Desenvolvimento de ensaios de PCR em tempo real para identificação de quatro subespécies do complexo Streptococcus bovis/Streptococcus equinus a partir de swab retal

Abstract

O complexo Streptococcus bovis/Streptococcus equinus (SBEC) abrange espécies patogênicas relacionadas em diferentes níveis com infecções em humanos. Este complexo de genoespécies tem sido associado a desordens hepatobiliares e mais notavelmente em adenomas de cólon e câncer colorretal (CCR). Portanto, o objetivo deste estudo foi desenvolver ensaios de PCR em tempo real (qPCR), utilizando o sistema TaqMan®-MGB e baseado nos genes recN e gyrB, para detecção de S. gallolyticus subsp. gallolyticus, S. gallolyticus subsp. pasteurianus, S. infantarius subsp. coli e S. infantarius subsp. infantarius, e quantificação de S. gallolyticus sp. a partir de amostras de swab retal de voluntários sob risco para doenças gastrintestinais. Estes ensaios foram testados em cinco isolados clínicos e 14 cepas referência de Streptococcus sp., Enterococcus sp. e Escherichia coli. Os cinco isolados clínicos e quatro cepas referência foram corretamente identificadas, nenhum falso-positivo foi observado entre as cepas de Streptococcus sp. filogeneticamente relacionadas, igualmente para as outras espécies testadas O ensaio quantitativo pode detectar valores acima de 30 cópias genômicas bacterianas. Foram incluídos no estudo 54 (H=19, média etária 64,6, entre 46-76 e M=35, média etária 57,9, entre 44-80, P=0,015) voluntários ambulatoriais e não colostomizados submetidos à colonoscopia. A prevalência geral das subespécies do SBEC esteve em 35,2%: S. gallolyticus subsp. gallolyticus (11,1%), S. gallolyticus subsp. pasteurianus (13%), S. infantarius subsp. coli (20,4%) e S. infantarius subsp. infantarius (11,1%). Nosso estudo demonstrou associações entre doença hemorroidária (P=0,047) e litíase biliar (P=0,023) com colonização por ao menos uma subespécie do SBEC. Litíase biliar também esteve relacionada com colonização por S. infantarius subsp. coli (P=0,021) e doença hepática crônica com colonização S. infantarius subsp. infantarius (P=0,002). Estes ensaios de qPCR estabelecem condições para detecção molecular das subespécies do SBEC bem como quantificar S. gallolyticus sp. a partir de amostras coletadas por swab retal e podem ser utilizados para triagem e vigilância em pacientes submetidos à colonoscopia.