Influência das células tronco mesenquimais no desenvolvimento das células tronco tumorais de glioma
| dc.contributor.advisor | Wink, Márcia Rosângela | |
| dc.contributor.author | Onzi, Giovana Ravizzoni | |
| dc.date.accessioned | 2016-10-14T17:55:58Z | |
| dc.date.accessioned | 2023-10-09T13:59:31Z | |
| dc.date.available | 2016-10-14T17:55:58Z | |
| dc.date.available | 2023-10-09T13:59:31Z | |
| dc.date.date-insert | 2016-10-14 | |
| dc.date.issued | 2014 | |
| dc.description | Dissertação (Mestrado)-Programa de Pós-Graduação em Ciências da Saúde, Fundação Universidade Federal de Ciências da Saúde de Porto Alegre. | pt_BR |
| dc.description.abstract | Glioblastomas são tumores do sistema nervoso central caracterizados por possuírem altas taxas de proliferação, poder invasivo e alta recorrência. A descoberta de uma subpopulação de células altamente tumorigênicas, similares as células-tronco, dentre as células do tumor levou à hipótese das células tronco tumorais (CSCs). Essa teoria trouxe uma mudança de paradigma para a biologia e terapêutica do câncer, uma vez que as CSCs seriam as principais responsáveis pela manutenção do tecido tumoral. Com base neste contexto, a principal dedução que pode ser feita é de que as atuais terapias de combate ao câncer frequentemente falham porque são direcionadas para os tipos celulares errados. Portanto, fazse necessário o desenvolvimento de novas metodologias terapêuticas. Diversos estudos já demonstraram que as células tronco mesenquimais (MSCs) apresentam tropismo por gliomas, tornando-as promissoras para o uso na terapia gênica neste tipo de tumor. No entanto, os mecanismos responsáveis pelo tropismo das MSCs para o tumor ainda não são completamente compreendidos e, principalmente, pouco se sabe a respeito das interações das MSCs com as CSCs. Assim, o objetivo desse estudo foi investigar se células tronco humanas derivadas de tecido adiposo (hADSCs) podem interferir sobre o desenvolvimento das CSCs de glioma. As células tronco mesenquimais foram obtidas a partir de gordura de descarte de pacientes submetidos a abdominoplastias e/ou mamoplastias redutoras no Serviço de Cirurgia Plástica da ISCMPA. A linhagem celular de glioma humano U87 foi adquirida da American Type Culture Collection. A análise da influência das hADSCs sobre as CSCs de glioma foi realizada por meio do cultivo das células U87 em meio condicionado (MC) das hADSCs. As células de glioma U87 foram tratadas com este MC (puro ou diluído) em cultura durante sete dias, e, então, foi analisada a quantidade de esferas tumorais formadas. Foi avaliada também a expressão do RNAm para marcadores de CSCs por RT-PCR e por PCR em tempo real. O MC de hADSC mostrou não ter influência na formação das esferas tumorais (p 0.781), mesmo quando a mesma foi corrigida pela viabilidade celular. As expressões do RNAm para os marcadores OCT4, Nanog, SOX2 e CD133 nos grupos tratados com MC não foram estatisticamente diferentes das expressões nas células do controle. Ainda, para OCT4 e Nanog estes resultados foram confirmados por citometria de fluxo, uma vez que a percentagem de células positivas para estes marcadores foi a mesma nos grupos tratados e controle (p 0.988 e p 0.761, respectivamente). Por fim, foi avaliado se o MC de hADSC seria capaz de induzir autofagia em células de glioma U87 pelos métodos da proteína LC3GFP+ e coloração por laranja de acridina. Descobrimos que o MC foi capaz de induzir um forte aumento da formação de autofagossomos em células de glioma, quando comparado com o grupo controle (p<0.0001). Surpreendentemente, no entanto, esta indução autofágica parece ser interrompida na formação de autolisossomos, pois apenas o grupo do controle positivo tratado com rapamicina teve um aumento na formação dos mesmos. Tomando esses resultados em conjunto, o MC de hADSC mostrou não ter influência no desenvolvimento das CSCs e, além disso, parece contribuir para a indução de autofagia nas células de glioma U87. Isso auxilia um melhor entendimento a respeito das interações entre as MSCs e os gliomas, fazendo com que seja possível avançar no estudo das terapias celulares para o tratamento do câncer. | pt_BR |
