Avaliação molecular de nódulos de Tireoide

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dc.contributor.advisorMattevi, Vanessa Suñépt_BR
dc.contributor.advisor-coGolbert, Lenarapt_BR
dc.contributor.authorMolina, Freddy David Mopositapt_BR
dc.contributor.departmentPrograma de Pós-Graduação em Biociênciaspt_BR
dc.date.accessioned2025-04-15T21:19:52Z
dc.date.available2025-04-15T21:19:52Z
dc.date.date-insert2025-04-15
dc.date.issued2024-08-30
dc.descriptionDissertação (Mestrado)-Programa de Pós-Graduação em Biociências, Fundação Universidade Federal de Ciências da Saúde de Porto Alegre.pt_BR
dc.description.abstractApesar de sua alta prevalência e natureza benigna na maioria dos casos, a investigação dos nódulos da tireoide ainda apresenta potenciais armadilhas diagnósticas, especialmente em casos com citologia indeterminada. Este estudo visa verificar a prevalência de mutações nos genes BRAF, RAS e rearranjos RET/PTC em pacientes submetidos à punção aspirativa por agulha fina por ultrassonografia (PAAF-US) para nódulos tireoidianos. A extração de DNA e RNA total foi realizada com Trizol, seguida da avaliação da proporção de células epiteliais tireoidianas através da expressão do gene de citoqueratina 7. As mutações pontuais foram detectadas por análise de DNA utilizando sequenciamento de Sanger. Para os rearranjos, se desenharam primers para flanquear o ponto de fusão, e os produtos de PCR das fusões gênicas se visualizaram através de eletroforese em gel de agarose. Os resultados positivos foram confirmados por sequenciamento de Sanger dos produtos de PCR. Um total de 231 nódulos tireoidianos em 220 pacientes foram avaliados, sendo 86.8% do sexo feminino e com uma idade média de 55.6±13.9 anos. A distribuição citológica foi a seguinte: 4.8% (n = 11) não diagnósticos (Bethesda I); 61.0% (n=141) benignos (Bethesda II); 13.9% (n=32) atipias de significado indeterminado (AUS) (Bethesda III); 12.1% (n=28) neoplasia folicular (FN) (Bethesda IV); 4.3% (n=10) suspeitos de malignidade (Bethesda V); e 3.9% (n=9) malignos (Bethesda VI). Para a análise molecular, foram incluídas amostras que continham quantidade suficiente de ácidos nucleicos e uma proporção de células epiteliais superior a 10%. Portanto, foram obtidos DNA e RNA de qualidade de 200 amostras. As mutações BRAF, RAS e rearranjos RET/PTC foram identificadas em 14% das 200 amostras. A frequência das mutações BRAF-like foi de 5.5%, detectadas em 9 dos 17 nódulos malignos (52.9%) e em um nódulo benigno (0.7%). Quatorze mutações do tipo RAS-like foram identificadas em nódulos benignos (57.1% HRAS, 21.5% NRAS e 21.5% KRAS) e apenas uma estava presente em um nódulo maligno (5.9%). Quando consideramos os nódulos com citologia indeterminada (Bethesda III e IV, n = 53), 9 mutações foram detectadas, 6 associadas à histologia benigna (todas RAS-like), 1 com histologia maligna (BRAF-like) e 2 ainda não operados, portanto, sem diagnóstico histopatológico. Esta pesquisa conclui que a presença da mutação BRAF V600E pode ser útil para apoiar o diagnóstico de câncer de tireoide, devido ao seu alto valor preditivo positivo, uma vez que 89% dos nódulos com mutação BRAF V600E eram malignos. Além disso, critérios clínicos devem ser estabelecidos para determinar quais nódulos com mutações do tipo RAS-like requerem acompanhamento mais próximo, particularmente aqueles com citologia indeterminada.pt_BR
dc.description.abstract-enDespite its high prevalence and benign nature in most cases, the investigation of thyroid nodules still presents potential diagnostic pitfalls, especially in cases with indeterminate cytology. This study aims to verify the prevalence of mutations in the BRAF, RAS genes, and RET/PTC rearrangements in patients undergoing fine-needle aspiration biopsy guided by ultrasound (FNAB-US) for thyroid nodules. DNA and total RNA extraction was performed using Trizol, followed by the assessment of thyroid epithelial cell proportion through the expression of the cytokeratin 7 gene. Point mutations were detected by DNA analysis using Sanger sequencing. For rearrangements, primers were designed to flank the fusion point, and PCR products of gene fusions were visualized through agarose gel electrophoresis. Positive results were confirmed by Sanger sequencing of the PCR products. A total of 231 thyroid nodules in 220 patients were evaluated, with 86.8% being female, with a mean age of 55.6 ± 13.9 years. The cytological distribution was as follows: 4.8% (n = 11) non-diagnostic (Bethesda I); 61.0% (n=141) benign (Bethesda II); 13.9% (n=32) atypia of undetermined significance (AUS) (Bethesda III); 12.1% (n=28) follicular neoplasia (FN) (Bethesda IV); 4.3% (n=10) suspicious for malignancy (Bethesda V); and 3.9% (n=9) malignant (Bethesda VI). For molecular analysis, samples containing sufficient nucleic acids and a proportion of epithelial cells greater than 10% were included. Therefore, quality DNA and RNA were obtained from 200 samples. BRAF, RAS mutations, and RET/PTC rearrangements were identified in 14% of the 200 samples. The frequency of BRAF-like mutations was 5.5%, detected in 9 of the 17 malignant nodules (52.9%) and in one benign nodule (0.7%). Fourteen RAS-like mutations were identified in benign nodules (57.1% HRAS, 21.5% NRAS, and 21.5% KRAS), with only one present in a malignant nodule (5.9%). When considering nodules with indeterminate cytology (Bethesda III and IV, n = 53), 9 mutations were detected: 6 associated with benign histology (all RAS-like), 1 with malignant histology (BRAF-like), and 2 that were still unoperated, thus lacking histopathological diagnosis. This research concludes that the presence of the BRAF V600E mutation may be useful in supporting the diagnosis of thyroid cancer due to its high positive predictive value, as 89% of nodules with the BRAF V600E mutation were malignant. Furthermore, clinical criteria should be established to determine which nodules with RAS-like mutations require closer monitoring, particularly those with indeterminate cytology.en
dc.identifier.urihttps://repositorio.ufcspa.edu.br/handle/123456789/3279
dc.language.isopt_BRpt_BR
dc.relation.requiresTEXTO - Adobe Readerpt_BR
dc.rightsAcesso Aberto Imediatopt_BR
dc.rights.urihttp://creativecommons.org/licenses/by-nc-sa/3.0/br/
dc.subjectNódulo da Glândula Tireoidept_BR
dc.subjectMutaçãopt_BR
dc.subjectNeoplasias da Glândula Tireoidept_BR
dc.subjectNódulos Indeterminadospt_BR
dc.subjectTécnicas de Diagnóstico Molecularpt_BR
dc.subject[en] Thyroid Noduleen
dc.subject[en] Mutationen
dc.subject[en] Thyroid Neoplasmsen
dc.subject[en] Indeterminate Nodulesen
dc.subject[en] Molecular Diagnostic Techniquesen
dc.titleAvaliação molecular de nódulos de Tireoidept_BR
dc.typeDissertaçãopt_BR
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