Investigação de metodologias alternativas para extração de ácidos nucleicos: microextração em gota única de RNA utilizando um líquido iônico magnético como fase extratora

Página do item simplificado
dc.contributor.advisorMerib, Josias de Oliveirapt_BR
dc.contributor.advisor-coLopes, Paulo Guilherme Markuspt_BR
dc.contributor.authorAlves, Mônica Silvapt_BR
dc.date.accessioned2023-02-13T19:35:03Z
dc.date.accessioned2023-10-09T13:21:42Z
dc.date.available2023-02-13T19:35:03Z
dc.date.available2023-10-09T13:21:42Z
dc.date.date-insert2023-02-13
dc.date.issued2023
dc.descriptionDissertação (Mestrado)-Programa de Pós-Graduação em Biociências, Fundação Universidade Federal de Ciências da Saúde de Porto Alegre.pt_BR
dc.description.abstractAs técnicas de análise molecular para a determinação de ácidos nucleicos vêm se destacando cada vez mais nos protocolos de pesquisa e diagnóstico. O sucesso dessas técnicas se deve ao seu alto nível de sensibilidade e especificidade que as tornam reprodutíveis e confiáveis. Ainda assim, para obter um diagnóstico de qualidade é necessário realizar cuidadosamente o preparo das amostras, incluindo a etapa da extração do analito. A extração de RNA é particularmente delicada por se tratar de uma biomolécula muito instável. A utilização de Líquidos Iônicos Magnéticos (MILs) em técnicas de preparo de amostras está sendo investigada como possível alternativa para a extração dessas biomoléculas, correspondendo a procedimentos de baixo custo, com menor toxicidade que alguns protocolos tradicionais, e que requerem significativamente menos etapas para realização. Este estudo teve por objetivo investigar a capacidade de extração do MIL [P66614] + [Ni(hfacac)3] - , sintetizado pelo grupo de pesquisa, na captura de RNA total. Para tanto, foram utilizadas amostras aquosas contendo RNA já isolado obtido através do hipotálamo de camundongos machos e posteriormente diluído a fim de obter a concentração desejada para os experimentos. Além disso, foi utilizada uma plataforma de extração para ampliar a frequência analítica. As medições analíticas foram realizadas através da reação em cadeia da polimerase via transcriptase reversa quantitativa (RT-qPCR). Os resultados indicam que o MIL foi capaz de extrair o RNA de soluções com concentrações tão baixas quanto 3 ng/μL, apresentando reprodutibilidade em 6 ng/μL. Resultados preliminares indicaram que o MIL não inibiu a amplificação na PCR e que tempos longos de extração podem acarretar back-extraction. Este foi o primeiro estudo a utilizar microextração em gota única (SDME) com MIL na extração de RNA. Futuros estudos ainda são necessários para avaliar a capacidade de extração desse MIL na presença de interferentes e em matrizes complexas.pt_BR
dc.description.abstract-enMolecular analysis techniques for the determination of nucleic acids have been increasingly highlighted in research and diagnostic protocols. The success of these techniques is due to their high sensitivity and specificity, which make them reproducible and reliable. Even so, to obtain a high-quality diagnosis, it is necessary to carefully perform the sample preparation, including the extraction of nucleic acid. RNA extraction is particularly complex because of the instability of this biomolecule. The use of Magnetic Ionic Liquids (MILs) in sample preparation techniques is being investigated as a possible alternative for the extraction of these biomolecules, corresponding to less expensive procedures, with lower toxicity than some traditional protocols, and that requires significantly fewer steps to be performed. This study aimed at investigating the extraction capacity of the [P66614+ ][Ni(hfacac)3 - ] MIL, synthesized by our research group, for the capture of total RNA. In this case, aqueous samples containing mouse RNA previously isolated and diluted were used to obtain the concentration desired for the experiments. The analytical frequency was also enhanced by a customized platform for the extractions. The analysis was performed using reverse transcriptase – quantitative polymerase chain reaction (RT-qPCR). The results indicated that the MIL was able to extract RNA from aqueous solutions at concentrations as low as 3 ng/μL with reproductible results in 6 ng/μL concentrations. Preliminary results indicate that MIL does not inhibit PCR amplification and that long extraction times can result in back-extraction. This was the first study that proposed single drop microextraction (SDME) with MIL for the RNA extraction. Future studies are still needed to evaluate the extraction capacity of this MIL in the presence of interferents and in complex matrices.pt_BR
dc.description.sponsorshipCoordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) – Brasil; Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico (CNPq); Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado do Rio Grande do Sul (FAPERGS)pt_BR
dc.identifier.urihttps://repositorio.ufcspa.edu.br/handle/123456789/1993
dc.language.isopt_BRpt_BR
dc.relation.requiresTEXTO - Adobe Readerpt_BR
dc.rightsAcesso Aberto Imediatopt_BR
dc.rights.urihttp://creativecommons.org/licenses/by-nc-sa/3.0/br/*
dc.subjectPreparo de Amostraspt_BR
dc.subjectRNApt_BR
dc.subjectLíquidos Iônicos Magnéticospt_BR
dc.titleInvestigação de metodologias alternativas para extração de ácidos nucleicos: microextração em gota única de RNA utilizando um líquido iônico magnético como fase extratorapt_BR
dc.typeDissertaçãopt_BR
Arquivos
Pacote Original
Agora exibindo 1 - 1 de 1
Nenhuma Miniatura disponível
Nome:
[DISSERTAÇÃO] Alves, Mônica Silva (C).pdf
Tamanho:
2.31 MB
Formato:
Adobe Portable Document Format
Descrição:
Texto completo
Baixar
Coleções
PPGBIO - Dissertações