| dc.description.abstract-en | Glioblastomas are the most common tumors in the central nervous system, characterized by high proliferation rates, invasive power and high recurrence. The discovery of a highly tumorigenic, stem-like cell population among cancer cells led to the hypothesis of cancer stem cells (CSCs). This concept brought a paradigm shift for biology and therapy of cancer, since it was found out that CSCs would be responsible for the maintenance of tumor tissue. Therefore, the main deduction that can be made is that current therapies to fight cancer often fail because they are directed to the wrong cell types. Thus, it is necessary the development of new therapeutic approaches. Several studies have shown that mesenchymal stem cells (MSCs) exhibit tropism for gliomas making them promising for use in gene therapy against this tumor type. Nevertheless, the mechanisms responsible for the tropism of MSCs to tumors are not yet completely understood and, mainly, little is known about the interactions between MSCs and CSCs. Furthermore, there is now overwhelming evidence that CSCs interplay closely with the tumor microenvironment, which includes MSCs, and understanding these interactions could be a paradigm shift in the treatment of cancer. Thus, the aim of the present study was to investigate if factors released by human adipose derived stem cells (hADSCs) could interfere on glioma cancer stem cells development, trying to better understand interactions between these cell types. Mesenchymal stem cells were obtained from adipose tissue of patients undergoing abdominoplasty and/or reductive mammoplasty in the Plastic Surgery ISCMPA. Human glioma cell line U87 was purchased from American Type Culture Collection. The analysis of the influence of hADSCs on glioma CSCs was performed through exposure of U87 cells to the hADSCs conditioned medium (CM). U87 glioma cells were treated with MC (pure or diluted) in culture for 7 days, and then the number of tumor spheres formed was analyzed. We also assessed the expression of mRNA in treated and control gliomas, for CSCs markers by RTPCR, and then real-time PCR. The hADSC CM showed no influence on tumorspheres formation (p 0.781), even when corrected for cell viability. For PCR analysis, the mRNA expressions of CSC markers OCT4, Nanog, SOX2 and CD133 in cells under CM treatment were not statistically different from the expressions in control cells. Further, for OCT4 and Nanog these results were confirmed by flow cytometry, as the percentage of cells that were positive for these markers was the same in treated and control groups (p 0988 and p 0761, respectively). Finally, we evaluated whether the hADSC CM would be able to induce autophagy in U87 glioma cells, by LC3GFP+ protein and staining with acridine orange methods. We have found that CM was able to highly induce autophagosome formation in glioma cells compared with the control group (p <0.0001). Surprisingly, however, this autophagic flux seems to be stopped at the autolysosomes formation, since only the positive control group treated with rapamycin had an increase in autolysosome formation. Taking these results together, hADSC CM showed no influence on CSCs development and, moreover, seems to contribute in some way to induce autophagy in U87 glioma cells. This helps a better understanding about the interactions between MSCs and gliomas, making it possible to advance in the study of cellular therapies against cancer. | pt_BR |
| dc.description.sponsorship | FAPERGS, CAPES e CNPq | pt_BR |
| dc.identifier.uri | https://repositorio.ufcspa.edu.br/handle/123456789/278 | |
| dc.language.iso | pt_BR | pt_BR |
| dc.relation.requires | Adobe Reader | pt_BR |
| dc.rights | Acesso Aberto Imediato | * |
| dc.rights.uri | http://creativecommons.org/licenses/by-nc-sa/4.0/ | * |
| dc.subject | Glioblastoma | pt_BR |
| dc.subject | Células-Tronco | pt_BR |
| dc.subject | Tecido Adiposo | pt_BR |
| dc.subject | Células-Tronco Tumorais | pt_BR |
| dc.subject | Autofagia | pt_BR |
| dc.subject | [en] Stem Cells | en |
| dc.subject | [en] Adipose Tissue | en |
| dc.subject | [en] Neoplastic Stem Cells | en |
| dc.subject | [en] Autophagy | en |
| dc.title | Influência das células tronco mesenquimais no desenvolvimento das células tronco tumorais de glioma | pt_BR |
| dc.type | Dissertação | pt_BR |