Desenvolvimento de um método para extrair DNA total de amostras biológicas empregando uma substância caotrópica e vidro reciclado como fonte de sílica

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dc.contributor.advisorFrazzon, Ana Paula Guedes
dc.contributor.advisor-coAguirre, Tanira Alessandra Silveira
dc.contributor.authorNaranjo, Cesar David Guerra
dc.date.accessioned2022-05-04T14:05:32Z
dc.date.accessioned2023-10-09T13:21:44Z
dc.date.available2022-05-04T14:05:32Z
dc.date.available2023-10-09T13:21:44Z
dc.date.date-insert2022-05-04
dc.date.issued2021
dc.descriptionDissertação (Mestrado)-Programa de Pós-Graduação em Biociências, Fundação Universidade Federal de Ciências da Saúde de Porto Alegre.pt_BR
dc.description.abstractAs relações funcionais e interacionais entre ácidos nucléicos e proteínas são o arcabouço estrutural para estudos de biologia molecular. Nesse contexto, a obtenção de um material genético de alta qualidade é uma etapa crítica para aplicações downstream. Diante disso, desenvolvemos um método de extração para obtenção de DNA de alta qualidade de forma segura, ecológica e aplicável para diversos tipos de amostras biológicas. Para isso, três tipos diferentes de vidro reciclado de laboratório à base de borosilicato foram usados como fonte de sílica e iodeto de sódio como sal caotrópico, que se tornou uma ferramenta poderosa para lise celular e extração de DNA. Este método foi usado para extrair o DNA de diferentes amostras biológicas, incluindo amostras fecais e culturas de bactérias e fungos. Todas as amostras também foram analisadas com um kit comercial para comparação dos resultados. O controle de qualidade dos DNAs extraídos baseou-se na quantificação da concentração e pureza por espectrofotometria, e a integridade foi determinada por eletroforese em gel de agarose. Adicionalmente, os DNAs extraídos foram submetidos à amplificação da Reação em Cadeia da Polimerase (PCR), para verificação da viabilidade para processos downstream. Os resultados mostraram que nosso método apresentou maior pureza e integridade total dos DNAs extraídos em comparação ao kit comercial, e o rendimento não foi estatisticamente diferente. Finalmente, o novo método de extração de DNA pode ser reproduzível e aplicável em um processo posterior como PCR.pt_BR
dc.description.abstract-enThe functional and interactional relationships between nucleic acids and proteins are the structural scaffold for molecular biology studies. In this context, obtaining a high-quality genetic material is a critical step for downstream applications. Given that, we developed an extraction method to obtain high quality DNA safely, environmentally friendly, and applicable to diverse types of biological samples. For that, three different types of borosilicate-based recycled laboratory glass were used as a source of silica and sodium iodide as a chaotropic salt, which became a powerful tool for cell lysis and DNA extraction. This novel method was used for DNA extraction from different biological samples, including fecal samples and bacterial and fungal cultures. All samples were also analyzed with a commercial kit for comparison of results. The quality control of the extracted DNAs was based on the concentration and purity by spectrophotometry, and the integrity was determined by agarose gel electrophoresis. Additionally, the extracted DNAs were submitted to Polymerase Chain Reaction (PCR) amplification, for verifying the viability for downstream processes. The results showed that our method had a higher purity and full integrity of the extracted DNAs comparing to the commercial kit, and the yield was not statistically different. Finally, the novel DNA extraction method can be reproducible and applicable in a downstream process such as PCR.pt_BR
dc.identifier.urihttps://repositorio.ufcspa.edu.br/handle/123456789/1818
dc.language.isopt_BRpt_BR
dc.publisherWagner Wessfllpt_BR
dc.relation.requiresTEXTO - Adobe Readerpt_BR
dc.rightsAcesso Embargado pt_BR
dc.rights.urihttp://creativecommons.org/licenses/by-nc-sa/4.0/*
dc.subjectExtração de DNApt_BR
dc.subjectSal Caotrópicapt_BR
dc.subjectSílicapt_BR
dc.subjectPCRpt_BR
dc.titleDesenvolvimento de um método para extrair DNA total de amostras biológicas empregando uma substância caotrópica e vidro reciclado como fonte de sílicapt_BR
dc.typeDissertaçãopt_BR
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