TESES E DISSERTAÇÕES

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Navegando TESES E DISSERTAÇÕES por Autor "Aguirre, Tanira Alessandra Silveira"

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    Avaliação do potencial tecnológico de hidrogéis de quitosana reticulados com genipina na entrega oral de fármacos
    (Wagner Wessfll, 2022) Kaufmann, Gabriela; Aguirre, Tanira Alessandra Silveira; Goettert, Márcia Inês
    A quitosana, polímero biodegradável extraído a partir da quitina, vem se destacando na indústria farmacêutica como carreador de fármacos. A genipina, composto natural extraído a partir do Jenipapo, atua como agente reticulante natural. Sendo assim, o presente trabalho objetivou desenvolver e caracterizar hidrogéis de quitosana reticulados com genipina e avaliar in vitro o perfil de liberação do diclofenaco de sódio. Além disso, objetivou-se avaliar a citotoxicidade in vitro dos componentes utilizados na obtenção dos hidrogéis, bem como de frações liberadas contendo o fármaco em diferentes meios de dissolução. A formulação obtida foi caracterizada em termos de morfologia macroscópica e microscopia, perfil termoquímico e perfil de intumescimento. O perfil de liberação do fármaco foi analisado através de ensaio de dissolução in vitro em pH 1,2 e 6,8, e também em fluidos intestinais simulados em pH 3,0 e 7,0. A citotoxicidade foi avaliada através do teste de MTT em células MRC5 e Caco-2, com tratamentos de 6 e 24 h. A formulação final apresentou as seguintes concentrações: quitosana 1,250% (m/v), genipina 0,185% (m/v) e diclofenaco sódico 0,250% (m/v). A partir dos ensaios caracterizamos o hidrogel como um dispositivo altamente poroso, com perfil de intumescimento e perfil de liberação dependentes de pH e com características intrínsecas de promoção de proteção entérica. A liberação em pH ácido foi mínima (10% ± 0,43) em comparação à liberação em 5 h em pH próximo ao neutro (70% ± 13,5). Testes de citotoxicidade dos componentes e da formulação revelaram propriedades não tóxicas em ambas linhagens celulares, apresentando viabilidades entre 75% (± 5,94) e 106% (± 3,71) nas duas concentrações mais baixas testadas. A formulação desenvolvida neste estudo é biocompatível e possui potencial para liberação controlada de diclofenaco de sódio administrado pela via oral.
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    Desenvolvimento de um método para extrair DNA total de amostras biológicas empregando uma substância caotrópica e vidro reciclado como fonte de sílica
    (Wagner Wessfll, 2021) Naranjo, Cesar David Guerra; Frazzon, Ana Paula Guedes; Aguirre, Tanira Alessandra Silveira
    As relações funcionais e interacionais entre ácidos nucléicos e proteínas são o arcabouço estrutural para estudos de biologia molecular. Nesse contexto, a obtenção de um material genético de alta qualidade é uma etapa crítica para aplicações downstream. Diante disso, desenvolvemos um método de extração para obtenção de DNA de alta qualidade de forma segura, ecológica e aplicável para diversos tipos de amostras biológicas. Para isso, três tipos diferentes de vidro reciclado de laboratório à base de borosilicato foram usados como fonte de sílica e iodeto de sódio como sal caotrópico, que se tornou uma ferramenta poderosa para lise celular e extração de DNA. Este método foi usado para extrair o DNA de diferentes amostras biológicas, incluindo amostras fecais e culturas de bactérias e fungos. Todas as amostras também foram analisadas com um kit comercial para comparação dos resultados. O controle de qualidade dos DNAs extraídos baseou-se na quantificação da concentração e pureza por espectrofotometria, e a integridade foi determinada por eletroforese em gel de agarose. Adicionalmente, os DNAs extraídos foram submetidos à amplificação da Reação em Cadeia da Polimerase (PCR), para verificação da viabilidade para processos downstream. Os resultados mostraram que nosso método apresentou maior pureza e integridade total dos DNAs extraídos em comparação ao kit comercial, e o rendimento não foi estatisticamente diferente. Finalmente, o novo método de extração de DNA pode ser reproduzível e aplicável em um processo posterior como PCR.
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    Otimização, caracterização e estudo de estabilidade de uma formulação de hidrogel termorresponsivo para o tratamento da disfunção erétil
    (2023-09-28) Frohlich, Anna Lúcia; Aguirre, Tanira Alessandra Silveira; Programa de Pós-Graduação em Biociências
    A disfunção erétil (DE) é a dificuldade de atingir ou manter o estágio de ereção do pênis. A principal terapia da DE são os iPDE5, como principal exemplo o Viagra®, que apresenta algumas contraindicações e efeitos adversos potencialmente perigosos; além de que cerca de 35% dos pacientes não respondem ao tratamento. PNPP19 é uma terapia inovadora para o tratamento da DE, sendo uma molécula peptídica instável e sujeita a diversas reações de degradação, fazendo-a perder sua atividade biológica. Por isso, partindo de uma formulação prévia incompatível com a forma de administração, este trabalho teve como objetivo otimizar uma formulação que fosse capaz de melhorar a estabilização do peptídeo PnPP19 e que facilite a sua administração tópica, incrementando viscosidade. Para isso, foram realizados ensaios de otimização sistemática da formulação, de forma a adequar a Tsolgel. Diferentes géis a base do polímero Poloxamer 407 foram preparados para a incorporação do peptídeo PnPP19. Esses géis possuem característica termorreversíveis e podem ter sua Tsolgel modulada pela modificação na concentração dos componentes. As formulações consideradas promissoras em termos de consistência e temperatura de gelificação foram avaliadas a 25 ºC por até 12 meses e a quantificação do peptídeo foi realizada por um método de HPLCDAD desenvolvido e validado. Ao final, duas formulações foram consideradas para avaliações adicionais da estabilidade do peptídeo a 5 e 40 ºC, além da caracterização reológica e de textura. A formulação atual padrão utilizada pela empresa Biozeus, possui uma consistência fluida sem formar gel e apresentou comportamento reológico Newtoniano a 35 ºC; enquanto que a formulação proposta após a otimização, forma gel à temperatura ambiente e apresentou comportamento reológico não-Newtoniano (à 35 ºC). Os estudos de estabilidade mostraram uma influência positiva do tampão fosfato na manutenção da integridade do peptídeo, apresentando resultados superiores de estabilidade em comparação com outros tampões. Também, é mostrado que o aumento da viscosidade e consequente redução da Tsolgel é importante para garantir a estabilidade para o peptídeo. No estudo de adição de aditivos de proteção microbiológica, foi mostrado que o Nipaguard® SCE, com ou sem ácido ferúlico como antioxidante, se mostrou o único sistema conservante capaz de proteger a formulação contra o crescimento de bactérias e fungos. Na avaliação de estabilidade dessas novas formulações foi mostrado que as formulações atingiram níveis similares de degradação. Conclui-se que a formulação otimizada que apresenta consistência adequada para facilitar a aplicação tópica, apresentou melhores resultados de estabilização em relação à fórmula padrão nas condições avaliadas de 5, 25 e 40 ºC. Para a proteção microbiana, foi evidenciado Nipaguard® SCE como sendo o melhor conservante avaliado para essa aplicação.