Avaliação da atividade antinociceptiva da neurotoxina recombinante CTK 01512-2 por administração subcutânea e no acuponto E36 em modelo de dor neuropática induzido por oxaliplatina em ratos Wistar

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dc.contributor.advisorDallegrave, Eliane
dc.contributor.advisor-coFerreira, Charles Francisco
dc.contributor.authorBritto, Fernanda Cristina de
dc.contributor.departmentPrograma de Pós-Graduação em Patologia
dc.date.accessioned2024-08-23T19:34:22Z
dc.date.available2024-08-23T19:34:22Z
dc.date.date-insert2024-08-23
dc.date.issued2024-06-07
dc.descriptionDissertação (Mestrado) - Programa de Pós-Graduação em Patologia, Fundação Universidade Federal de Ciências da Saúde de Porto Alegre.
dc.description.abstractIntrodução: Em roedores, a Oxaliplatina (OXA) induz hiperalgesia ao frio e alodínia mecânica, onde canais de cálcio tipo N (Cav2.2) e receptor de potencial transitório de anquirina 1 (TRPA1) são mais expressos, embora o mecanismo exato não tenha sido completamente elucidado. A neurotoxina recombinante CTK 01512-2 derivada da aranha Phoneutria nigriventer demonstrou bloqueio Cav2.2 afetando o influxo de Cálcio voltagem dependente (Ca2+) intracelular e agonização de TRPA1, apresentando-se como um peptídeo com ação analgésica/antinociceptiva promissor. Objetivos: Analisar a eficácia analgésica da neurotoxina recombinante CTK 01512-2, administrada por via subcutânea e no acuponto E36, em comparação com o tratamento padrão-outro (duloxetina) em um modelo de dor neuropática induzido por oxaliplatina em ratos Wistar. Material e Métodos: Foi utilizado um modelo de dor neuropática periférica induzida por dose única de OXA (6 mg/kg i.p.) em ratos Wistar machos com 60 dias, para realização de 3 ensaios avaliando efeitos do CTK 01512-2: perfil doseresposta da administração subcutânea (SC, N=30); perfil neuroquímico (N=32); eficácia da farmacopuntura (N=32). A via subcutânea do CTK 01512-2 foi testada (n=5/grupo) nas doses de 0,1; 0,2 e 0,4 mg/kg, e comparada com 30 mg/kg SC de Duloxetina (controle positivo). Testes de sensibilidade mecânica (Von Frey) e alodinia fria (acetona) foram realizados antes da indução da dor, três dias após, antes do tratamento e aos 15 e 30min, 1, 2, 3, 4, 5, 6 e 7h após. O perfil neuroquímico (GABA, dopamina, acetilcolina) do CTK 01512-2 foi avaliado (n=8/grupo) estruturas cerebrais (córtex, estriado, hipocampo, mesencéfalo, amígdala, hipotálamo), 5h após o tratamento com a dose de 0,2 mg/kg e comparado com a Duloxetina (30 mg/kg SC). Testes de Von Frey e de Acetona foram realizados antes da indução da dor, três dias após, antes do tratamento e aos 15 e 30min, 1, 2, 3, 4 e 5h após. A eficácia da farmacopuntura (acuponto E36) do CTK 01512-2 com 1/10 da dose (0,02 mg/kg) foi avaliada (n=8/grupo) e comparada com a Duloxetina com 1/10 da dose (3 mg/kg) pelos testes de Von Frey e de Acetona, realizados antes da indução da dor, três dias após, antes do tratamento e aos 15 e 30min, 1, 2, 3,4 e 5h após. Em todos os ensaios os grupos experimentais foram comparados com o grupo controle negativo (OXA+Salina) e controle sem dor (Salina+Salina). A eutanásia foi procedida por decaptação sob anestesia prévia com isofluorano. A quantificação simultânea dos neurotransmissores no encéfalo foi realizada através da técnica LC-MS/MS. Resultados: O perfil dose-resposta da administração subcutânea de CTK 05152-2 revelou que a dose mínima efetiva capaz de inibir alodinia mecânica e térmica no modelo de dor neuropática aguda induzida pela OXA foi de 0,2 mg/kg. A inibição da alodinia mecânica inicia em 30min e se mantém pronunciada por 3h, já alodinia ao frio, inicia em 15min e se mantém sustentada por 5h. O perfil neuroquímico sinaliza envolvimento na inibição de aferências do trato espinomesencefálico e de interneurônios inibitórios próprios do estriado, mediado pela Dopamina e GABA. Além disso, no modelo de analgesia por farmacopuntura, 1/10 da dose efetiva de CTK 0512-2 pela via subcutânea foi eficaz na alodínia mecânica e ao frio, quando administrada no acuponto E36, iniciando seu efeito em 15min (alodínia mecânica) ou 30min (alodínia ao frio) e mantendo-se por 5h em ambos. Conclusão: CTK 01512-2 mostrou eficácia equianalgésica em relação à duloxetina no modelo de dor neuropática induzido pela oxaliplatina por via subcutânea e no acuponto E36.
