Efeito da deleção de Nek1 em células de glioblastoma

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dc.contributor.advisorMoura, Dinara Jaqueline
dc.contributor.advisor-coLenz, Guido
dc.contributor.authorMorás, Ana Moira
dc.date.accessioned2022-05-19T14:04:29Z
dc.date.accessioned2023-10-09T13:30:04Z
dc.date.available2022-05-19T14:04:29Z
dc.date.available2023-10-09T13:30:04Z
dc.date.date-insert2022-05-19
dc.date.issued2021
dc.descriptionTese (Doutorado)-Programa de Pós-Graduação em Biociências, Fundação Universidade Federal de Ciências da Saúde de Porto Alegre.pt_BR
dc.description.abstractOs glioblastomas (GBM) são gliomas de classe IV altamente prevalentes dentre os tumores malignos do SNC. Após diagnóstico, apenas 4 a 5% dos pacientes sobrevivem mais de 5 anos, e apesar de todo o progresso recente nas estratégias de tratamento, a sobrevida média é de cerca de 15 meses. A terapia padrão de GBM consiste em máxima ressecção cirúrgica, seguida por radioterapia e quimioterapia à base de temozolomida. Essa tríade de ação é fundamental para o manejo clínico da doença e aumento da qualidade de vida do paciente, porém, o GBM permanece como uma doença incurável. Por esse motivo, compreender como os processos de resistência tumoral são regulados pode auxiliar no desenvolvimento de novas estratégias terapêuticas. A proteína Nek1 pertence à família de cinases relacionadas à NIMA (NEK) e possui importantes funções na resposta a danos no DNA e checkpoint de ciclo celular. Sua participação na resposta a danos no DNA ocorre principalmente nas etapas iniciais de sinalização, através do eixo NEK1>ATR>Chk1. A proteína Nek1 é uma das proteínas que já foi associada com resistência tumoral em células de gliomas. Para uma melhor compreensão do cenário clínico no qual o GBM está inserido de forma a revisar o estado da arte das estratégias de tratamento, bem como novos alvos terapêuticos realizou-se um trabalho de revisão. Esse trabalho mostrou que a utilização de estratégias farmacológicas para inibir proteínas de resposta a danos no DNA em glioblastoma falham principalmente devido à baixa tolerabilidade dessas terapias. A fim de superar essas características negativas, grande atenção foi dada para o campo de estratégias no sistema de entregas, associadas a abordagens neurológicas para tratamento local, aumentando assim a biodisponibilidade e a eficiência dos medicamentos. Desta forma, o papel da proteína Nek1 na resposta a danos no DNA em glioblastoma foi investigado no segundo trabalho, apresentado nesta tese. Nós mostramos que células deficientes em Nek1 aumentam a sensibilidade a danos induzidos por zeocina, tanto num tratamento agudo, quanto crônico. As respostas celulares, por sua vez, difeririam nesses dois esquemas de tratamentos. O tratamento agudo induziu maior ativação de H2AX, Chk2 e p53 em células deficientes em Nek1. O perfil de ciclo celular, neste esquema de tratamento, foi semelhante à linhagem selvagem, com uma parada em G2. Em uma exposição crônica, por outro lado, as células deficientes em Nek1 demonstraram menor ativação de H2AX e redução na % de células com parada de ciclo celular de em G2, em relação à linhagem selvagem. Por fim, nós também analisamos o perfil de expressão de Nek1 em biopsias de pacientes com diagnóstico de Glioblastoma confirmado. Nossos resultados indicam que os níveis de Nek1 variam de baixa a alta expressão e não se correlacionam com Ki67. Dessa forma, esse artigo indica que Nek1 é um alvo interessante na resposta a agentes radiomiméticos, uma vez que impactou na resposta celular, porém sua relevância ainda precisa ser melhor explorada.pt_BR
dc.description.abstract-enGlioblastomas (GBM) class IV gliomas are highly prevalent among malignant CNS tumors. After diagnosis, only 4 to 5% of patients survive more than 5 years. The median survival is 15 months despite all the recent progress in treatment strategies. Surgical resection followed by radiotherapy and temozolomide-based chemotherapy are included in standard GBM therapy. This is essential for the disease clinical management and for increasing the patient's quality of life. However, GBM remains an incurable disease. For this reason, understanding how tumor resistance processes are regulated can help in the development of new therapeutic strategies. The Nek1 protein belong to the family of NIMA-related kinases (NEK) and has important roles in the DNA damage response (DDR) and cell cycle checkpoint. Its participation in the response to DNA damage occurs mainly in the initial stages of signaling, through the NEK1>ATR>Chk1 axis. The Nek1 is one of the proteins that have been associated with tumor resistance in glioma cells. A review report was carried out to better understand the clinical scenario of GBM and how the search for treatment strategies and therapeutic targets can improve clinical results. The use of pharmacological strategies to inhibit DNA damage response proteins in GBM fails mainly due to the low tolerability of these therapies. In order to overcome these negative characteristics, great attention has been given to the field of delivery system strategies associated with neurological approaches to local treatment, thus increasing the bioavailability and efficiency of drugs. Thus, the role of the Nek1 protein in the response to DNA damage in GBM was investigated in a second manuscript, presented in this thesis. The aim of this work was to investigate the role of Nek1 in the initial response to lesions induced by acute and chronic treatment with Zeocin, associated or not with TMZ, in GBM cells. In 24h we observed that Nek1 deficient strains have an increased sensitivity to treatment with zeocin associated with TMZ, more activation of γH2AX, Chk2 and p53 and cell cycle arrest, similar to the WT strain. However, in a treatment with lower doses of zeocin for a longer time, we observed that the strain deficient in Nek1 maintains its increased sensitivity to the treatment, reduces the initial signaling of damage and there is no arrest of the cell cycle, indicating Nek1 dependence. In conclusion, the Nek1 protein appears to have a subtle effect on the response to zeocin and its involvement could be further explored under different times and conditions of treatment.pt_BR
dc.description.sponsorshipFAPERGS/MS/CNPq/SESRS n– PPSUS; Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES)pt_BR
dc.identifier.urihttps://repositorio.ufcspa.edu.br/handle/123456789/1863
dc.language.isopt_BRpt_BR
dc.publisherWagner Wessfllpt_BR
dc.relation.requiresTEXTO - Adobe Readerpt_BR
dc.rightsAcesso Aberto Após Período de Embargopt_BR
dc.rights.urihttp://creativecommons.org/licenses/by-nc-sa/4.0/*
dc.subjectGlioblastomapt_BR
dc.subjectSistemas de Entrega de Drogaspt_BR
dc.subjectDano ao DNApt_BR
dc.subjectNek1pt_BR
dc.subjectZeocinapt_BR
dc.subject[en] DNA Damageen
dc.titleEfeito da deleção de Nek1 em células de glioblastomapt_BR
dc.typeTesept_BR
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