão de acordo com o esperado para populações em equilíbrio de Hardy-Weinberg. Quando comparados os resultados com amostras de Kaingang e Guarani coletadas no período de 1950-1960 observamos diferenças significativas (p < 0,05) para os alelos do sistema Diego (D/*01) e Duffy (FY*01) sugerindo um processo de miscigenação. Para todos os alelos analisados encontramos diferença significativa (p < 0,05) entre as tribos indígenas avaliadas e os dados de genotipagem de doadores de sangue brasileiros (Rio Grande do Sul, Paraná, Santa Catarina, São Paulo, Minas Gerais, Bahia e região do Norte do Brasil — ntotal= 3215), com exceção da amostra de doadores de sangue descendentes de Japoneses, principalmente para a tribo Guarani. De acordo com os resultados obtidos através da análise de Fsr, com intervalo de confiança de 95%, a diferenciação genética foi maior entre as populações de Kaingang e Africanos (Fs7T= 0,168) e de Guarani e Africanos (FsT= 0,190) do que com as outras populações avaliadas pelo Projeto 1000 Genomas (Ntotal = 2504). Embora não exista grande diferenciação genética, para as variantes analisadas, entre os ameríndios do presente estudo quando comparados com populações de Europeus, Asiáticos e Americanos, as diferenças de frequências alélicas e genotipicas entre as populações indígenas e de doadores de sangue devem ser consideradas. Isso porque estas diferenças podem impactar na prática transfusional, levando a aloimunização de indígenas que necessitem de transfusão sanguínea e, também, na dificuldade de encontrar doadores de sangue compatíveis com um receptor de hemocomponentes indígena. Com base nos dados gerados pelo presente estudo, há evidências que haverá um aumento de probabilidade de se encontrar um doador de sangue compatível para transfusão sanguínea em pacientes Ameríndios entre os doadores de sangue descendentes de asiáticos.
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    Efeito da dieta materna sobre o estresse oxidativo e a expressão gênica dos receptores de prolactina e de estrógeno alfa no tecido adiposo e no hipotálamo da prole de camundongos
    (2019) Gauthier, Mariana Fraga; Giovenardi, Márcia; Almeida, Silvana de
    INTRODUÇÃO: O estado nutricional da genitora durante a gestação e a lactação tem suma importância não só no desenvolvimento fetal como também no perfil metabólico desse animal na vida adulta. A exposição ambiental da mãe pode contribuir para a promoção da reprogramação fetal, repercutindo de alguma forma na prole quando adulta. A proposta de avaliar os efeitos da nutrição materna (hipercalórica ou restrição calórica), bem como a dieta que a prole recebe após o desmame na expressão gênica dos receptores de prolactina (Prlr) e de estrógeno alfa (Esr1) no tecido adiposo e no hipotálamo de genitoras e camundongos machos é pioneira. OBJETIVOS: Avaliar o perfil metabólico em camundongos fêmeas, parâmetros de estresse oxidativo no tecido adiposo e a expressão gênica dos receptores de prolactina (Prlr) e de estrógeno alfa (Esr1) no tecido adiposo e no hipotálamo das genitoras e de seus filhotes machos que receberam dieta controle (CONT), restrição calórica (RD) ou hipercalórica (HD). METODOLOGIA: As mães foram alimentadas com sua respectiva dieta durante o acasalamento, gestação e lactação, e os filhotes após o desmame. Os grupos experimentais foram abreviados de acordo com as dietas materna em CONT, RD ou HD e dietas maternas/prole: CONT/CONT, CONT/RD, CONT/HD, RD/CONT, RD/RD, RD/HD, HD/CONT, HD/RD, HD/HD. O perfil lipídico, glicose, insulina e concentração sérica de leptina foram analisados por ELISA, seguindo as instruções do kit, somente nas genitoras. A formação de espécies reativas de oxigênio (ROS), as atividades das enzimas catalase (CAT) e superóxido dismutase (SOD) foram analisadas no tecido adiposo das fêmeas e na prole machos. A análise da expressão gênica