Participação do sistema imune-inflamatório na progressão do câncer colorretal: análise do impacto da obesidade e da sinalização purinérgica

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dc.contributor.advisorBraganhol, Elizandrapt_BR
dc.contributor.advisor-coKalil, Antonio Nocchipt_BR
dc.contributor.authorRoliano, Gabriela Gonçalvespt_BR
dc.date.accessioned2023-02-16T12:21:43Z
dc.date.accessioned2023-10-09T14:00:20Z
dc.date.available2023-02-16T12:21:43Z
dc.date.available2023-10-09T14:00:20Z
dc.date.date-insert2023-02-16
dc.date.issued2021
dc.descriptionDissertação (Mestrado)-Programa de Pós-Graduação em Ciências da Saúde, Fundação Universidade Federal de Ciências da Saúde de Porto Alegre.pt_BR
dc.description.abstractO câncer colorretal (CCR) é um problema de saúde mundial, com alta taxa de mortalidade quando alcança o grau metastático. Quando associado à obesidade o risco é aumentado, devido a alteração imunológica sofrida pelo organismo. Estudos indicam que a participação de um microambiente inflamatório, composto por células imunes e seus produtos de secreção, é essencial para a progressão tumoral. Dando ênfase à imunidade inata, macrófagos associados ao tumor (TAM) frequentemente apresentam uma polarização do tipo-M2 (predominantemente imunossupressora), a qual pode desempenhar importantes funções de promoção tumoral. Umas das vias alteradas nas células imunes durante a modificação gerada pelo microambiente tumoral é o sistema de sinalização purinérgico. O objetivo do presente trabalho foi investigar a participação do sistema imune/inflamatório na progressão do câncer colorretal. Para tanto, primeiro foi realizada uma revisão da literatura buscando concentrar os dados sobre sinalização purinérgica no câncer colorretal publicados até o momento. Segundo, em experimentos in vitro, as linhagens Caco-2 e HCT116, foram cultivadas com o soro dos grupos: obesos e não-obeso e parametros de viabilidade, migração, proliferação e adesão celular. Além disso, a secreção das citocinas IL-6, IL- 10 e TNF-α foram analisadas no soro e no sobrenadantes das linhagens celulares. Em terceiro, foram realizadas culturas primárias de macrófagos humanos obtidos a partir da diferenciação de monócitos circulantes. Tais culturas foram co-cultivadas diretamente com células de linhagem de CCR humano (HCT116) ou tratadas com o meio condicionado. A avaliação dos fenótipos M1/M2 dos macrófagos foi realizada por citometria de fluxo para os marcadores CD204, CD163 e HLA-DR ou por CBA para TNF, IL-1β, IL-6, IL-10 e IL-8; espécies reativas de oxigênio e a produção de óxido nítrico, assim como morte celular por necrose, proliferação e potencial de membrana também foram avaliados. Em suma, os principais resultados foram: o aumento da expressão da enzima CD73 e dos receptores P1 (A1, A2A, A2B) leva a progressão tumoral no CCR; os receptores da família P2 (P2X e P2Y) e os níveis de ATP apresentaram resultados contraditórios, com efeitos tanto pró- quanto anti-tumoral. Citocinas pró-inflamatórias (TNF-α e IL-6) foram mais elevadas no grupo obeso, no soro e no sobrenadante das linhagens celulares de CCR. Os macrófagos que foram co-cultivados com células tumorais apresentaram perfil de liberação de citocinas mesclado, aumento de proliferação, diminuição de ROS e aumento da expressão de CD206 e CD163, sinais característicos de um fenótipo pró-tumoral. Como conclusão, a participação do sistema purinérgico, o estado de inflamação causado pela obesidade e a adaptação dos macrófagos a células tumorais foram elementos auxiliares para o desenvolvimento/progressão tumoral.pt_BR
dc.description.abstract-enColorectal cancer is a worldwide health problem, with a high mortality rate when it reaches the metastatic level. When associated with obesity, the risk is increased, due to the immunological alteration suffered by the body. Studies indicate that the participation of an inflammatory microenvironment, composed of immune cells and their secretion products, is essential for tumor progression. Emphasizing innate immunity, tumor-associated macrophages (TAM) often display an M2-type polarization (predominantly immunosuppressive), which can play important tumor-promoting functions. One of the altered pathways in immune cells during the modification generated by the tumor microenvironment is the purinergic signaling system. The present work aimed to investigate the participation of the immune/inflammatory system in the progression of colorectal cancer. To do so, first, a literature review was carried out, seeking to concentrate the data on purinergic signaling in colorectal cancer published so far. Second, in a block of experiments, the Caco-2 and HCT116 strains were cultivated with the serum of the groups: obese and non-obese, evaluated on viability, migration, proliferation, and adhesion; the cytokines IL-6, IL-10, and TNF-α were analyzed in serum and cell culture supernatants after exposure to serum. Third, in another block of experiments, primary cultures of human macrophages obtained from the differentiation of circulating monocytes were performed. Such cultures were co-cultured with human CCR lineage cells (HCT116) or cultured with a conditioned medium of the same lineage. The evaluation of M1/M2 phenotypes of macrophages was performed by flow cytometry (FACS) for the markers CD204, CD163, and HLA- DR or by CBA for the markers TNF, IL-1β, IL-6, IL-10, and IL- 8; reactive oxygen species and nitric oxide production, as well as cell death by necrosis, proliferation and membrane potential were also evaluated. In summary, the main results were: increased expression of the CD73 enzyme and P1 receptors (A1, A2A, A2B) leads to tumor progression in RCC; P2 family receptors (P2X and P2Y) and ATP levels presented contradictory results, with both pro- and anti-tumor effects. Pro-inflammatory cytokines (TNF-α and IL-6) were higher in the obese group, in serum, and the supernatant of CCR cell lines, after cell exposure, as well as in the group with the highest cell adhesion. Macrophages that were co-cultured with tumor cells showed a mixed cytokine release profile, increased proliferation, decreased ROS (promotes angiogenesis), and increased labeling for CD206 and CD163, characteristic signs of TAM. In conclusion, the participation of the purinergic system, the state of inflammation caused by obesity and the adaptation of macrophages to tumor cells were auxiliary elements for tumor development/progression.pt_BR
dc.description.sponsorshipCoordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) – Brasil; Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico (CNPq); Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado do Rio Grande do Sul (FAPERGS)pt_BR
dc.identifier.urihttps://repositorio.ufcspa.edu.br/handle/123456789/2028
dc.language.isopt_BRpt_BR
dc.relation.requiresTEXTO - Adobe Readerpt_BR
dc.rightsAcesso Aberto Após Período de Embargopt_BR
dc.rights.urihttp://creativecommons.org/licenses/by-nc-sa/3.0/br/*
dc.subjectCâncer Colorretalpt_BR
dc.subjectObesidadept_BR
dc.subjectMacrófagos Associados ao Tumorpt_BR
dc.subjectSistema Purinérgicopt_BR
dc.subject[en] Neoplasias Colorretaisen
dc.subject[en] Obesityen
dc.titleParticipação do sistema imune-inflamatório na progressão do câncer colorretal: análise do impacto da obesidade e da sinalização purinérgicapt_BR
dc.typeDissertaçãopt_BR
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