Epidemiologia molecular e expressão de genes de virulência de Enterococcus spp. isolados de amostras clínicas no sul do Brasil
| dc.contributor.advisor | d'Azevedo, Pedro Alves | |
| dc.contributor.advisor-co | Caierão, Juliana | |
| dc.contributor.advisor-co | Caljon, Guy | |
| dc.contributor.author | Soares, Renata Oliveira | |
| dc.date.accessioned | 2019-08-02T13:37:27Z | |
| dc.date.accessioned | 2023-10-09T16:32:18Z | |
| dc.date.available | 2019-08-02T13:37:27Z | |
| dc.date.available | 2023-10-09T16:32:18Z | |
| dc.date.date-insert | 2019-08-02 | |
| dc.date.issued | 2018 | |
| dc.description | Tese (Doutorado)-Programa de Pós-Graduação em Ciências da Saúde, Fundação Universidade Federal de Ciências da Saúde de Porto Alegre. | pt_BR |
| dc.description.abstract | Enterococcus faecalis e Enterococcus faecium são patógenos oportunistas, capazes de causar diferentes tipos de infecções, desde infecções comuns do trato urinário até infecções relacionadas à assistência à saúde. Tal capacidade está diretamente associada à sua habilidade para formar biofilme e à presença de diversos fatores de virulência e genes de resistência, que lhes conferem vantagens seletivas sob condições adversas. Os Enterococos Resistentes à Vancomicina (VRE, do inglês Vancomycin-Resistant Enterococci) têm se tornado cada vez mais comuns em diversas partes do mundo, e sua identificação rápida e precisa, assim como a compreensão de sua disseminação clonal, podem contribuir para o tratamento e controle das infecções causadas por este agente. Neste estudo, avaliamos o desempenho de um meio cromogênico seletivo (ágar chromID™ VRE) na identificação de 184 isolados clínicos de Enterococcus spp. (suscetíveis e resistentes à vancomicina) e cepas de referência. Em segundo lugar, caracterizamos o perfil de suscetibilidade e as relações clonais de 94 VREs, recuperados de pacientes internados em hospitais gerais de Porto Alegre, Brasil. Em terceiro lugar, avaliamos a capacidade de formação de biofilme de 123 isolados clínicos de E. faecalis na presença e ausência de 1% D-(+)-glicose e a expressão de quatro genes relacionados ao biofilme (ebpA, efaA, ace e gelE) em onze isolados clínicos de E. faecalis e cepa ATCC E. faecalis ATCC 29212 por qPCR. Por fim, avaliamos a capacidade de formação de biofilme do isolado E. faecalis V583 na ausência e presença de soro humano (1%, 5%, 25% e 50%) e a expressão de cinco genes de virulência (ebpA, efaA, ace, gelE e asa) em células planctônicas e sésseis por qPCR. Embora o ágar ChromID™ VRE tenha uma alta sensibilidade (95,52%), apresentou também uma baixa especificidade (30%). Todos os VREs foram identificados como Enterococcus faecium e exibiram resistência a altos níveis de vancomicina, resistência à teicoplanina, ampicilina, ciprofloxacina e 13,8% apresentaram resistência a altos níveis gentamicina. Todos os VREs apresentaram o gene vanA, 85,1% o gene esp e 94,7% o gene acm. A tipagem molecular revelou um perfil policlonal, com 79 isolados distribuídos dentro de 23 tipos clonais, enquanto 15 isolados exibiram padrões únicos. Considerando a habilidade para a formação de biofilme, a suplementação com 1% de glicose aumentou significativamente a formação de biofilme entre os isolados de E. faecalis. No entanto, a expressão gênica variou entre eles, mostrando que os padrões de expressão dos genes de virulência podem ser parcialmente dependentes do background genético bacteriano, ao invés de condições exclusivamente ambientais. Por outro lado, foi observada uma inibição da adesão na presença de 5% de soro humano em relação ao grupo controle. As células planctônicas de E. faecalis V583 exibiram aumento da expressão do gene asa em 5%, 25% e 50% de soro humano, enquanto nas células sésseis, os genes efaA, gelE, ace e asa foram significativamente superexpressos em altas concentrações de soro humano (25 % e 50%). Uma melhor compreensão desse processo, bem como a aplicação desses achados in vivo, pode auxiliar na busca de estratégias para o controle da formação do biofilme por esses micro-organismos. | pt_BR |
