Papel da proteína Pso2 na resposta a danos no DNA do tipo ICL em Saccharomyces cerevisiae
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Data
2021
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Editor
Wagner Wessfll
Resumo
As pontes intercadeias (interstrand crosslink, ICL) entre compostos e DNA são lesões
bastante citotóxicas que afetam os processos de replicação e transcrição da molécula de
DNA.. A cisplatina (CIS), um antineoplásico, é um agente bifuncional que se liga
covalentemente às bases do DNA podendo formar ICLs. A proteína Pso2 foi identificada
inicialmente em Saccharomyces. cerevisiae e demonstrou estar envolvida na reparação de
danos induzidos por agentes bifuncionais, executando função de exonuclease e
endonuclease. O complexo MRX (Mre11, Rad50 e Xrs2) está envolvido na resposta a
danos no DNA e uma das funções bioquímicas desse complexo é a capacidade de realizar
incisões no esqueleto fosfodiéster do DNA com sua atividade endonucleásica. As cepas
mutantes do gene KIN3 são sensíveis a diferentes agentes indutores de dano ao DNA e as
proteínas Kin3 e MRX interagem geneticamente de maneira epistática após o estresse
mutagênico. Neste trabalho, propomos um modelo 3D da estrutura do Pso2, assim como
verificamos a existência de interação genética desta proteína com o complexo MRX e
Kin3, durante o tratamento com CIS. Curvas de sobrevivência para avaliar a sensibilidade
de mutantes simples e duplos dessas proteínas foram realizadas em diferentes
concentrações de cisplatina, por 2 horas e 24 horas. Os simples mutantes pso2Δ, rad50Δ e
mre11Δ apresentaram um aumento de citotoxicidade concentração dependente nos dois
tempos de tratamentos, enquanto os mutantes de kin3Δ e xrs2Δ apresentaram uma
sensibilidade menos pronunciada. Por outro lado, os duplos mutantes kin3Δpso2Δ,
rad50Δpso2Δ, xrs2Δpso2Δ e mre11Δpso2Δ apresentaram ausência de sensibilidade após 2
e 24 horas de tratamento com cispatina. Para entender a reversão da sensibilidade nos
duplos mutantes, avaliamos a expressão das nucleases MRE11, DNA2 e EXO1 nas cepas
xrs2Δ, pso2Δ e xrs2Δpso2Δ. Os resultados da superexpressão de EXO1 e MRE11 em
pso2Δ indicam um substrato comum entre esses genes.
Descrição
Dissertação (Mestrado)-Programa de Pós-Graduação em Biociências, Fundação Universidade Federal de Ciências da Saúde de Porto Alegre.
Palavras-chave
Proteína Pso2, DNA, Saccharomyces cerevisiae