PPGBIO - Dissertações

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Navegando PPGBIO - Dissertações por Autor "Alves, Mônica Silva"

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    Investigação de metodologias alternativas para extração de ácidos nucleicos: microextração em gota única de RNA utilizando um líquido iônico magnético como fase extratora
    (2023) Alves, Mônica Silva; Merib, Josias de Oliveira; Lopes, Paulo Guilherme Markus
    As técnicas de análise molecular para a determinação de ácidos nucleicos vêm se destacando cada vez mais nos protocolos de pesquisa e diagnóstico. O sucesso dessas técnicas se deve ao seu alto nível de sensibilidade e especificidade que as tornam reprodutíveis e confiáveis. Ainda assim, para obter um diagnóstico de qualidade é necessário realizar cuidadosamente o preparo das amostras, incluindo a etapa da extração do analito. A extração de RNA é particularmente delicada por se tratar de uma biomolécula muito instável. A utilização de Líquidos Iônicos Magnéticos (MILs) em técnicas de preparo de amostras está sendo investigada como possível alternativa para a extração dessas biomoléculas, correspondendo a procedimentos de baixo custo, com menor toxicidade que alguns protocolos tradicionais, e que requerem significativamente menos etapas para realização. Este estudo teve por objetivo investigar a capacidade de extração do MIL [P66614] + [Ni(hfacac)3] - , sintetizado pelo grupo de pesquisa, na captura de RNA total. Para tanto, foram utilizadas amostras aquosas contendo RNA já isolado obtido através do hipotálamo de camundongos machos e posteriormente diluído a fim de obter a concentração desejada para os experimentos. Além disso, foi utilizada uma plataforma de extração para ampliar a frequência analítica. As medições analíticas foram realizadas através da reação em cadeia da polimerase via transcriptase reversa quantitativa (RT-qPCR). Os resultados indicam que o MIL foi capaz de extrair o RNA de soluções com concentrações tão baixas quanto 3 ng/μL, apresentando reprodutibilidade em 6 ng/μL. Resultados preliminares indicaram que o MIL não inibiu a amplificação na PCR e que tempos longos de extração podem acarretar back-extraction. Este foi o primeiro estudo a utilizar microextração em gota única (SDME) com MIL na extração de RNA. Futuros estudos ainda são necessários para avaliar a capacidade de extração desse MIL na presença de interferentes e em matrizes complexas.