Avaliação da toxicidade da bilirrubina e dos ácidos biliares em células renais cultivadas

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dc.contributor.advisorRotta, Liane Nanci
dc.contributor.advisor-coMoura, Dinara Jaqueline
dc.contributor.authorSilveira, Caroline Rodrigues da
dc.date.accessioned2021-06-11T13:36:22Z
dc.date.accessioned2023-10-09T14:00:02Z
dc.date.available2021-06-11T13:36:22Z
dc.date.available2023-10-09T14:00:02Z
dc.date.date-insert2021-06-11
dc.date.issued2021
dc.descriptionDissertação (Mestrado)-Programa de Pós-Graduação em Ciências da Saúde, Fundação Universidade Federal de Ciências da Saúde de Porto Alegre.pt_BR
dc.description.abstractContextualização: A síndrome hepatorrenal é definida pela presença de lesão renal aguda secundária à lesão hepática. Novos insights sugerem que fatores tubulotóxicos não hemodinâmicos, como endotoxinas (bilirrubina) e ácidos biliares (ABs), podem mediar a lesão renal do parênquima. Em geral, a presença de um maior número de partículas urinárias (células epiteliais tubulares renais e cilindros granulares) de origem renal pode ser observada nos grupos com hiperbilirrubinemia/hiperbilirrubinúria e lesão tubular. Já se sabe também da nefrotoxicidade que alguns fármacos podem apresentar, como a cisplatina que é utilizada contra turmores sólidos, porém pode induzir à injúria nos túbulos renais. Objetivo: Avaliar a citotoxicidade e o potencial antioxidante da bilirrubina e ABs em cultura de células renais HEK293T, o tipo de morte celular e o potencial protetor desses compostos frente a outros compostos nefrotóxicos. Metodologia: A viabilidade celular foi medida pelo ensaio de vermelho neutro, o estresse oxidativo foi analisado por meio da marcação mitocondrial com mitosox e mitostatus, o tipo de morte celular foi avaliado utilizando a marcação com anexina e iodeto de propídio e a concentração do tratamento intracelular e no meio de cultura de bilirrubina e ABs foi determinada por HPLC. Resultados: O tratamento agudo (24h) com bilirrubina reduziu a viabilidade celular, mas apresentou maior viabilidade com 100 µM (96 ± 8%, p <0,0001) e apresentou maior toxicidade no tratamento crônico (72h) com 100 µM (25,6 ± 5,6; p <0,001). ABs primários (ácido cólico - CA e quenodeoxicólico - CDCA) induzem menor toxicidade a 40 µM (CA: 150 ± 33,7%, p <0,005 CDCA: 281 ± 143%, p <0,0001) em comparação com ABs secundários e compostos (ácido desoxicólico - DCA, ursodeoxicólico - UDCA e taurocólico - TCA) a 60 µM (DCA: 87 ± 8%, p <0,001; UDCA 86 ± 8%, p <0,001; TCA 95 ± 23%, p <0,001), em 24h. Já nas concentrações maiores, 80 µM e 100 µM, os ácidos não mostraram diminuir a viabilidade celular. O tratamento celular com bilirrubina ou ABs, prévio à cisplatina (10µg), induziu aumento da viabilidade celular com CA (133 ± 62%; p <0,005), em relação ao controle positivo, indicando efeito protetor; no entanto, as células tratadas com os outros ABs e bilirrubina também mostraram viabilidade positiva (CDCA: 110 ± 61%, p = 0,01; TDCA: 99 ± 63%, p <0,005; BILI: 88 ± 27 %, p <0,005). Quando quantificados por HPLC, bilirrubina e ABs apresentaram maior concentração no meio de cultura do que nas células (tratamento 24h). Nem a bilirrubina nem os ABs mostraram produção de estresse oxidativo, em comparação ao controle positivo (células tratadas com cisplatina). O tratamento celular com bilirrubina apresentou maior quantidade de morte celular por necrose (83 ± 3%; p <0,05), enquanto os ácidos biliares não demonstraram grande morte celular significante. Conclusão: a bilirrubina mostrou maior ação tóxica em células HEK293T, quando comparada aos ABs. A morte celular por necrose é um fator que contribui para o desenvolvimento de lesão renal aguda em doenças hepáticas, principalmente na exposição crônica a este composto e se relaciona aos achados observados no sedimento urinário, em estudos prévios. Dependendo da estrutura dos ABs, eles podem ter ação protetora sobre as células renais, assim como a concentração de bilirrubina, que nos tratamentos agudos tem se mostrado protetora para as células e no tratamento crônico, mostrou-se tóxica.pt_BR
