Cubossomas de Monoleína para entrega de Temozolomida e silenciamento de Nek4 como estratégias terapêuticas para superar a resistência tumoral do glioblastoma

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dc.contributor.advisorMoura, Dinara Jaquelinept_BR
dc.contributor.advisor-coOliveira, Tiago Espinosa dept_BR
dc.contributor.authorPinheiro, Ana Carolina Silvapt_BR
dc.contributor.departmentBiomedicinapt_BR
dc.date.accessioned2025-07-18T19:58:45Z
dc.date.available2025-07-18T19:58:45Z
dc.date.date-insert2025-07-18
dc.date.issued2025-06-24
dc.descriptionTrabalho de Conclusão de Curso (Graduação) - Biomedicina, Fundação Universidade Federal de Ciências da Saúde de Porto Alegre.pt_BR
dc.description.abstractO câncer é uma importante preocupação de saúde pública devido a sua complexidade e impacto social. Entre os tumores do sistema nervoso central, os gliomas — especialmente o glioblastoma (GBM) — são agressivos e apresentam baixa taxa de sobrevivência, mesmo com os tratamentos padrão de cirurgia, radioterapia e quimioterapia. O GBM é difícil de tratar devido a sua localização no cérebro e à resistência às terapias convencionais. O tratamento atual com temozolomida (TMZ) e radioterapia enfrenta desafios pela resistência das células tumorais. Assim, há necessidade urgente de novas estratégias terapêuticas para melhorar o prognóstico dos pacientes. A proteína Nek4 surge como um alvo promissor, pois regula mitose, senescência, resposta a danos no DNA e função mitocondrial. Além disso, novos sistemas de liberação de fármacos (DDS), como os cubossomas de monoleína, têm sido estudados para melhorar a entrega, eficácia e segurança da TMZ. Este estudo desenvolveu e caracterizou cubossomas de monoleína com e sem TMZ, avaliando a citotoxicidade na linhagem de glioblastoma U87-WT e investigando o potencial terapêutico da Nek4. Os cubossomas foram analisados por DLS e cryo-TEM. Células U87 com knockout de Nek4 (Nek4-KO) foram construídas e validadas por qRT-PCR. Ensaios de citotoxicidade foram realizados utilizando: cubossomas brancos e carregados com TMZ em células de glioblastoma U87-WT; os agentes indutores de dano ao DNA, TMZ e zeocina, em células U87-WT e Nek4-KO; e, adicionalmente, a presença ou ausência de Spautin-1 em células U87-WT. A presença de TMZ aumentou a polidispersidade e agregação dos cubossomas. Cubossomas brancos e carregados mostraram citotoxicidade dependente de tempo e dose, com janela terapêutica estreita. O pré-tratamento com Spautin-1 sensibilizou as células WT à TMZ e zeocina, efeito ligado à inibição de Nek4 e autofagia. Embora o knockout de Nek4 não tenha alterado o IC50 , ensaios de viabilidade indicaram respostas diferentes ao longo do tempo, sugerindo mecanismos compensatórios. Esses resultados destacam a importância de estratégias moleculares e nanotecnológicas para combater a quimiorresistência no glioblastoma e apoiam o desenvolvimento de terapias direcionadas a Nek4.pt_BR
dc.description.abstract-enCancer is a global public health concern due to its complexity and societal impact. Among central nervous system tumors, gliomas—especially glioblastoma (GBM)—are highly aggressive with low patient survival rates despite standard treatments like surgery, radiotherapy, and chemotherapy. GBM’s location in the brain and resistance to conventional therapies complicate treatment. Current therapies using the chemotherapeutic agent temozolomide (TMZ) and radiotherapy face challenges due to tumor cell resistance. Thus, new therapeutic strategies are urgently needed to improve outcomes. The Nek4 protein is a promising target because of its role in mitosis regulation, senescence, DNA damage response, and mitochondrial function. Additionally, novel Drug Delivery Systems (DDS), such as monolein cubosomes, have gained interest to enhance TMZ delivery, efficacy, and safety. This study developed and characterized monolein cubosomes with and without TMZ, assessing their cytotoxicity in U87-WT glioblastoma cells and evaluating Nek4 as a therapeutic target. Cubosomes were analyzed by DLS and cryo-TEM. Nek4 knockout (Nek4-KO) U87 glioma cells were created and validated via qRT-PCR. Cytotoxicity assays were performed using blank and TMZ-loaded cubosomes in U87-WT cells; DNA-damaging agents (TMZ and zeocin) in both WT and Nek4-KO cells; and Spautin-1, applied with or without co-treatment, in WT cells. Additionally, TMZ increased cubosome polydispersity and aggregation, suggesting drug-induced destabilization. Both blank and TMZ-loaded cubosomes showed timeand dose-dependent cytotoxicity within a narrow therapeutic window. Spautin-1 pre-treatment sensitized WT cells to TMZ and zeocin, linked to Nek4 and autophagy inhibition. Although Nek4 knockout didn’t significantly change IC50 values, viability assays showed different responses over time, suggesting compensatory mechanisms in Nek4-deficient cells. These results highlight the importance of combining molecular targeting and nanotechnology to combat glioblastoma chemoresistance and support further Nek4-targeted therapy development.en
dc.identifier.urihttps://repositorio.ufcspa.edu.br/handle/123456789/3345
dc.language.isopt_BRpt_BR
dc.relation.requiresTEXTO - Adobe Readerpt_BR
dc.rightsAcesso Embargadopt_BR
dc.rights.urihttp://creativecommons.org/licenses/by-nc-sa/3.0/br/
dc.subjectGlioblastomapt_BR
dc.subjectQuinases Relacionadas a NIMApt_BR
dc.subjectCubossomaspt_BR
dc.subject[en] Glioblastomaen
dc.subject[en] NIMA-Related Kinasesen
dc.subject[en] Cubosomesen
dc.titleCubossomas de Monoleína para entrega de Temozolomida e silenciamento de Nek4 como estratégias terapêuticas para superar a resistência tumoral do glioblastomapt_BR
dc.typeTrabalho de conclusão de graduaçãopt_BR
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