Investigação de metodologias alternativas para extração de ácidos nucleicos: microextração em gota única de RNA utilizando um líquido iônico magnético como fase extratora
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Data
2023
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Resumo
As técnicas de análise molecular para a determinação de ácidos nucleicos
vêm se destacando cada vez mais nos protocolos de pesquisa e diagnóstico. O
sucesso dessas técnicas se deve ao seu alto nível de sensibilidade e
especificidade que as tornam reprodutíveis e confiáveis. Ainda assim, para obter
um diagnóstico de qualidade é necessário realizar cuidadosamente o preparo
das amostras, incluindo a etapa da extração do analito. A extração de RNA é
particularmente delicada por se tratar de uma biomolécula muito instável. A
utilização de Líquidos Iônicos Magnéticos (MILs) em técnicas de preparo de
amostras está sendo investigada como possível alternativa para a extração
dessas biomoléculas, correspondendo a procedimentos de baixo custo, com
menor toxicidade que alguns protocolos tradicionais, e que requerem
significativamente menos etapas para realização. Este estudo teve por objetivo
investigar a capacidade de extração do MIL [P66614]
+
[Ni(hfacac)3]
-
, sintetizado
pelo grupo de pesquisa, na captura de RNA total. Para tanto, foram utilizadas
amostras aquosas contendo RNA já isolado obtido através do hipotálamo de
camundongos machos e posteriormente diluído a fim de obter a concentração
desejada para os experimentos. Além disso, foi utilizada uma plataforma de
extração para ampliar a frequência analítica. As medições analíticas foram
realizadas através da reação em cadeia da polimerase via transcriptase reversa
quantitativa (RT-qPCR). Os resultados indicam que o MIL foi capaz de extrair o
RNA de soluções com concentrações tão baixas quanto 3 ng/μL, apresentando
reprodutibilidade em 6 ng/μL. Resultados preliminares indicaram que o MIL não
inibiu a amplificação na PCR e que tempos longos de extração podem acarretar
back-extraction. Este foi o primeiro estudo a utilizar microextração em gota única
(SDME) com MIL na extração de RNA. Futuros estudos ainda são necessários
para avaliar a capacidade de extração desse MIL na presença de interferentes e
em matrizes complexas.
Descrição
Dissertação (Mestrado)-Programa de Pós-Graduação em Biociências, Fundação Universidade Federal de Ciências da Saúde de Porto Alegre.
Palavras-chave
Preparo de Amostras, RNA, Líquidos Iônicos Magnéticos