dc.description.abstract-enIntroduction: In rodents, Oxaliplatin (OXA) induces cold hyperalgesia and mechanical allodynia, where N-type calcium channels (Cav2.2) and the transient receptor potential ankyrin 1 (TRPA1) are more expressed, although the exact mechanism has not been completely elucidated. The recombinant neurotoxin CTK 01512-2 derived from the spider Phoneutria nigriventer has shown to block Cav2.2, affecting the influx of intracellular Calcium voltage dependent (Ca2+) and agonizing TRPA1, presenting itself as a peptide with promising analgesic/antinociceptive action. Aim of study: To analyze the analgesic efficacy of the recombinant neurotoxin CTK 01512-2, administered subcutaneously and at the acupuncture point E36, in comparison to the standard treatment (duloxetine) in a model of oxaliplatininduced neuropathic pain in Wistar rats. Materials and methods: A model of peripheral neuropathic pain induced by a single dose of OXA (6 mg/kg i.p.) was used in 60-day-old male Wistar rats to conduct 3 trials evaluating the effects of CTK 01512-2: dose-response profile of subcutaneous administration (SC, N=30); neurochemical profile (N=32); efficacy of pharmacopuncture (N=32). The subcutaneous route of CTK 01512-2 was tested (n=5/group) at doses of 0.1; 0.2, and 0.4 mg/kg, and compared with 30 mg/kg SC of Duloxetine (positive control). Mechanical sensitivity (Von Frey) and cold allodynia (acetone) tests were performed before pain induction, three days later, before treatment, and at 15 and 30 minutes, 1, 2, 3, 4, 5, 6, and 7 hours after. The neurochemical profile (GABA, dopamine, acetylcholine) of CTK 01512- 2 was evaluated (n=8/group) in brain structures (cortex, striatum, hippocampus, mesencephalon, amygdala, hypothalamus), 5 hours after treatment with a dose of 0.2 mg/kg and compared with Duloxetine (30 mg/kg SC). Von Frey and Acetone tests were conducted before pain induction, three days later, before treatment, and at 15 and 30 minutes, 1, 2, 3, 4, and hours after. The efficacy of pharmacopuncture (acupoint E36) of CTK 01512-2 with 1/10 of the dose (0.02 mg/kg) was evaluated (n=8/group) and compared with Duloxetine at 1/10 of the dose (3 mg/kg) by Von Frey and Acetone tests, performed before pain induction, three days later, before treatment, and at 15 and 30 minutes, 1, 2, 3, 4, and 5 hours after. In all trials, the experimental groups were compared with the negative control group (OXA-Saline) and the no-pain control (Saline-Saline). Euthanasia was carried out by decapitation under prior anesthesia with isoflurane. The simultaneous quantification of neurotransmitters in the brain was performed using LC-MS/MS technique. Results: The dose-response profile for the subcutaneous administration of CTK 05152-2 revealed that the minimum effective dose capable of inhibiting mechanical and thermal allodynia in the acute neuropathic pain model induced by OXA was 0.2 mg/kg. The inhibition of mechanical allodynia begins at 30 minutes and remains pronounced for 3 hours, while cold allodynia starts at 15 minutes and is sustained for 5 hours. The neurochemical profile indicates involvement in the inhibition of afferences of the spinomesencephalic tract and of intrinsic inhibitory interneurons of the striatum, mediated by Dopamine and GABA. Furthermore, in the pharmacopuncture analgesia model, 1/10 of the effective dose of CTK 0512-2 via subcutaneous route was effective in mechanical and cold allodynia when administered at the E36 acupoint, starting its effect at 15 minutes (mechanical allodynia) or 30 minutes (cold allodynia) and lasting for 5 hours in both. Conclusion: CTK 01512-2 demonstrated equianalgesic efficacy in comparison to duloxetine in the model of neuropathic pain induced by oxaliplatin via subcutaneous route and at the E36 acupoint.
dc.identifier.urihttps://repositorio.ufcspa.edu.br/handle/123456789/2929
dc.language.isopt_BR
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dc.rightsAttribution-NonCommercial-ShareAlike 3.0 Brazilen
dc.rights.urihttp://creativecommons.org/licenses/by-nc-sa/3.0/br/
dc.subjectCTK 01512–2
dc.subjectDor Neuropática
dc.subjectHiperalgesia
dc.subjectAnalgesia
dc.subjectAcupuntura
dc.subject[en] CTK 01512–2
dc.subject[en] Neuropathic Pain
dc.subject[en] Hyperalgesia
dc.subject[en] Analgesia
dc.subject[en] Acupuncture
dc.titleAvaliação da atividade antinociceptiva da neurotoxina recombinante CTK 01512-2 por administração subcutânea e no acuponto E36 em modelo de dor neuropática induzido por oxaliplatina em ratos Wistar
dc.typeDissertação
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