Navegando por Autor "Ferreira Neto, Luiz Carlos"

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    Investigação de metodologias alternativas para a extração de ácidos nucleicos
    (2022) Ferreira Neto, Luiz Carlos ; Merib, Josias de Oliveira; Trentin, Danielle da Silva
    O presente trabalho teve como base a proposta da investigação de uma metodologia analítica alternativa para a extração de DNA. Como relatado em diversos estudos, a extração de DNA apresenta-se como um ponto crítico nas determinações dessa biomolécula em diversos tipos de amostras. Desta forma, a metodologia de extração baseada na microextração em gota única (SDME, (do inglês single drop microextraction) utilizando líquidos iônicos magnéticos (MILs, do inglês magnetic ionic liquids) como fase extratora foi proposta. Essa metodologia consiste em um procedimento experimental eficiente e ambientalmente correto de preparo de amostras, o qual apresenta baixo custo, consumo reduzido de solventes e simplicidade de aplicação. Assim, o objetivo deste estudo foi desenvolver uma metodologia alternativa e com alta frequência analítica para a extração de DNA baseada em microextração com a aplicação de líquidos iônicos magnéticos. Foram sintetizados e caracterizados os MILs de ([P6,6,6,14+ ][Mn(II)(hfacac)3 − ]), ([P6,6,6,14+ ][ Ni(II)(hfacac)3 − ]) e ([P6,6,6,14+ ][Co(II)(hfacac)3 − ]) e utilizados como solvente de extração na técnica SDME seguido por análise utilizando reação em cadeia da polimerase (PCR, do inglês polymerase chain reaction) e eletroforese em gel. Além disso, um procedimento experimental no qual foram permitidas extrações simultâneas em várias amostras também foi proposto e avaliado. Em um primeiro momento, amostras aquosas fortificadas com quantidades conhecidas de DNA para verificar a viabilidade de extração. Após isso, foram realizadas extrações em amostras de saliva, sangue e urina sendo obtidos resultados bastante satisfatórios principalmente para as matrizes de sangue e saliva. O método desenvolvido se mostrou com alta frequência analítica e capaz de extrair DNA de amostras biológicas complexas. Adicionalmente, o método desenvolvido foi aplicado com sucesso na plataforma de extração projetada ao longo deste trabalho, ao passo que mostra um grande potencial para a investigações futuras em PCR em tempo real, bem como para o aprimoramento do aparato proposto.