O impacto do biofilme no perfil de susceptibilidade aos antibióticos e a caracterização dos principais determinantes de sua resistência em Staphylococcus spp
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Data
2013
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Resumo
Staphylococcus são microrganismos comensais e habitantes da pele humana que emergiram de maneira oportunista, principalmente em infecções associadas à formação de biofilme. O biofilme é uma comunidade de bactérias vivendo em organizadas estruturas e sua presença em infecções crônicas está associada a sua resistência contra antibióticos utilizados para tratamento destas infecções. Essa resistência pode ocorrer principalmente devido à fisiologia e estrutura do próprio biofilme. Este estudo foi desenvolvido com métodos fenotípicos para avaliar a formação de biofilme em Staphylococcus spp, e com a utilização de ferramentas moleculares para avaliar a expressão de genes associados à formação e regulação destes biofilmes. Em ambos os casos, as avaliações se basearam em biofilmes expostos ou não a antibióticos. Foram selecionados isolados de Staphylococcus de pacientes internados no Complexo Hospitalar Irmandade Santa Casa de Misericórdia de Porto Alegre, com bacteremia verdadeira (invasivos) ou colonização de cateter (colonizantes). Dentre 104 Staphylococcus spp, 74 foram invasivos e 89% formaram biofilme, enquanto que 30 eram colonizantes de cateteres e 64% formaram biofilme (p<0,05). Biofilmes maduros de cinco S. aureus resistentes à meticilina foram expostos à vancomicina e rifampicina, e a concentração mínima para erradicar o biofilme foi 64-32.000 e 32-512 vezes maior que para células planctônicas, respectivamente. S. aureus susceptíveis à meticilina foram testados da mesma forma, expostos à vancomicina, eritromicina, oxacilina, gentamicina, rifampicina e tigeciclina. As melhores atividades foram encontradas para vancomicina e tigeciclina, comparado com os demais antibióticos (p<0,05). Dentre S. epidermidis formadores de biofilme, 27 foram submetidos aos mesmos testes citados acima, para diferentes antibióticos incluindo linezolida, que apresentou a melhor atividade (p<0,05). Finalmente, para avaliar a expressão de genes envolvidos na formação e regulação do biofilme, foi utilizada a cepa S. epidermidis RP62A produtora de biofilme e a técnica de qPCR. Houve um aumento de expressão dos genes icaA, atlE e aap após exposição à linezolida, enquanto que não houve alteração para vancomicina. Frente aos resultados, é provável que tigeciclina e linezolida possam atuar de forma mais efetiva contra biofilmes maduros formados por Staphylococcus spp, apesar da erradicação não ter sido evidenciada em isolados clínicos, neste estudo.
Descrição
Tese (Doutorado)-Programa de Pós-Graduação em Ciências da Saúde, Fundação Universidade Federal de Ciências da Saúde de Porto Alegre.
Palavras-chave
Staphylococcus, Biofilmes, Resistência à Doença, Expressão Gênica, [en] Biofilms, [en] Disease Resistance, [en] Gene Expression