Validação da Técnica de Amplificação Isotérmica de DNA Mediada por Loop (LAMP) em Isolados de Candida spp. e Nakaseomyces glabrata
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Data
2023-08-29
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Resumo
A prevalência das doenças invasivas causadas por fungos oportunistas tem
aumentado nos últimos anos. Os fungos do gênero Candida são os principais
agentes etiológicos, estando associados a taxas de mortalidade de até 70%. O
diagnóstico da candidíase invasiva permanece difícil e demorado graças à utilização de métodos que exigem o isolamento do fungo em meio de cultura, impedindo o tratamento adequado no tempo certo. A técnica de LAMP se mostra uma alternativa promissora para o diagnóstico da infecção, por ser simples, rápida e de baixo custo. Este trabalho teve como objetivo investigar a viabilidade da utilização dessa metodologia na identificação de diferentes espécies de Candida e Nakaseomyces glabrata (Candida glabrata), analisando especificidade, sensibilidade e custoefetividade. Os isolados de Candida spp. e N. glabrata foram aquecidos a 65°C por 30 minutos com Chelex-100 para o isolamento do DNA e as reações de LAMP utilizaram primers com sequências-alvo nas regiões ITS2 e SAP1. A especificidade foi determinada pela inclusão de outras espécies de Candida e outros gêneros de fungos e a sensibilidade analítica foi estimada através de uma diluição em série de DNA. Foram realizados testes quanto ao desempenho da reação direto em matriz
biológica (sangue em garrafa de hemocultura e em tubo de EDTA). Ainda, foi
realizada a análise de custo-efetividade do LAMP, comparando o uso de kit
comercial e da técnica in house. Os resultados de especificidade e sensibilidade analítica foram 100% e 100pg/μL, respectivamente. A sensibilidade diagnóstica variou entre 75% e 100% conforme a espécie e o tempo de reação. O LAMP direto em matriz biológica atingiu resultados satisfatórios no sangue em EDTA. A análise de custo-efetividade demonstrou que o uso do kit comercial é mais vantajoso devido ao menor tempo de resultado, maior facilidade de execução e menor risco de contaminação, apesar de a técnica in house apresentar o menor custo. A técnica de LAMP apresentou resultados promissores de especificidade e sensibilidade e se
mostra um método com potencial para implementação em laboratórios pequenos e com poucos recursos.
Descrição
Dissertação (Mestrado)-Programa de Pós-Graduação em Biociências, Fundação Universidade Federal de Ciências da Saúde de Porto Alegre
Palavras-chave
Micologia, Diagnóstico laboratorial, Diagnóstico molecular, Candidíase, [en] Mycology, [en] Laboratory diagnosis, [en] Molecular diagnosi, [en] Candidiasis