Desenvolvimento e validação de método por LC-MS/MS para determinação de vancomicina em amostras de plasma em papel filtro seco

Abstract

A vancomicina é considerada um agente antimicrobiano eficaz para o tratamento de infecções gram-positivas graves. A importância do monitoramento terapêutico dos antimicrobianos tem levado ao desenvolvimento de técnicas analíticas mais específicas, capazes de identificar com precisão a concentração dessa substância no organismo. Assim, nesse trabalho foi proposta uma metodologia para determinação de vancomicina em amostras de plasma em papel filtro seco e análise por cromatografia líquida acoplada à espectrometria de massas. Uma alíquota de 10 µL de plasma foi transferida para o disco de papel e completamente seca em temperatura ambiente. A extração foi realizada após papel ter sido cortado e transferindo para um micro tubo de polipropileno, utilizando-se tampão fosfato de sódio, e padrão interno polimixina. A mistura foi agitada, centrifugada e uma alíquota de 5 μL foi injetada no sistema UHPLC-MS / MS. A otimização foi conduzida por planejamento experimental e validada; os valores de precisão intra e inter-dia, nos níveis de concentração mais baixos, foram sempre inferiores a 20%, considerando seu desvio padrão relativo. Quanto aos valores de exatidão, estes também foram satisfatórios (acima de 80%). Este método foi aplicado com sucesso a 75 amostras de pacientes submetidos à terapia com vancomicina. Este trabalho conseguiu atingir seus objetivos de otimizar, validar a metodologia analítica e analisar amostras de plasma de pacientes em uso de vancomicina. O método apresentou boa correlação com o método imunoenzimático atual, sendo possível sua aplicabilidade na prática clínica de acompanhamento terapêutico.