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Title: Investigação da variabilidade do gene ACKR1 em doadores de sangue de Porto Alegre/RS
Authors: Höher, Gabriela
metadata.dc.contributor.advisor: Almeida, Silvana de
metadata.dc.contributor.advisor-co: Fiegenbaum, Marilu
Issue Date: 2017
Keywords: Genes
Doadores de Sangue
[en] Blood Donors
Abstract: Os sistemas de grupos sanguíneos são caracterizados pela presença de antígenos na membrana eritrocitária. Estes antígenos possuem características polimórficas e funcionais originadas a partir de mudanças ao nível genético que variam desde polimorfismos de um único nucleotídeo (SNPs) a trocas gênicas como inversões, deleções, inserções, splicing alternativo, dentre outros mecanismos. O sistema de grupo sanguíneo Duffy é clinicamente significativo, podendo estar relacionado com reação hemolítica transfusional e doença hemolítica do recém-nascido. Inicialmente, revisamos as bases moleculares do gene ACKR1, que codifica a glicoproteína DARC, responsável pela expressão dos antígenos Duffy. Estudos prévios já identificaram variantes genéticas que determinam a expressão fraca ou nula dos antígenos Fya e Fyb e, no presente trabalho, objetivamos realizar um rastreamento de variantes genéticas que possam estar associadas com discrepâncias entre fenótipo-genótipo em doadores de sangue de Porto Alegre, Rio Grande do Sul. A amostra, composta por 382 doadores voluntários de sangue, foi determinada por hemaglutinação e discriminação alélica dos SNPs c.125G>A, c.265C>T e c.1-67T>C por PCR em tempo real. A partir da análise de correlação entre o fenótipo e o genótipo, nós sequenciamos o gene ACKR1 em 11 doadores (2,88%) que apresentaram resultados discordantes. Os dados obtidos no sequenciamento foram avaliados in silico, através dos programas Poly-Phen2, SIFT e RegulomeDB. Nossa investigação detectou 11 variantes genéticas, das quais 4 (c.-541C>T, c.21+150C>T, c.22-58A>G e c.298G>A SNPs) discutimos o aparente efeito funcional na estrutura e expressão da proteína DARC. Em conclusão, eventos moleculares podem resultar em genótipo e fenótipo eritrocitário sendo aparentemente discrepante. Dessa forma, estudos adicionais, que caracterizem o impacto funcional de variantes genéticas associadas à predição de novos alelos de grupos sanguíneos, são fundamentais na implementação de técnicas moleculares seguras para a genotipagem dos antígenos de pacientes e doadores em bancos de sangue. O aperfeiçoamento das metodologias moleculares pode contribuir na prática transfusional através do manejo de unidade de sangue apropriadas para cada indivíduo.
metadata.dc.description.abstract-en: Blood group systems are characterized by the presence of antigens in the erythrocyte membrane. These antigens have polymorphic and functional characteristics originated from changes at the genetic level that range from single nucleotide polymorphisms (SNPs) to gene exchanges, inversions, deletions, insertions, alternative splicing, among other mechanisms. Duffy blood group system is clinically significant because can cause haemolytic transfusion reactions and haemolytic disease of the fetus and newborn. Initially, we revised the molecular basis of the ACKR1 gene that encodes the DARC glycoprotein, responsible for Duffy antigens expression. Previous studies have already been identified genetic variants that determine the weak or null Fya and Fyb antigen expression and the present work, we aimed a screening of genetic variants that may be associated with discrepancies between phenotype-genotype in blood donors from Porto Alegre, Rio Grande do Sul. The sample composed by 382 voluntary blood donors was determined by haemagglutination and allelic discrimination of the c.125G>A, c.265C>T and c.1-67T>C SNPs in real-time PCR. From correlation between phenotype-genotype results, we sequenced the entire ACKR1 gene in 11 (2.88%) donors with inconclusive results. The data obtained in the sequencing were evaluated in silico, through the Poly-Phen2, SIFT and RegulomeDB tools. Our investigation accounted 11 genetic variants from which 4 (c.-541C>T, c.21+150C>T, c.22-58A>G and c.298G>A SNPs) we discuss the apparent functional effect on structure and expression of DARC protein. Overall, molecular events result in the red blood cell genotype and phenotype being apparently discrepant by gathering more information. In conclusion, further studies characterizing the functional impact of genetic variants associated with the prediction of new blood group alleles are critical in the implementation of molecular techniques for secure antigen genotyping of patients and donors in blood banks. The use of effective molecular methodologies can optimize transfusion practices through appropriate blood units for each individual.
Description: Dissertação (Mestrado)-Programa de Pós-Graduação em Biociências, Fundação Universidade Federal de Ciências da Saúde de Porto Alegre.
metadata.dc.rights: Atribuição-NãoComercial-CompartilhaIgual 4.0 Internacional
metadata.dc.relation.requires: Adobe Reader
metadata.dc.date.date-insert: 2018-09-13
metadata.dc.type: Dissertação
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