Mattevi, Vanessa SuñéMolina, Freddy David Moposita2025-04-152025-04-152024-08-30https://repositorio.ufcspa.edu.br/handle/123456789/3279Dissertação (Mestrado)-Programa de Pós-Graduação em Biociências, Fundação Universidade Federal de Ciências da Saúde de Porto Alegre.Apesar de sua alta prevalência e natureza benigna na maioria dos casos, a investigação dos nódulos da tireoide ainda apresenta potenciais armadilhas diagnósticas, especialmente em casos com citologia indeterminada. Este estudo visa verificar a prevalência de mutações nos genes BRAF, RAS e rearranjos RET/PTC em pacientes submetidos à punção aspirativa por agulha fina por ultrassonografia (PAAF-US) para nódulos tireoidianos. A extração de DNA e RNA total foi realizada com Trizol, seguida da avaliação da proporção de células epiteliais tireoidianas através da expressão do gene de citoqueratina 7. As mutações pontuais foram detectadas por análise de DNA utilizando sequenciamento de Sanger. Para os rearranjos, se desenharam primers para flanquear o ponto de fusão, e os produtos de PCR das fusões gênicas se visualizaram através de eletroforese em gel de agarose. Os resultados positivos foram confirmados por sequenciamento de Sanger dos produtos de PCR. Um total de 231 nódulos tireoidianos em 220 pacientes foram avaliados, sendo 86.8% do sexo feminino e com uma idade média de 55.6±13.9 anos. A distribuição citológica foi a seguinte: 4.8% (n = 11) não diagnósticos (Bethesda I); 61.0% (n=141) benignos (Bethesda II); 13.9% (n=32) atipias de significado indeterminado (AUS) (Bethesda III); 12.1% (n=28) neoplasia folicular (FN) (Bethesda IV); 4.3% (n=10) suspeitos de malignidade (Bethesda V); e 3.9% (n=9) malignos (Bethesda VI). Para a análise molecular, foram incluídas amostras que continham quantidade suficiente de ácidos nucleicos e uma proporção de células epiteliais superior a 10%. Portanto, foram obtidos DNA e RNA de qualidade de 200 amostras. As mutações BRAF, RAS e rearranjos RET/PTC foram identificadas em 14% das 200 amostras. A frequência das mutações BRAF-like foi de 5.5%, detectadas em 9 dos 17 nódulos malignos (52.9%) e em um nódulo benigno (0.7%). Quatorze mutações do tipo RAS-like foram identificadas em nódulos benignos (57.1% HRAS, 21.5% NRAS e 21.5% KRAS) e apenas uma estava presente em um nódulo maligno (5.9%). Quando consideramos os nódulos com citologia indeterminada (Bethesda III e IV, n = 53), 9 mutações foram detectadas, 6 associadas à histologia benigna (todas RAS-like), 1 com histologia maligna (BRAF-like) e 2 ainda não operados, portanto, sem diagnóstico histopatológico. Esta pesquisa conclui que a presença da mutação BRAF V600E pode ser útil para apoiar o diagnóstico de câncer de tireoide, devido ao seu alto valor preditivo positivo, uma vez que 89% dos nódulos com mutação BRAF V600E eram malignos. Além disso, critérios clínicos devem ser estabelecidos para determinar quais nódulos com mutações do tipo RAS-like requerem acompanhamento mais próximo, particularmente aqueles com citologia indeterminada.pt-BRAcesso Aberto ImediatoNódulo da Glândula TireoideMutaçãoNeoplasias da Glândula TireoideNódulos IndeterminadosTécnicas de Diagnóstico Molecular[en] Thyroid Nodule[en] Mutation[en] Thyroid Neoplasms[en] Indeterminate Nodules[en] Molecular Diagnostic TechniquesDissertação