Caracterização fenotípica e análise de fatores de virulência em staphylococcus saprophyticus
| dc.contributor.advisor | d'Azevedo, Pedro Alves | |
| dc.contributor.author | Paim, Thiago Galvão da Silva | |
| dc.date.accessioned | 2016-10-14T14:08:15Z | |
| dc.date.accessioned | 2023-10-09T13:59:30Z | |
| dc.date.available | 2016-10-14T14:08:15Z | |
| dc.date.available | 2023-10-09T13:59:30Z | |
| dc.date.date-insert | 2016-10-14 | |
| dc.date.issued | 2013 | |
| dc.description | Dissertação (Mestrado)-Programa de Pós-Graduação em Ciências da Saúde, Fundação Universidade Federal de Ciências da Saúde de Porto Alegre. | pt_BR |
| dc.description.abstract | Introdução: Elevado número de espécies bacterianas pertencentes ao gênero Staphylococcus foram descritas como integrantes da microbiota normal do hospedeiro humano. Entretanto, processos infecciosos por micro-organismos historicamente considerados de baixa relevância, principalmente pertencentes aos Staphylococcus coagulase-negativos (SCoN), têm sido reportados na literatura. Além disso, entre os SCoN há um subgrupo de espécies bacterianas emergentes nas quais compartilham características fenotípicas e filogenéticas estritas com isolados de S. saprophyticus, tornando-se de difícil discriminação no laboratório de microbiologia clínica. Essa espécie, segundo a literatura, é o principal coco Gram-positivo de infecções do trato urinário (ITU) não-complicadas em mulheres jovens, possuindo diversas proteínas de superfície de papel reconhecido na aderência e colonização do uro-epitélio. Objetivos: O presente estudo teve por objetivos avaliar o desempenho dos sistemas automatizado Vitek 2 e Vitek MS na identificação de cocos Gram-positivos, com especial atenção na discriminação de espécies de Staphylococcus do grupo saprophyticus, além de caracterizar os potenciais fatores de virulência desse uropatógeno. Materiais e Métodos: Cento e quatro isolados bacterianos de cocos Gram-positivos foram testados quanto a acurácia do sistema Vitek 2 (automação fenotípica) e 450 isolados clínicos para o Vitek MS (MALDITOF MS). Amostras de S. saprophyticus foram avaliadas quanto à capacidade de formação de biofilme, aderência às células de linhagem uro-epitelial T-24 e frequência de genes associados à adesão (aas, uafA, sdrI e ssp), além de caracterização fenotípica e perfil de suscetibilidade aos antimicrobianos. Resultados e Discussão: O sistema Vitek 2 corretamente identificou as seguintes amostras bacterianas: 73,7% Enterococcus, 76,7% Staphylococcus e 77,8% Streptococcus. A identificação em nível de espécies para os micro-organismos comumente isolados, como S. aureus e E. faecalis, foi de 100%. Contudo, para as espécies menos frequentes, a acurácia foi aquém do recomendado, principalmente para SCoN. O desempenho do sistema Vitek 2 na discriminação de cepas de Staphylococcus do grupo saprophyticus foi semelhante ao observado com os SCoN (86,7%). Diferentemente do método automatizado baseado em provas fenotípicas de identificação, a metodologia MALDI-TOF obteve elevada acurácia na identificação de micro-organismos cocos Gram-positivos (97,8%). Apesar de elevado número de amostras terem apresentado perfil atípico pelo método fenotípico referência (60,4%), 99% dos S. saprophyticus foram identificados corretamente pelo Vitek MS, bem como outras espécies pertencentes ao grupo. A formação de biofilme foi prevalente nos isolados de S. saprophyticus (98,5%), com a maioria categorizados como forte e moderadamente aderentes (78,6%), além de elevada frequência de potenciais fatores de virulência associados à aderência como aas (98,5%), uafA (100%) e ssp (98,5%). Além disso, apesar dessas amostras mostrarem aderência à linhagem uro-epitelial T-24, não foi evidenciada diferenças estatisticamente significativa com isolados de E. faecalis, outro uropatógeno comum em ITU não-complicadas. Embora as taxas de resistência tenham se mostrado baixas, especial atenção deve ser dada a reduzida suscetibilidade à trimetroprimsulfametoxazol (10,9%) e norfloxacina (12%), antimicrobianos comumente utilizados no tratamento de ITU. Conclusão: A partir dos resultados obtidos, foi evidenciada elevada variabilidade fenotípica entre isolados de Staphylococcus saprophyticus, podendo acarretar em dificuldades na identificação desses patógenos. Como alternativa, a metodologia MALDITOF mostrou elevada especificidade na identificação de cocos Gram-positivos, inclusive os pertencentes ao grupo saprophyticus. A caracterização desses isolados evidenciou a presença de um perfil de fatores de virulência associados à adesão no trato urinário, demonstrando o potencial uropatogênico de isolados de S. saprophyticus | pt_BR |
