Desenvolvimento de um método para extrair DNA total de amostras biológicas empregando uma substância caotrópica e vidro reciclado como fonte de sílica
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Data
2021
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Editor
Wagner Wessfll
Resumo
As relações funcionais e interacionais entre ácidos nucléicos e proteínas
são o arcabouço estrutural para estudos de biologia molecular. Nesse contexto,
a obtenção de um material genético de alta qualidade é uma etapa crítica para
aplicações downstream. Diante disso, desenvolvemos um método de extração
para obtenção de DNA de alta qualidade de forma segura, ecológica e aplicável
para diversos tipos de amostras biológicas. Para isso, três tipos diferentes de
vidro reciclado de laboratório à base de borosilicato foram usados como fonte de
sílica e iodeto de sódio como sal caotrópico, que se tornou uma ferramenta
poderosa para lise celular e extração de DNA. Este método foi usado para extrair
o DNA de diferentes amostras biológicas, incluindo amostras fecais e culturas
de bactérias e fungos. Todas as amostras também foram analisadas com um kit
comercial para comparação dos resultados. O controle de qualidade dos DNAs
extraídos baseou-se na quantificação da concentração e pureza por
espectrofotometria, e a integridade foi determinada por eletroforese em gel de
agarose. Adicionalmente, os DNAs extraídos foram submetidos à amplificação
da Reação em Cadeia da Polimerase (PCR), para verificação da viabilidade para
processos downstream. Os resultados mostraram que nosso método apresentou
maior pureza e integridade total dos DNAs extraídos em comparação ao kit
comercial, e o rendimento não foi estatisticamente diferente. Finalmente, o novo
método de extração de DNA pode ser reproduzível e aplicável em um processo
posterior como PCR.
Descrição
Dissertação (Mestrado)-Programa de Pós-Graduação em Biociências, Fundação Universidade Federal de Ciências da Saúde de Porto Alegre.
Palavras-chave
Extração de DNA, Sal Caotrópica, Sílica, PCR