Investigação de metodologias alternativas para a extração de ácidos nucleicos

Página do item simplificado
dc.contributor.advisorMerib, Josias de Oliveirapt_BR
dc.contributor.advisor-coTrentin, Danielle da Silvapt_BR
dc.contributor.authorFerreira Neto, Luiz Carlos pt_BR
dc.date.accessioned2023-02-06T18:44:38Z
dc.date.accessioned2023-10-09T13:21:43Z
dc.date.available2023-02-06T18:44:38Z
dc.date.available2023-10-09T13:21:43Z
dc.date.date-insert2023-02-06
dc.date.issued2022
dc.descriptionDissertação (Mestrado)-Programa de Pós-Graduação em Biociências, Fundação Universidade Federal de Ciências da Saúde de Porto Alegre.pt_BR
dc.description.abstractO presente trabalho teve como base a proposta da investigação de uma metodologia analítica alternativa para a extração de DNA. Como relatado em diversos estudos, a extração de DNA apresenta-se como um ponto crítico nas determinações dessa biomolécula em diversos tipos de amostras. Desta forma, a metodologia de extração baseada na microextração em gota única (SDME, (do inglês single drop microextraction) utilizando líquidos iônicos magnéticos (MILs, do inglês magnetic ionic liquids) como fase extratora foi proposta. Essa metodologia consiste em um procedimento experimental eficiente e ambientalmente correto de preparo de amostras, o qual apresenta baixo custo, consumo reduzido de solventes e simplicidade de aplicação. Assim, o objetivo deste estudo foi desenvolver uma metodologia alternativa e com alta frequência analítica para a extração de DNA baseada em microextração com a aplicação de líquidos iônicos magnéticos. Foram sintetizados e caracterizados os MILs de ([P6,6,6,14+ ][Mn(II)(hfacac)3 − ]), ([P6,6,6,14+ ][ Ni(II)(hfacac)3 − ]) e ([P6,6,6,14+ ][Co(II)(hfacac)3 − ]) e utilizados como solvente de extração na técnica SDME seguido por análise utilizando reação em cadeia da polimerase (PCR, do inglês polymerase chain reaction) e eletroforese em gel. Além disso, um procedimento experimental no qual foram permitidas extrações simultâneas em várias amostras também foi proposto e avaliado. Em um primeiro momento, amostras aquosas fortificadas com quantidades conhecidas de DNA para verificar a viabilidade de extração. Após isso, foram realizadas extrações em amostras de saliva, sangue e urina sendo obtidos resultados bastante satisfatórios principalmente para as matrizes de sangue e saliva. O método desenvolvido se mostrou com alta frequência analítica e capaz de extrair DNA de amostras biológicas complexas. Adicionalmente, o método desenvolvido foi aplicado com sucesso na plataforma de extração projetada ao longo deste trabalho, ao passo que mostra um grande potencial para a investigações futuras em PCR em tempo real, bem como para o aprimoramento do aparato proposto.pt_BR
dc.description.abstract-enThis study consists of an investigation of alternative analytical methodology for DNA extraction. According to numerous studies, DNA extraction is considered a critical point for the determination of this biomolecule in different types of samples. In particular, the extraction methodology based on single drop microextraction (SDME) using magnetic ionic liquids (MILs) as extraction phase was proposed. This methodology consists of an efficient and environmentally friendly sample preparation procedure, exhibiting low cost, reduced solvent consumption and simplicity of application. Therefore, the aim of this study was to develop an alternative methodology with high sample throughput for DNA extraction based on microextraction with the application of magnetic ionic liquids. The ([P6,6,6,14+ ][Mn(II)(hfacac)3 − ]), ([P6,6,6,14+ ][ Ni(II)(hfacac)3 − ]) and ([P6,6,6,14+ ][Co(II)(hfacac)3 − ]) MILs were used as extraction solvent in a SDME approach followed by analysis using polymerase chain reaction (PCR) and gel electrophoresis. An experimental workflow in which simultaneous extractions were capable to be performed was also proposed and evaluated. Firstly, aqueous samples were spiked with known amounts of DNA in order to evaluate the extraction feasibility. Following, extractions were performed using samples of saliva, blood and urine, with satisfactory results obtained especially for blood and saliva matrices. The method developed allowed for high-throughput and it was capable of extracting DNA from complex biological samples. Additionally, the method proposed in this study was successfully applied using an innovative extraction platform designed in this work, exhibiting great potential for further investigations in real-time PCR as well as suitable for the improvement of the proposed configuration.pt_BR
dc.description.sponsorshipCoordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) – Brasil; Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico (CNPq); Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado do Rio Grande do Sul (FAPERGS)pt_BR
dc.identifier.urihttps://repositorio.ufcspa.edu.br/handle/123456789/1975
dc.language.isopt_BRpt_BR
dc.relation.requiresTEXTO - Adobe Readerpt_BR
dc.rightsAcesso Aberto Imediatopt_BR
dc.rights.urihttp://creativecommons.org/licenses/by-nc-sa/3.0/br/*
dc.subjectPreparo de Amostraspt_BR
dc.subjectDNApt_BR
dc.subjectAmostras Biológicaspt_BR
dc.subjectLíquidos Iônicos Magnéticospt_BR
dc.subject[en] Biological Specimen Banksen
dc.titleInvestigação de metodologias alternativas para a extração de ácidos nucleicospt_BR
dc.typeDissertaçãopt_BR
Arquivos
Pacote Original
Agora exibindo 1 - 1 de 1
Nenhuma Miniatura disponível
Nome:
[DISSERTAÇÃO] Ferreira Neto, Luiz Carlos (C).pdf
Tamanho:
1.56 MB
Formato:
Adobe Portable Document Format
Descrição:
Texto completo
Baixar
Coleções
PPGBIO - Dissertações