Caracterização fenotípica e análise de fatores de virulência em staphylococcus saprophyticus

Abstract

Introdução: Elevado número de espécies bacterianas pertencentes ao gênero Staphylococcus foram descritas como integrantes da microbiota normal do hospedeiro humano. Entretanto, processos infecciosos por micro-organismos historicamente considerados de baixa relevância, principalmente pertencentes aos Staphylococcus coagulase-negativos (SCoN), têm sido reportados na literatura. Além disso, entre os SCoN há um subgrupo de espécies bacterianas emergentes nas quais compartilham características fenotípicas e filogenéticas estritas com isolados de S. saprophyticus, tornando-se de difícil discriminação no laboratório de microbiologia clínica. Essa espécie, segundo a literatura, é o principal coco Gram-positivo de infecções do trato urinário (ITU) não-complicadas em mulheres jovens, possuindo diversas proteínas de superfície de papel reconhecido na aderência e colonização do uro-epitélio. Objetivos: O presente estudo teve por objetivos avaliar o desempenho dos sistemas automatizado Vitek 2 e Vitek MS na identificação de cocos Gram-positivos, com especial atenção na discriminação de espécies de Staphylococcus do grupo saprophyticus, além de caracterizar os potenciais fatores de virulência desse uropatógeno. Materiais e Métodos: Cento e quatro isolados bacterianos de cocos Gram-positivos foram testados quanto a acurácia do sistema Vitek 2 (automação fenotípica) e 450 isolados clínicos para o Vitek MS (MALDITOF MS). Amostras de S. saprophyticus foram avaliadas quanto à capacidade de formação de biofilme, aderência às células de linhagem uro-epitelial T-24 e frequência de genes associados à adesão (aas, uafA, sdrI e ssp), além de caracterização fenotípica e perfil de suscetibilidade aos antimicrobianos. Resultados e Discussão: O sistema Vitek 2 corretamente identificou as seguintes amostras bacterianas: 73,7% Enterococcus, 76,7% Staphylococcus e 77,8% Streptococcus. A identificação em nível de espécies para os micro-organismos comumente isolados, como S. aureus e E. faecalis, foi de 100%. Contudo, para as espécies menos frequentes, a acurácia foi aquém do recomendado, principalmente para SCoN. O desempenho do sistema Vitek 2 na discriminação de cepas de Staphylococcus do grupo saprophyticus foi semelhante ao observado com os SCoN (86,7%). Diferentemente do método automatizado baseado em provas fenotípicas de identificação, a metodologia MALDI-TOF obteve elevada acurácia na identificação de micro-organismos cocos Gram-positivos (97,8%). Apesar de elevado número de amostras terem apresentado perfil atípico pelo método fenotípico referência (60,4%), 99% dos S. saprophyticus foram identificados corretamente pelo Vitek MS, bem como outras espécies pertencentes ao grupo. A formação de biofilme foi prevalente nos isolados de S. saprophyticus (98,5%), com a maioria categorizados como forte e moderadamente aderentes (78,6%), além de elevada frequência de potenciais fatores de virulência associados à aderência como aas (98,5%), uafA (100%) e ssp (98,5%). Além disso, apesar dessas amostras mostrarem aderência à linhagem uro-epitelial T-24, não foi evidenciada diferenças estatisticamente significativa com isolados de E. faecalis, outro uropatógeno comum em ITU não-complicadas. Embora as taxas de resistência tenham se mostrado baixas, especial atenção deve ser dada a reduzida suscetibilidade à trimetroprimsulfametoxazol (10,9%) e norfloxacina (12%), antimicrobianos comumente utilizados no tratamento de ITU. Conclusão: A partir dos resultados obtidos, foi evidenciada elevada variabilidade fenotípica entre isolados de Staphylococcus saprophyticus, podendo acarretar em dificuldades na identificação desses patógenos. Como alternativa, a metodologia MALDITOF mostrou elevada especificidade na identificação de cocos Gram-positivos, inclusive os pertencentes ao grupo saprophyticus. A caracterização desses isolados evidenciou a presença de um perfil de fatores de virulência associados à adesão no trato urinário, demonstrando o potencial uropatogênico de isolados de S. saprophyticus