dc.description.abstract-enBackground: Hepatorenal syndrome is defined by the presence of acute kidney damage secondary to liver damage. New insights suggest that non-hemodynamic tubulotoxic factors, such as endotoxins (bilirubin) and bile acids (ABs), can mediate renal injury to the parenchyma. In general, the presence of a greater number of urinary particles (renal tubular epithelial cells and granular cylinders) of renal origin can be observed in groups with hyperbilirubinemia / hyperbilirubinuria and tubular injury. It is also already known of the nephrotoxicity that some drugs can present, such as cisplatin, which is used against solid tumors, but can induce damage to the renal tubules. Objective: To evaluate the cytotoxicity and antioxidant potential of bilirubin and ABs in HEK293T renal cell culture, the type of cell death and the protective potential of these compounds against other nephrotoxic compounds. Methodology: cell viability was measured by neutral red, oxidative stress by mitosox and mitostatus assays, the type of cell death was acessed by annexin and propidium iodide and the cell and medium concentration of bilirubin and BAs was mesured by HPLC. Results: Acute treatment (24h) with bilirubin reduced the cell viability but showed greater viability at 100 µM (96±8%, p<0.0001) between the studied concentration and showed a greater toxicity in chronic treatment (72h) at 100 µM (25.6±5,6; p<0.001). Primary BAs (cholic and chenodeoxycholic acid) have less toxicity at 40 µM (CA: 150±33.7%, p<0.005 CDCA: 281±143%, p<0,0001) and compared with secondary and compound BAs (deoxycholic, ursodeoxycholic and taurocholic acid) at 60 µM (DCA: 87±8%, p<0.001; UDCA: 86±8%, p<0.001; TCA: 95±23%, p<0.001), in 24h. At higher concentrations, 80 µM and 100 µM, acids did shown to decrease cell viability. The cell treatment with bilirubin or BAs, previous to the cisplatin (10µg), shows greater cell viability with cholic acid (133±62%; p<0,005), compared to positive control, indicating a protective effect; however the treated cells with the other BAs and bilirubin also showed positive viability (CDCA: 110±61%, p=0,01; TDCA: 99±63%, p<0,005; BILI: 88±27%, p<0,005). When quantified in chromatography, bilirubin and BAs presented more concentration in the culture medium, than in the cells (24h treatment). Neither bilirubin nor BAs showed oxidative stress production, compared to positive control (cells treated with cisplatin). The cell treatment with bilirubin showed a greater amount of cell death due to necrosis (83±3%; p<0.05), while bile acids did not show significant significant cell death. Conclusion: bilirubin shows more toxic action on HEK293T cells, than BAs. The cell death by necrosis is a factor that contribute to AKI development in liver diseases, specially in chronic exposition to this compound and it is related to the findings observed in urinary sediment, in previous studies. Depending on the structure of BAs they can have a protective action on renal cells, as well as the concentration of bilirubin, which in acute treatments has shown to have a protective role for cells and in chronic treatment, it showed to be toxic.pt_BR
dc.identifier.urihttps://repositorio.ufcspa.edu.br/handle/123456789/1632
dc.language.isopt_BRpt_BR
dc.publisherWagner Wessfllpt_BR
dc.relation.requiresTEXTO - Adobe Readerpt_BR
dc.rightsAcesso Aberto Imediato pt_BR
dc.rights.urihttp://creativecommons.org/licenses/by-nc-sa/4.0/*
dc.subjectSíndrome Hepatorrenalpt_BR
dc.subjectToxicidadept_BR
dc.subjectBilirrubinapt_BR
dc.subjectÁcidos e Sais Biliarespt_BR
dc.subject[en] Hepatorenal Syndromeen
dc.subject[en] Toxicityen
dc.subject[en] Bilirubinen
dc.subject[en] Bile Acids and Saltsen
dc.titleAvaliação da toxicidade da bilirrubina e dos ácidos biliares em células renais cultivadaspt_BR
dc.typeDissertaçãopt_BR
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