Análise da eficácia da membrana amniótica humana como curativo biológico e da sinalização purinérgica na regeneração tecidual

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dc.contributor.advisorWink, Márcia Rosângelapt_BR
dc.contributor.authorNaasani, Liliana Ivet Souspt_BR
dc.date.accessioned2023-02-16T13:20:35Z
dc.date.accessioned2023-10-09T16:32:34Z
dc.date.available2023-02-16T13:20:35Z
dc.date.available2023-10-09T16:32:34Z
dc.date.date-insert2023-02-16
dc.date.issued2022
dc.descriptionTese (Doutorado)-Programa de Pós-Graduação em Ciências da Saúde, Fundação Universidade Federal de Ciências da Saúde de Porto Alegre.pt_BR
dc.description.abstractO tratamento de queimaduras profundas ainda é um desafio na área da medicina regenerativa. A membrana amniótica humana (hAM) é um biomaterial que vem sendo cada vez mais explorado pelo campo da engenharia de tecidos. A fim de promover a regeneração de lesões teciduais, as células estromais mesenquimais (MSCs), podem ser transplantadas na área da lesão em um suporte (scaffold) que mantenha seu potencial terapêutico. Além de uma série de fatores bioativos, as MSCs liberam altas concentrações de adenosina (ADO), o que pode estar relacionado com a alta expressão de ecto-5'-nucleotidase (CD73), cuja principal função é converter ATP extracelular em adenosina imunossupressora, em conjunto com a NTPDase1 (CD39). Essas enzimas são ferramentas poderosas para controlar os efeitos mediados por purinas e pirimidinas extracelulares; no entanto, o papel dos componentes da sinalização purinérgica na regeneração tecidual é pouco compreendido. Neste trabalho avaliamos a segurança e eficácia da membrana amniótica humana como um curativo biológico, na presença ou ausência de células estromais mesenquimais através de modelos in vitro e in vivo e estudamos o papel da sinalização purinérgica como uma das vias responsáveis pela regeneração tecidual. Foi feita a caracterização física e histológica da membrana amniótica humana descelularizada (DhAM) na presença de células estromais mesenquimais derivadas de tecido adiposo (AD-MSCs), assim como a comparação do potencial da DhAM e de um substituto comercial como scaffolds para o cultivo de células estromais mesenquimais isoladas do limbo esclerocorneal (L-MSCs), demonstrando que o cultivo das MSCs na DhAM não alterou a potencialidade de células progenitoras in vitro. O efeito da DhAM na presença e ausência de AD-MSCs foi avaliado no modelo pré-clínico de queimadura de segundo grau profundo, o qual demonstrou a eficácia e segurança deste bioscaffold na regeneração tecidual. O papel dos componentes da sinalização purinérgica durante a cicatrização de feridas foi analisado através do modelo de substitutos de pele auto-montados (SASS), demonstrando a modulação das enzimas CD73, NTPDase1 e NPP1, assim como o potencial terapêutico do nucleotídeo UTP na regeneração tecidual. Nossos resultados confirmam a eficácia da DhAM como scaffold para MSCs e como uma possível terapia futura para o tratamento de queimaduras, bem como a importância de entender o envolvimento de nucleotídeos extracelulares e ectoenzimas na cicatrização de feridas, com a finalidade de oferecer novas estratégias terapêuticas.pt_BR
dc.description.abstract-enThe treatment of deep burns is still a challenge in the field of regenerative medicine. The human amniotic membrane (hAM) is a biomaterial that has been increasingly explored in the field of tissue engineering. In order to promote tissue regeneration, mesenchymal stromal cells (MSCs) can be transplanted into the injured area on a support (scaffold) that maintains their therapeutic potential. In addition to a series of bioactive factors, MSCs release high concentrations of adenosine (ADO), which may be related to the high expression of Ecto-5'-nucleotidase (CD73), whose main function is to convert extracellular ATP into immunosuppressive adenosine, in concert with NTPDase1 (CD39). These enzymes are powerful tools to control the effects mediated by extracellular purines and pyrimidines; however, the role of purinergic signaling components in tissue regeneration is poorly understood. In this work, we evaluated the safety and efficacy of the human amniotic membrane as a biological dressing, in the presence or absence of mesenchymal stromal cells through in vitro and in vivo models, and we studied the role of purinergic signaling as one of the pathways responsible for the tissue regeneration. The physical and histological characterization of the decellularized human amniotic membrane (DhAM) in the presence of adipose tissue-derived mesenchymal stromal cells (AD-MSCs) was performed, as well as the comparison of the potential of DhAM and a commercial substitute as scaffolds for the culture of mesenchymal stromal cells isolated from the sclerocorneal limbus (L-MSCs), demonstrating that the culture of MSCs in DhAM did not alter the potential of progenitor cells in vitro. The effect of DhAM on the presence and absence of AD-MSCs was evaluated in the preclinical model of deep second-degree burn, which demonstrated the efficacy and safety of this bioscaffold in tissue regeneration. The role of purinergic signaling components during wound healing was analyzed using the self-assembled skin substitutes (SASS) model, demonstrating the modulation of CD73, NTPDase1 and NPP1 enzymes, as well as the therapeutic potential of the UTP nucleotide in tissue regeneration. Our results confirm the effectiveness of DhAM as a scaffold for MSCs and as a possible future therapy for the treatment of burns, in addition to the importance of understanding the involvement of extracellular nucleotides and ectoenzymes in wound healing, in order to offer new therapeutic strategies.pt_BR
dc.description.sponsorshipoordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) – Brasil; Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico (CNPq); Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado do Rio Grande do Sul (FAPERGS); Natural Sciences and Engineering Research Council of Canada; Quebec Cell, Tissue and Gene Therapy Network (ThéCell), Canadapt_BR
dc.description.sponsorshipCoordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES), Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico (CNPq), Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado do Rio Grande do Sul (FAPERGS), FAPERGS/CAPES - Programa de Internacionalização da pós-graduação no RS FAPERGS/MS/CNPq/SESRS - Programa Pesquisa Para o SUS (PPSUS), Ministério da Saúde - MS, por intermédio do Departamento de Ciência e Tecnologia - Decit, Departamento de Gestão e Incorporação de Tecnologias e Inovação em Saúde - DGITIS e da Coordenação - Geral do Complexo Industrial da Saúde - CGCIS da Secretaria de Ciência, Tecnologia, Inovação e Insumos Estratégicos em Saúde SCTIE, Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico - CNPq - Plataformas Inovadoras em Terapias Avançadas, Natural Sciences and Engineering Research Council of Canada Quebec Cell, Tissue and Gene Therapy Network (ThéCell), Canadapt_BR
dc.identifier.urihttps://repositorio.ufcspa.edu.br/handle/123456789/2031
dc.language.isopt_BRpt_BR
dc.relation.requiresTEXTO - Adobe Readerpt_BR
dc.rightsAcesso Aberto Após Período de Embargopt_BR
dc.subjectMembrana amnióticapt_BR
dc.subjectCurativos biológicospt_BR
dc.subjectCélulas estromais mesenquimaispt_BR
dc.subjectQueimaduraspt_BR
dc.subjectSubstitutos para a pelept_BR
dc.subjectSinalização purinérgicapt_BR
dc.subject[en] Amnionen
dc.subject[en] Biological Dressingsen
dc.subject[en] Mesenchymal Stem Cellsen
dc.subject[en] Burnsen
dc.subject[en] Skin, Artificialen
dc.titleAnálise da eficácia da membrana amniótica humana como curativo biológico e da sinalização purinérgica na regeneração tecidualpt_BR
dc.typeTesept_BR
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