Moura, Dinara JaquelineAzevedo, Thais Raupp2021-11-292023-10-092021-11-292023-10-092021https://repositorio.ufcspa.edu.br/handle/123456789/1806Dissertação (Mestrado)-Programa de Pós-Graduação em Biociências, Fundação Universidade Federal de Ciências da Saúde de Porto Alegre.As pontes intercadeias (interstrand crosslink, ICL) entre compostos e DNA são lesões bastante citotóxicas que afetam os processos de replicação e transcrição da molécula de DNA.. A cisplatina (CIS), um antineoplásico, é um agente bifuncional que se liga covalentemente às bases do DNA podendo formar ICLs. A proteína Pso2 foi identificada inicialmente em Saccharomyces. cerevisiae e demonstrou estar envolvida na reparação de danos induzidos por agentes bifuncionais, executando função de exonuclease e endonuclease. O complexo MRX (Mre11, Rad50 e Xrs2) está envolvido na resposta a danos no DNA e uma das funções bioquímicas desse complexo é a capacidade de realizar incisões no esqueleto fosfodiéster do DNA com sua atividade endonucleásica. As cepas mutantes do gene KIN3 são sensíveis a diferentes agentes indutores de dano ao DNA e as proteínas Kin3 e MRX interagem geneticamente de maneira epistática após o estresse mutagênico. Neste trabalho, propomos um modelo 3D da estrutura do Pso2, assim como verificamos a existência de interação genética desta proteína com o complexo MRX e Kin3, durante o tratamento com CIS. Curvas de sobrevivência para avaliar a sensibilidade de mutantes simples e duplos dessas proteínas foram realizadas em diferentes concentrações de cisplatina, por 2 horas e 24 horas. Os simples mutantes pso2Δ, rad50Δ e mre11Δ apresentaram um aumento de citotoxicidade concentração dependente nos dois tempos de tratamentos, enquanto os mutantes de kin3Δ e xrs2Δ apresentaram uma sensibilidade menos pronunciada. Por outro lado, os duplos mutantes kin3Δpso2Δ, rad50Δpso2Δ, xrs2Δpso2Δ e mre11Δpso2Δ apresentaram ausência de sensibilidade após 2 e 24 horas de tratamento com cispatina. Para entender a reversão da sensibilidade nos duplos mutantes, avaliamos a expressão das nucleases MRE11, DNA2 e EXO1 nas cepas xrs2Δ, pso2Δ e xrs2Δpso2Δ. Os resultados da superexpressão de EXO1 e MRE11 em pso2Δ indicam um substrato comum entre esses genes.pt-BRAcesso Aberto ImediatoProteína Pso2DNASaccharomyces cerevisiaeDissertação