Padronização de ensaio qPCR em tempo real para identificação de Streptococcus pneumoniae em derrame pleural
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Data
2014
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Resumo
Streptococcus pneumoniae é importante patógeno oportunista humano de pneumonias e meningites, sendo também colonizador da mucosa da nasofaringe. A colonização ocorre principalmente em crianças e se eleva novamente em idosos. A evolução do estado portador para infecção depende da associação de elementos do patógeno e hospedeiro. Vacinas direcionadas para polissacarídeos capsulares são empregadas em grupos de risco, com importante redução no impacto das doenças pneumocócica. Contudo, são relatadas elevações no número de casos complicados em crianças pós era vacinal, e estes frequentemente estão associados com identificação negativa pelos métodos tradicionais de cultura. O objetivo deste trabalho é padronizar ensaios para identificação de S. pneumoniae através de métodos independentes de cultura, e caracterização de isolados invasivos por meio de análise do gene zmpB. Líquidos pleurais negativos por cultura de 37 crianças com derrames parapneumônicos foram submetidos à pesquisa por qPCR para lytA e pesquisa de antígeno C por teste imunocromatográfico. Em 30/37 (81%) e 24/38 (63%) dos líquidos foram obtidos resultados positivos por qPCR e pesquisa de antígeno, respectivamente. A maioria das incongruências entre os testes foram resultados positivos por qPCR e teste de antígeno negativo em amostras com baixas cargas de DNA bacteriano, indicando uma relação imperfeita entre os dois métodos. A análise do gene zmpB foi conduzida por amplificação e sequenciamento parcial do gene em isolados de meningites, os quais apresentaram elevada identidade entre si (>97%) e com a cepa TIGR4. Os isolados pertenciam aos sorotipos 7F (n=2), 14 (n=2), 9V (n=1), 12F (n=1), 20 (n=1), 23F (n=1), e 34 (n=1), e um ao sorotipo 20 com baixa identidade (84%). Estes dados indicam uma baixa diversidade da sequência analisada entre pneumococos obtidos de meningites. Nossos resultados confirmam a participação do S. pneumoniae como principal causa de derrames parapneumônicos em crianças e sugere a utilização cautelosa de ferramentas independentes de cultura. Foi também caracterizada a presença de um potencial fator de virulência bacteriano em condições de infecções pneumocócicas invasivas.
Descrição
Tese (Doutorado)-Programa de Pós-Graduação em Ciências da Saúde, Fundação Universidade Federal de Ciências da Saúde de Porto Alegre.
Palavras-chave
Streptococcus pneumoniae, Pneumonia, Reação em Cadeia da Polimerase em Tempo Real, Derrame Pleural, Meningite, Antígeno C, Gene ZmpB, [en] Real-Time Polymerase Chain Reaction, [en] Pleural Effusion, [en] Meningitis