Investigação do efeito antitumoral de novos compostos pirimidobenzimidazóis em Câncer de Mama: uma abordagem in vitro

Abstract

A quimioterapia convencional é o principal tratamento para o câncer e beneficia os pacientes na forma de diminuição da reincidência e metástase, além de proporcionar uma maior sobrevida. No entanto, os alvos das drogas quimioterápicas não são inteiramente precisos, o que resulta em alguns efeitos secundários e menor eficiência do tratamento, podendo gerar resistência, recidiva e metástase. No presente estudo, avaliaram-se os efeitos citotóxicos e o mecanismo molecular de uma série de 3-trifluoro(oxo)pyrimido[1,2-a] derivados benzimidazóis (PBZ 1-9) em diferentes linhagens de células de câncer humano. A potencial atividade antitumoral dos compostos foi estudada em linhagens de células humanas de câncer de mama (MCF-7), fígado (HepG-2), bexiga (T-24) e colorretal (HCT-116, HT-29 e Caco-2), além da linhagem não tumoral HEK-293, derivada de células embrionárias de rim. Após o tratamento, a citotoxicidade foi expressa em valores de IC50 e o índice de seletividade (IS) foi calculado através da razão IC50 da HEK-293/IC50 das células tumorais. Os compostos que demonstraram atividades citotóxicas mais relevantes foram submetidos aos demais ensaios biológicos e moleculares. A genotoxicidade foi analisada por eletroforese em gel de única célula (ensaio cometa). A produção de espécies reativas de oxigênio (ERO) e as alterações no potencial de membrana mitocondrial (ΔѰm) foram estudados utilizando sondas específicas de fluorescência, DCFH(2)-DA (2'7'-diclorodiidrofluoresceinadiacetato) e rodamina-123 por citometria de fluxo. O ciclo celular foi determinado por citometria de fluxo e as alterações na expressão da proteína y-H2AX (marcador de dano de DNA) foram examinados por Western Blot. A inibição da enzima topoisomerasel humana pelos compostos foi avaliada utilizando-se o Kit comercial TopoGEN®. Os nossos resultados sugerem que os compostos PBZ 3, 5 e 9 exerceram a maior citotoxicidade nas células MCF-7, com valores de IC50 de 15,41, 19,52 e 8,11µM, respectivamente. O composto mais promissor foi o PBZ 9. A análise de citometria de fluxo indica que esta molécula altera a progressão do ciclo celular, induz a parada em G1 e causa DNA poliploide (>4N). O PBZ 9 interage com a enzima TOPO I, gera a procução ERO, indução de danos no DNA e fosforilação de y-H2AX. O pré-tratamento com N-acetilcisteína (NAC) reverte a produção de ERO observada. Os nossos resultados sugerem que os efeitos encontrados podem ser consequência da interação do PBZ 9 com a enzima TOPO I (ação direta) e pela geração de ERO (ação indireta). Desta forma, o composto PBZ 9 demonstra ser bastante promissor para a continuidade de estudos que comprovem seu potencial uso para terapia do câncer de mama.