relativa dos receptores Prlr e Esr1 no tecido adiposo e hipotálamo, foi feita através da reação em cadeia da polimerase quantitativa em tempo real (qPCR) e calculados pela fórmula 2-ΔΔCt. RESULTADOS: Encontramos um aumento significativo nos níveis de triglicerídeos, na concentração de leptina e diminuição na atividade da SOD das mães alimentadas com dieta HD. Mães RD apresentaram um aumento no tempo para engravidar. Também foi observado menor expressão do Prlr nos grupos de genitoras HD e RD no hipotálamo. Quando analisamos a prole, filhotes de mãe RD apresentaram menor ganho de peso no período da lactação, também observamos efeito da dieta materna (dieta HD) no aumento de DCF nos grupos HD/CONT e HD/HD. Aumento da atividade da SOD nos grupos HD/CONT, HD/RD e HD/HD. Aumento da atividade da CAT no tecido adiposo do grupo HD/RD. A expressão gênica dos receptores Prlr e Esr1 no tecido adiposo da prole apresentou uma diminuição significativa no grupo RD/RD. No hipotálamo a expressão do Prlr na prole esteve diminuída significativamente no grupo RD/RD e RD/HD, a expressão do Esr1 também esteve diminuída significativamente no grupo RD/HD. CONCLUSÃO: Observamos efeito da dieta materna na expressão dos receptores Prlr e Esr1, relacionados ao metabolismo energético, bem como no desbalanço do estresse oxidativo a nível hipotalâmico e periférico, impactando na saúde da prole na vida adulta.
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    Investigação da variabilidade do gene ACKR1 em doadores de sangue de Porto Alegre/RS
    (2017) Höher, Gabriela; Almeida, Silvana de; Fiegenbaum, Marilu
    Os sistemas de grupos sanguíneos são caracterizados pela presença de antígenos na membrana eritrocitária. Estes antígenos possuem características polimórficas e funcionais originadas a partir de mudanças ao nível genético que variam desde polimorfismos de um único nucleotídeo (SNPs) a trocas gênicas como inversões, deleções, inserções, splicing alternativo, dentre outros mecanismos. O sistema de grupo sanguíneo Duffy é clinicamente significativo, podendo estar relacionado com reação hemolítica transfusional e doença hemolítica do recém-nascido. Inicialmente, revisamos as bases moleculares do gene ACKR1, que codifica a glicoproteína DARC, responsável pela expressão dos antígenos Duffy. Estudos prévios já identificaram variantes genéticas que determinam a expressão fraca ou nula dos antígenos Fya e Fyb e, no presente trabalho, objetivamos realizar um rastreamento de variantes genéticas que possam estar associadas com discrepâncias entre fenótipo-genótipo em doadores de sangue de Porto Alegre, Rio Grande do Sul. A amostra, composta por 382 doadores voluntários de sangue, foi determinada por hemaglutinação e discriminação alélica dos SNPs c.125G>A, c.265C>T e c.1-67T>C por PCR em tempo real. A partir da análise de correlação entre o fenótipo e o genótipo, nós sequenciamos o gene ACKR1 em 11 doadores (2,88%) que apresentaram resultados discordantes. Os dados obtidos no sequenciamento foram avaliados in silico, através dos programas Poly-Phen2, SIFT e RegulomeDB. Nossa investigação detectou 11 variantes genéticas, das quais 4 (c.-541C>T, c.21+150C>T, c.22-58A>G e c.298G>A SNPs) discutimos o aparente efeito funcional na estrutura e expressão da proteína DARC. Em conclusão, eventos moleculares podem resultar em genótipo e fenótipo eritrocitário sendo aparentemente discrepante. Dessa forma, estudos adicionais, que caracterizem o impacto funcional de variantes genéticas associadas à predição de novos alelos de grupos sanguíneos, são fundamentais na implementação de técnicas moleculares seguras para a genotipagem dos antígenos de pacientes e doadores em bancos de sangue. O aperfeiçoamento das metodologias moleculares pode contribuir na prática transfusional através do manejo de unidade de sangue apropriadas para cada indivíduo.