Investigação da variabilidade do gene ACKR1 em doadores de sangue de Porto Alegre/RS

Abstract

Os sistemas de grupos sanguíneos são caracterizados pela presença de antígenos na membrana eritrocitária. Estes antígenos possuem características polimórficas e funcionais originadas a partir de mudanças ao nível genético que variam desde polimorfismos de um único nucleotídeo (SNPs) a trocas gênicas como inversões, deleções, inserções, splicing alternativo, dentre outros mecanismos. O sistema de grupo sanguíneo Duffy é clinicamente significativo, podendo estar relacionado com reação hemolítica transfusional e doença hemolítica do recém-nascido. Inicialmente, revisamos as bases moleculares do gene ACKR1, que codifica a glicoproteína DARC, responsável pela expressão dos antígenos Duffy. Estudos prévios já identificaram variantes genéticas que determinam a expressão fraca ou nula dos antígenos Fya e Fyb e, no presente trabalho, objetivamos realizar um rastreamento de variantes genéticas que possam estar associadas com discrepâncias entre fenótipo-genótipo em doadores de sangue de Porto Alegre, Rio Grande do Sul. A amostra, composta por 382 doadores voluntários de sangue, foi determinada por hemaglutinação e discriminação alélica dos SNPs c.125G>A, c.265C>T e c.1-67T>C por PCR em tempo real. A partir da análise de correlação entre o fenótipo e o genótipo, nós sequenciamos o gene ACKR1 em 11 doadores (2,88%) que apresentaram resultados discordantes. Os dados obtidos no sequenciamento foram avaliados in silico, através dos programas Poly-Phen2, SIFT e RegulomeDB. Nossa investigação detectou 11 variantes genéticas, das quais 4 (c.-541C>T, c.21+150C>T, c.22-58A>G e c.298G>A SNPs) discutimos o aparente efeito funcional na estrutura e expressão da proteína DARC. Em conclusão, eventos moleculares podem resultar em genótipo e fenótipo eritrocitário sendo aparentemente discrepante. Dessa forma, estudos adicionais, que caracterizem o impacto funcional de variantes genéticas associadas à predição de novos alelos de grupos sanguíneos, são fundamentais na implementação de técnicas moleculares seguras para a genotipagem dos antígenos de pacientes e doadores em bancos de sangue. O aperfeiçoamento das metodologias moleculares pode contribuir na prática transfusional através do manejo de unidade de sangue apropriadas para cada indivíduo.