| dc.description.abstract-en | Enterococcus faecalis and Enterococcus faecium are opportunistic pathogens, able to cause different types of infections, from ordinary urinary tract infections to lifethreatening healthcare-associated ones. This capacity is directly associated with their ability to form biofilm and the presence of many virulence factors and resistance genes, giving them selective advantages in adverse conditions. Vancomycin-Resistant Enterococci (VRE) has become increasingly common in some settings around the world and their rapid and accurate identification, as well as the understanding of their clonal spread, can improve treatment and infection control policies. In this study, we evaluated the performance of a selective chromogenic medium (chromID™ VRE agar) using 184 clinical isolates of Enterococcus spp. (susceptible and resistant to vancomycin) and reference strains. Secondly, we characterized the susceptibility profile and clonal relationships of 94 VRE, recovered from inpatients attended at three general Hospitals of Porto Alegre, Brazil. Thirdly, we evaluated the ability to form biofilm of 123 E. faecalis clinical isolates in the presence and absence of 1% D-(+)- glucose and the expression of four biofilm-related genes (ebpA, efaA, ace and gelE) in eleven clinical isolates and E. faecalis ATCC 29212 by qPCR. Lastly, we evaluated the E. faecalis V583 biofilm formation capability in the absence and presence of human serum (1%, 5%, 25% and 50%) and the expression of five virulence genes ebpA, efaA, ace, gelE and asa in planktonic and sessile cells by qPCR. Although ChromID™ VRE agar had a very good sensitivity (95.52%), it presented a worrisome low specificity (30%). All VRE were identified as Enterococcus faecium and exhibited high-level resistance to vancomycin, resistance to teicoplanin, ampicillin, ciprofloxacin and 13.8% of them were resistant to high level of gentamicin. All VRE harbored vanA gene, 85.1% esp gene and 94.7% acm gene. PFGE profile analysis revealed a polyclonal distribution with 23 clonal types encompassing 79 isolates, while 15 isolates exhibited unique patterns. Considering biofilm formation, 1% glucose supplementation increased significantly the biofilm formation among E. faecalis. However, gene expression varied among them, showing that patterns of virulence gene expression may be dependent partially on the bacterial genetic background, rather than exclusively environmental conditions. On the other hand, it was observed an inhibition of the adhesion in the presence of 5% human serum compared to the control group. Planktonic cells of E. faecalis V583 exhibited upregulation of asa gene in 5%, 25% and 50% of human serum, while in the sessile cells, efaA, gelE, ace and asa genes were significantly upregulated in high concentrations of human serum (25% and 50%). A better understanding of this process as well as the application of these findings in vivo may help in the search for strategies to control the biofilm formation by this microorganism. | pt_BR |
| dc.description.sponsorship | CAPES; CNPq | pt_BR |
| dc.identifier.uri | https://repositorio.ufcspa.edu.br/handle/123456789/697 | |
| dc.language.iso | pt_BR | pt_BR |
| dc.relation.requires | Adobe Reader | pt_BR |
| dc.rights | Acesso Aberto Imediato | * |
| dc.rights.uri | http://creativecommons.org/licenses/by-nc-sa/4.0/ | * |
| dc.subject | Enterococcus faecalis | pt_BR |
| dc.subject | Enterococcus faecium | pt_BR |
| dc.subject | Resistência a Vancomicina | pt_BR |
| dc.subject | Fatores de Virulência | pt_BR |
| dc.subject | Biofilmes | pt_BR |
| dc.subject | [en] Vancomycin Resistance | en |
| dc.subject | [en] Virulence Factors | en |
| dc.subject | [en] Biofilms | en |
| dc.title | Epidemiologia molecular e expressão de genes de virulência de Enterococcus spp. isolados de amostras clínicas no sul do Brasil | pt_BR |
| dc.type | Tese | pt_BR |