Investigação de metodologias alternativas para a extração de ácidos nucleicos
Carregando...
Data
2022
Autores
Título da Revista
ISSN da Revista
Título de Volume
Editor
Resumo
O presente trabalho teve como base a proposta da investigação de uma
metodologia analítica alternativa para a extração de DNA. Como relatado em
diversos estudos, a extração de DNA apresenta-se como um ponto crítico nas
determinações dessa biomolécula em diversos tipos de amostras. Desta forma,
a metodologia de extração baseada na microextração em gota única (SDME,
(do inglês single drop microextraction) utilizando líquidos iônicos magnéticos
(MILs, do inglês magnetic ionic liquids) como fase extratora foi proposta. Essa
metodologia consiste em um procedimento experimental eficiente e
ambientalmente correto de preparo de amostras, o qual apresenta baixo custo,
consumo reduzido de solventes e simplicidade de aplicação. Assim, o objetivo
deste estudo foi desenvolver uma metodologia alternativa e com alta frequência
analítica para a extração de DNA baseada em microextração com a aplicação
de líquidos iônicos magnéticos. Foram sintetizados e caracterizados os MILs de
([P6,6,6,14+
][Mn(II)(hfacac)3
−
]), ([P6,6,6,14+
][ Ni(II)(hfacac)3
−
]) e
([P6,6,6,14+
][Co(II)(hfacac)3
−
]) e utilizados como solvente de extração na técnica
SDME seguido por análise utilizando reação em cadeia da polimerase (PCR,
do inglês polymerase chain reaction) e eletroforese em gel. Além disso, um
procedimento experimental no qual foram permitidas extrações simultâneas em
várias amostras também foi proposto e avaliado. Em um primeiro momento,
amostras aquosas fortificadas com quantidades conhecidas de DNA para
verificar a viabilidade de extração. Após isso, foram realizadas extrações em
amostras de saliva, sangue e urina sendo obtidos resultados bastante
satisfatórios principalmente para as matrizes de sangue e saliva. O método
desenvolvido se mostrou com alta frequência analítica e capaz de extrair DNA
de amostras biológicas complexas. Adicionalmente, o método desenvolvido foi
aplicado com sucesso na plataforma de extração projetada ao longo deste
trabalho, ao passo que mostra um grande potencial para a investigações
futuras em PCR em tempo real, bem como para o aprimoramento do aparato
proposto.
Descrição
Dissertação (Mestrado)-Programa de Pós-Graduação em Biociências, Fundação Universidade Federal de Ciências da Saúde de Porto Alegre.
Palavras-chave
Preparo de Amostras, DNA, Amostras Biológicas, Líquidos Iônicos Magnéticos, [en] Biological Specimen Banks