| dc.description.abstract-en | Introduction: Many Staphylococcus bacterial species were described as members of normal flora in humans. However, infectious diseases by microorganisms that historically were reported of low virulence, mainly Coagulase-negative Staphylococcus (CoNS), have been described. Furthermore, among CoNS there are emerging bacterial species that share phenotypic and phylogenetic profile with S. saprophyticus strains, the mainly Gram-positive cocci isolated from non-complicated urinary tract infections (UTI) in young and sexually active women. These strains have several surface proteins with important role in adhesion and colonization of uro-epithelial tissue. Objetives: The aim of the study was evaluate the performance of automated system Vitek 2 and Vitek MS in bacterial identification of Grampositive cocci and Staphylococcus saprophyticus group, as well as to evaluate the virulence factors in these strains. Material and Methods: One hundred four clinical strains were evaluated as to accuracy of Vitek 2 and 450 isolates to Vitek MS (MALDI-TOF) systems. Biofilm formation, adherence assay in uro-epithelial T-24 tissue cells and adherence associated factors (aas, uafA, sdrI e ssp) were performed in S. saprophyticus isolates, beyond phenotypic characterization and antimicrobial susceptibility profile. Results and Discussion: The Vitek 2 system correctly identified the following strains: 73,7% Enterococcus, 76,7% Staphylococcus and 77,8% Streptococcus. All the commonly bacterial strains, as S. aureus and E. faecalis, were correctly identified in species level. However, low accuracy was found in CoNS, similarly to Staphylococcus saprophyticus group (86.7%). The MALDI-TOF agreement rate in the Gram-positive cocci identification was 97.8%. Although of high number of strains have shown atypic profile by reference methodology (60.4%), 99% of S. saprophyticus isolates were correctly identified by Vitek MS, as well as others bacterial species of the S. saprophyticus group. The biofilm formation was found in 98.5% of S. saprophyticus strains, mainly categorized as strong and moderate phenotypes (78.6%), and elevated frequency of potential adherence factors was found – aas (98,5%), uafA (100%) and ssp (98,5%). Moreover, although these bacterial strains have shown adhesion to uro-epithelial T-24 cells, there was no statistical difference among E. faecalis isolates. Although low resistance rates was found in S. saprophyticus strains, elevated non-susceptibility (intermediate or resistance phenotypes) to trimethoprim-sulfamethoxazole and norfloxacin were found (10.9% and 12%, respectively), antimicrobial agents commonly used to treat UTI. Conclusion: Our results demonstrated high phenotypic variability among Staphylococcus saprophyticus strains, which may to dificult the bacterial identification of theses pathogens. Instead, the MALDI-TOF metodology showed high specificity in the Gram-positive cocci, including S. saprophyticus group. The bacterial caracterization revealed a presence of virulence factors profile associated to adhesion in urinary tract by S. saprophyticus. | pt_BR |
| dc.identifier.uri | https://repositorio.ufcspa.edu.br/handle/123456789/267 | |
| dc.language.iso | pt_BR | pt_BR |
| dc.relation.requires | Adobe Reader | pt_BR |
| dc.rights | Acesso Aberto Imediato | * |
| dc.rights.uri | http://creativecommons.org/licenses/by-nc-sa/4.0/ | * |
| dc.subject | Cocos Gram-Positivos | pt_BR |
| dc.subject | Staphylococcus saprophyticus | pt_BR |
| dc.subject | Identificação Bacteriana | pt_BR |
| dc.subject | Aderência ao Uro-Epitélio | pt_BR |
| dc.subject | [en] Gram-Positive Cocci | en |
| dc.title | Caracterização fenotípica e análise de fatores de virulência em staphylococcus saprophyticus | pt_BR |
| dc.type | Dissertação | pt_BR |