Oliveira, Alexandre Tavares Duarte deOliveira, Iáskara Vieira de2019-07-292023-10-092019-07-292023-10-092017https://repositorio.ufcspa.edu.br/handle/123456789/691Dissertação (Mestrado)-Programa de Pós-Graduação em Ciências da Saúde, Fundação Universidade Federal de Ciências da Saúde de Porto Alegre.Uma das principais causas da baixa viabilidade de oócitos de ratos após a criopreservação é a seleção inadequada de gametas através de critérios morfológicos. O desenvolvimento e a validação de novos métodos de seleção de CCOs associados a criopreservação almejam identificar os gametas competentes propiciando resultados de fecundação e desenvolvimento embrionário semelhantes aos obtidos in vivo. O objetivo desse trabalho foi determinar as taxas de clivagem e desenvolvimento embrionário após a ativação partenogenética de CCOs selecionados por diferentes concentrações de BCB e criopreservação. Fêmeas pré-puberes Wistar foram superovuladas com 20 UI de eCG intra peritonial (IP) e submetidas a eutanásia após 48 horas. Os ovários foram retirados da cavidade abdominal e mantidos em PBSm a 37˚C até o momento da escarificação para liberação dos CCOs. A observação e a seleção morfológica dos CCOs foram realizadas com auxílio de estereomicroscópio. No primeiro experimento, CCOs foram selecionados morfologicamente e incubados, em grupos, por 1 h em meio M16 (sem vermelho fenol) contendo BCB, com diferentes concentrações (13 μM, 16 μM e 20 μM) baseadas em Alcoba et al. (2013) (ALCOBA, DD et al. Selection of Rattus norvegicus oocytes for in vitro maturation by brilliant cresyl blue staining. Zygote, v. 21, p. 238-245, 2013). Após 30 hs de maturação in vitro (MIV), foi realizada a ativação partenogenética com posterior acompanhamento do desenvolvimento embrionário in vitro. O grupo controle não foi exposto ao corante BCB. Baseado no melhor resultado da primeira etapa, o segundo experimento foi realizado com a seleção de CCOs pela morfologia e na sequência com a incubação em meio com 13 μM de BCB. A eficácia da seleção somada ao efeito da vitrificação dos CCOs foi avaliada pelo desenvolvimento embrionário in vitro após a ativação partenogenética. Os CCOs foram divididos em 4 grupos: BCB (+), BCB (-) , controle I (onde os CCOs foram selecionados morfologicamente, imediatamente maturados in vitro, ativados partenogeneticamente e mantidos in vitro para o desenvolvimento embrionário, sem vitrificação prévia) e controle II (onde os CCOs foram selecionados morfologicamente, vitrificados, maturados in vitro com avaliação do desenvolvimento embrionário in vitro após a ativação partenogenética). Após sete dias vitrificados, os CCOs foram reaquecidos, submetidos a MIV e a ativação partenogenética. Taxas de clivagem, mórula e blastocisto foram observadas durante 5 dias. No primeiro experimento, o grupo BCB 13 μM apresentou taxa de clivagem (41,98% - 55/131) similar aos grupos BCB 16 μM (49,55% - 55/111), controle (47,22% - 51/108) e BCB 20 μM (36,70% - 40/109). Por outro lado, apresentou níveis superiores estatisticamente de desenvolvimento embrionário do estádio de clivagem a mórula (65,45% - 36/55) quando comparado aos demais grupos. No segundo experimento, as taxas de clivagem (47,05% - 72/153) e mórula (33,55% - 51/153) do grupo controle não vitrificado foram superiores aos demais grupos. Entretanto, quando se compara as taxas de desenvolvimento de mórula a partir dos clivados entre os grupos 6 controle vitrificado e BCB (+), este último apresenta resultados estatisticamente melhores (19,23% - 5/26 e 64,7% - 11/17, respectivamente). Os resultados obtidos em nossos experimentos indicam que o teste BCB pode selecionar os gametas mais aptos a processos de manipulação in vitro, como a vitrificação, a maturação oocitária e o desenvolvimento embrionário. Entretanto, em virtude da complexidade dos eventos envolvidos, são necessários mais informações para determinar as condições adequadas para a seleção e a vitrificação de CCOs de Rattus norvegicus.pt-BRAcesso Aberto ImediatoVitrificaçãoAzul Cresil BrilhanteComplexo Cumulus-OócitosEmbriõesRatos[en] Vitrification[en] Coloring Agents[en] Embryonic Structures[en] RatsDissertação